通過酵母雙雜篩選實驗，進一步研究AaWRKY9蛋白功能，結果篩選到了與AaWRKY9互作的AaJAZ9蛋白，并通過Y2H、BiFC、CoIP等進行了驗證確認。JAZs是JA介導的植物相應中的負向調控因子，在毛狀體和老葉中高表達，在芽尖和嫩葉中表達量低。為確認AaJAZ9是否抑制了AaWRKY9在促進青蒿素積累過程中的轉錄***功能，通過雙熒光素酶報告基因檢測實驗發(fā)現(xiàn)，當AaWRKY9與AaJAZ9共表達時，其轉錄活性被抑制，而使用MeJA處理后，這種抑制作用被抵消，且AaWRKY9轉錄活性增強，反向驗證實驗結果一致。說明JA可以通過降解JAZ9，提高AaWRKY9轉錄活性，促進青蒿素生物合成。酵母單雜交/雙雜交文庫構建簡述酵母雙雜交。天津生物技術酵母文庫
酵母雙雜交文庫：植物從營養(yǎng)生長到生殖生長時相的不可逆轉變，是植物生命周期中的一個關鍵階段，是植物生存和繁殖至為關鍵的重要事件。在開始繁殖之前，許多多年生木本植物經歷了一個相當漫長的幼年時期。與模式植物（如擬南芥）相比，針葉樹通常具有非常長的生命周期。盡管在模式植物開花時間控制研究上取得相當大的進展，但對多年生樹木，特別是針葉樹年齡信號的調控機制仍知之甚少。因此，深入研究林木年齡信號對生殖發(fā)育過程的影響具有重要的理論和實踐意義。河北建庫酵母文庫酵母單雜交文庫篩選選歐易生物技術可靠服務高效。
酵母雙雜交文庫：瘧疾是人類**古老的疾病之一，每年4月25日是世界防治瘧疾日，瘧疾目前仍是公眾健康所面臨的**嚴重威脅之一。基于青蒿素的聯(lián)合處理法（ACTs）是WHO推薦的比較好處理方案。因發(fā)現(xiàn)具有抗瘧作用的青蒿素，挽救了數(shù)百萬人的生命，屠呦呦教授獲得了2015年諾貝爾生理或醫(yī)學獎，從青蒿中分離出的青蒿素被推薦作為抗瘧疾的優(yōu)先藥物。之前研究表明，茉莉酸（JA）介導促成的青蒿素積累依賴于光，轉錄因子HY5也通過參與光信號調控促進青蒿素合成。然而，光與JA相互作用機制及其對青蒿素生物合成調控的潛在機理仍未得到解決。
通過傳統(tǒng)的酵母雙雜交系統(tǒng)，以PtDAL1為誘餌，篩選樣本來源于不同年齡段的油松cDNA文庫。將獲得的陽性克隆，10個一組，挑選到1個96孔板的PCR板孔中，獲得10*96個陽性克隆的96孔板。以其中陽性克隆mix為模板，進行PCR擴增，并將所有的PCR產物進行純化。使用純化后的PCR產物，進行打斷后構建二代測序文庫，通過NGS測序，獲得6G的陽性克隆數(shù)據(jù)。通過分析二代測序數(shù)據(jù)，獲得陽性克隆基因信息（去冗余后獲得135個互作子，包含21個TFs，2個TRs及酶類、熱激蛋白、RNA結合等蛋白，部分見表1）。挑選重要的候選基因進行一對一驗證（圖2）。與擬南芥中同源基因AGL6的蛋白互作網絡進行比對分析。對DAL1互作蛋白（DIPs）的基因表達譜、啟動子中的順勢作用元件功能進行分析，并對DIPs進行GO注釋（圖3）。綜合生信分析結果，構建針葉樹老化途徑的調控模型（圖4）。酵母文庫構建的目的酵母的做法。
酵母雙雜交篩選實驗：為進一步了解LEA3蛋白在干旱脅迫下調控植物生長和增強抗旱性的分子機制，本研究以干旱脅迫條件下的棉花根莖葉為材料，構建了棉花干旱脅迫酵母文庫。并以GhLEA3為誘餌，采用酵母雙雜交篩選實驗，從棉花酵母文庫中篩選獲得了GhLEA3互作蛋白，并對互作蛋白進行了GO和KEGG分析，發(fā)現(xiàn)其中的互作蛋白GhVDAC1主要參與鈣信號通路和cGMP-PKG信號通路，互作蛋白Gh***A參與多種生物途徑，如糖原生成和代謝途徑。此外，GhVDAC1和Gh***A受干旱脅迫誘導表達***，且在GhLEA3敲除的棉株中表達量低于野生型棉株酵母文庫 技術服務歐易生物分子互作一站式服務。技術酵母文庫規(guī)格
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本研究通過酵母雙雜交篩選，鑒定到 CRY1 可以與 SWR1 復合物關鍵亞基 SWC6、ARP6 結合，共同以藍光依賴模式調控 H2A.Z 在染色質的沉積。藍光***的 CRY1 可以增強 SWC6 與 ARP6 的相互作用。此外，HY5 也可以與 SWC6、ARP6 結合，將 SWR1 復合物募集到 HY5 靶向位置，調控 HY5 靶基因的表達，進而影響擬南芥下胚軸的伸長據(jù)此，本研究提出擬南芥光形態(tài)建成調控的分子機制：CRY1 通過增強 SWR1 復合物活性和 HY5 介導 SWR1 復合物向 HY5 靶基因的募集，共同促進 H2A.Z 染色質沉積，以調控 HY5 靶基因的表達和藍光條件下光形態(tài)建成。天津生物技術酵母文庫
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