酵母雙雜交文庫:本研究通過7個(gè)樹齡的油松樣品轉(zhuǎn)錄組測序,鑒定到一個(gè)與年齡信號***相關(guān)的基因模塊,該模塊包含33個(gè)轉(zhuǎn)錄因子,包括SOC1-like、DAL1等。油松和晚坐果白皮松突變體中的基因表達(dá)模式分析顯示,PtMADS11與生殖能力之間存在緊密相關(guān)性。酵母雙雜交顯示,MADS11和DAL1直接相關(guān)作用以參與對年齡信號的調(diào)控。過表達(dá)PtMADS11、PDAL1可以部分挽救擬南芥中miR156過表達(dá)或spl突變導(dǎo)致的開花延遲缺陷。只有PtMADS11可以挽救ft突變體中的開花缺陷,表明它與PtDAL1在擬南芥開花調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮了不同的作用。酵母雙雜交原理 酵母雙雜...。海南篩庫酵母文庫報(bào)價(jià)
酵母文庫篩選:為了系統(tǒng)地揭示調(diào)控叢枝菌根共生的轉(zhuǎn)錄因子,研究者以51個(gè)水稻基因的啟動(dòng)子為誘餌,利用包含1570個(gè)水稻全長轉(zhuǎn)錄因子的文庫進(jìn)行了酵母單雜交篩選。這51個(gè)基因主要是已報(bào)道的參與或調(diào)節(jié)菌根共生的基因。文庫篩選發(fā)現(xiàn)了一個(gè)由266個(gè)轉(zhuǎn)錄因子和47個(gè)啟動(dòng)子高度連接的網(wǎng)絡(luò),稱之為"叢枝菌根共生酵母單雜交網(wǎng)絡(luò)(YAM)"。平均每個(gè)啟動(dòng)子可以和4個(gè)轉(zhuǎn)錄因子互作。266個(gè)轉(zhuǎn)錄因子分屬至少11個(gè)轉(zhuǎn)錄因子家族。72%(192個(gè))的YAM轉(zhuǎn)錄因子在根中存在表達(dá)(FPKM>1)。與非定殖根相比,19個(gè)YAM轉(zhuǎn)錄因子在叢枝菌根***定殖的根中表達(dá)上調(diào)。海南篩庫酵母文庫報(bào)價(jià)初篩+復(fù)篩提高目標(biāo)陽性克隆質(zhì)粒精確度。一對一篩庫驗(yàn)證服務(wù),客戶無需再次驗(yàn)證。
酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)表明,PtMADS11 與 PtDAL1 之間存在直接的相互作用(圖 C),并通過 BiFC、GST pull-down 得以證實(shí)(圖 D-E)。為進(jìn)一步研究在年齡信號調(diào)控中的作用機(jī)制,分別構(gòu)建了過表達(dá)PtDAL1和PtMADS11的擬南芥。與對照相比,過表達(dá)PtDAL1***提前了擬南芥的營養(yǎng)-生殖時(shí)相轉(zhuǎn)換(圖A),證實(shí)PtDAL1在生殖起始和控制花***建立起到了關(guān)鍵作用。過表達(dá)PtMADS11植株在短日照下表現(xiàn)出早開花和花序結(jié)構(gòu)過早終止,表明PtMADS11在開花調(diào)節(jié)和花序內(nèi)分生組織命運(yùn)起到調(diào)控作用。在擬南芥中利用年齡調(diào)控通路不同節(jié)點(diǎn)關(guān)鍵基因突變體進(jìn)行功能互補(bǔ)實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示過表達(dá)PtDAL1可以恢復(fù)由于過表達(dá)miR156導(dǎo)致的開花延遲,但ft缺失會(huì)導(dǎo)致PtDAL1失活,PtDAL1過表達(dá)也不能恢復(fù)soc1-1-2突變體的表型,表明PtDAL1依賴或處于FT/SOC1的上游。而過表達(dá)PtMADS11可以恢復(fù)由過表達(dá)miR156或ft缺失導(dǎo)致的開花延遲,表明PtMADS11對開花的調(diào)控不依賴于miR156或FT。
酵母雙雜交(Y2H):植物轉(zhuǎn)錄因子(Plant transcripter factors, TFs)是調(diào)控植物生長發(fā)育和環(huán)境適應(yīng)性的關(guān)鍵分子。雖然在一些數(shù)據(jù)庫中,如RiceSRTFDB (Priya and Jain, 2013), Ricettissuetfdb (Chen et al.,PlnTFDB (Pérez-Rodríguez et al., 2009)和PlantTFDB (Jin et al., 2017),可以預(yù)測水稻轉(zhuǎn)錄因子功能。但通過具體實(shí)驗(yàn)研究,來直接證實(shí)轉(zhuǎn)錄因子對植物的調(diào)控作用仍然是必不可少的。酵母雙雜交(Y2H)和酵母單雜交(Y1H)是被用于研究蛋白-蛋白以及蛋白-DNA互作的**常用技術(shù)。為了方便和促進(jìn)水稻育種研究,陳凡老師與歐易生物達(dá)成合作,整合雙方優(yōu)勢資源,歷經(jīng)春秋與冬夏,成功構(gòu)建了基于粳稻(日本晴)基因組的水稻轉(zhuǎn)錄因子文庫。該項(xiàng)成果以“一種高效的篩選系統(tǒng)來鑒定大米轉(zhuǎn)錄因子的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)-DNA相互作用伙伴”為題,發(fā)表于雜志JGG上。篩選酵母文庫選歐易生物技術(shù)可靠服務(wù)高效多年經(jīng)驗(yàn)。
酵母雙雜交文庫:本研究通過藍(lán)/紅光誘導(dǎo)青蒿中青蒿素生物合成基因的表達(dá),使用轉(zhuǎn)錄組分析確定了一個(gè)WRKY轉(zhuǎn)錄因子AaWRKY9,可明顯***青蒿素生物合成相關(guān)基因的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)表明AaWRKY9通過光依賴JA信號通路調(diào)節(jié),在青蒿素生物合成中發(fā)揮重要作用,AaWRKY9通過與AaDBR2和AaGSW1的啟動(dòng)子結(jié)合正向調(diào)節(jié)青蒿素的積累。此外,JA信號通路中的抑制因子AaJAZ9與AaWRKY9相互作用,并抑制其轉(zhuǎn)錄***活性,而在MeJA存在情況下,AaJAZ9被降解,AaWRKY9的轉(zhuǎn)錄***活性增加,進(jìn)而促進(jìn)青蒿素生物合成基因的表達(dá)。酵母雙雜交文庫結(jié)果表明,AaWRKY9有助于光和JA信號調(diào)節(jié)青蒿素的生物合成,為兩種信號途徑在植物次生代謝物合成中的整合調(diào)控提供了新見解。使用原裝酵母技術(shù)試劑盒、培養(yǎng)基,保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)流程細(xì)致謹(jǐn)慎,實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì)經(jīng)驗(yàn)豐富。江蘇技術(shù)酵母文庫報(bào)價(jià)
酵母單雜交/雙雜交文庫構(gòu)建簡述酵母雙雜交。海南篩庫酵母文庫報(bào)價(jià)
酵母文庫實(shí)驗(yàn)本研究鑒定了一個(gè)可以與MdMYB9相互作用的蛋白MdTRB1。實(shí)驗(yàn)表明,MdTRB1可以正向調(diào)節(jié)花青素和原花青素的累積。MdTRB1與MdMYB9結(jié)合可以增強(qiáng)后者對下游基因的轉(zhuǎn)錄***活性。而MdTRB1與MdJAZ1的結(jié)合,可以干擾其與MdMYB9的互作,進(jìn)而負(fù)向調(diào)控MdTRB1介導(dǎo)的對花青素和原花青素積累的促進(jìn)作用。本研究表明,JAZ1-TRB1-MYB9復(fù)合物可以動(dòng)態(tài)調(diào)控JA介導(dǎo)的花青素和原花青素的積累。本研究為進(jìn)一步研究JA對花青素和原花青素生物合成的調(diào)節(jié)提供了新見解。海南篩庫酵母文庫報(bào)價(jià)
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