歐易酵母文庫助力蘋果花青素合成調(diào)控機制研究。近日,山東農(nóng)業(yè)大學郝玉金、由春香教授為共同通訊作者,在ThePlantJournal(IF:6.141)期刊發(fā)表了題為“JasmonateinducesanthocyaninandproanthocyanidinbiosynthesisinapplebymediatingtheJAZ1-TRB1-MYB9complex”的研究論文,報道了茉莉酸通過介導JAZ1-TRB1-MYB9復合物誘導蘋果中花青素和原花青素的生物合成。山東農(nóng)業(yè)大學安建平博士為***作者,文章中酵母文庫實驗由歐易生物協(xié)助完成。酵母文庫篩選研究多年建庫與篩選經(jīng)驗驗證。甘肅應用酵母文庫
酵母文庫實驗:本研究發(fā)現(xiàn)了一個硝酸鹽響應的 BTB/TAZ 蛋白 MdBT2,它參與調(diào)節(jié)硝酸鹽介導的蘋果植株生長。利用酵母雙雜交、蛋白質(zhì) pull-down、BiFC 實驗證實,MdBT2 可以與一個 DELLA 蛋白 MdRGL3a 互作,這種互作是 MdRGL3a 蛋白經(jīng)由 26S 蛋白酶體途徑的泛素化及降解所必需的。此外,異源表達 MdBT2 部分回復了 MdRGL3a 過表達所導致的擬南芥生長抑制。綜上表明,MdBT2 可以通過降低 DELLA 蛋白 MdRGL3a 的豐度促進硝酸鹽介導的植物生長。實驗室培養(yǎng)顯示,培養(yǎng) 45 天,蘋果幼苗的高度和生物量隨硝酸鹽濃度的增加而增加(圖 A-C)。河南品質(zhì)酵母文庫報價酵母文庫 技術(shù)服務歐易生物分子互作一站式服務。
酵母雜交試驗:隨著分子生物學研究進入以蛋白質(zhì)組學為標志的后基因組時代,蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)-DNA相互作用已成為互作組學研究的熱門主題。人類基因粗略約編碼2萬種蛋白,只算一對一的相互作用種類也有12萬到100萬種。而加上動態(tài)變化,每個物種、個體、細胞中都存在著一張張不同的互作網(wǎng)絡圖,這一張張圖譜中,蘊藏著各種生命的奧秘。有兩種通用的相互作用組圖譜繪制方式:第一種酵母雜交試驗,通過偶聯(lián)基因表達體現(xiàn)細胞內(nèi)發(fā)生直接相互作用的蛋白對。第二種是通過抗體/標簽分離純化復合體,然后用質(zhì)譜鑒定復合體內(nèi)部組分,識別直接相互作用或間接相互作用的蛋白質(zhì)。兩種高通量方法彼此互補,相互驗證。
酵母雙雜交實驗表明,PtMADS11 與 PtDAL1 之間存在直接的相互作用(圖 C),并通過 BiFC、GST pull-down 得以證實(圖 D-E)。為進一步研究在年齡信號調(diào)控中的作用機制,分別構(gòu)建了過表達PtDAL1和PtMADS11的擬南芥。與對照相比,過表達PtDAL1***提前了擬南芥的營養(yǎng)-生殖時相轉(zhuǎn)換(圖A),證實PtDAL1在生殖起始和控制花***建立起到了關(guān)鍵作用。過表達PtMADS11植株在短日照下表現(xiàn)出早開花和花序結(jié)構(gòu)過早終止,表明PtMADS11在開花調(diào)節(jié)和花序內(nèi)分生組織命運起到調(diào)控作用。在擬南芥中利用年齡調(diào)控通路不同節(jié)點關(guān)鍵基因突變體進行功能互補實驗,結(jié)果顯示過表達PtDAL1可以恢復由于過表達miR156導致的開花延遲,但ft缺失會導致PtDAL1失活,PtDAL1過表達也不能恢復soc1-1-2突變體的表型,表明PtDAL1依賴或處于FT/SOC1的上游。而過表達PtMADS11可以恢復由過表達miR156或ft缺失導致的開花延遲,表明PtMADS11對開花的調(diào)控不依賴于miR156或FT。酵母文庫和測序建庫是什么?。
單雜交篩選為了挖掘影響ALA誘導蘋果黃酮醇積累的關(guān)鍵性調(diào)控因子,作者以Y1HGold[proMdFLS1-AbAi] 為誘餌,通過酵母單雜交篩選了ALA處理后的蘋果愈傷組織cDNA文庫。結(jié)果顯示篩選出的蛋白質(zhì)主要參與光合作用調(diào)控、碳糖代謝、氧化/滲透脅迫響應、***信號轉(zhuǎn)導、木質(zhì)素生物合成、果實成熟發(fā)育等過程,以及一些功能未知的蛋白質(zhì)。其中, MdSCL8轉(zhuǎn)錄因子,由于其在草莓中的同源基因已被報導與黃酮的合成有關(guān),引起了研究者的注意。進一步通過Y1H assay驗證確認了MdSCL8可以與MdFLS1啟動子互作(圖2A)。通過雙熒光素酶實驗和GUS檢測,發(fā)現(xiàn)MdSCL8可以負向調(diào)控MdFLS1啟動子活性(圖2B-D)。專業(yè)化的篩庫流程,多重質(zhì)檢保證質(zhì)量。初篩+復篩提高目標陽性克隆質(zhì)粒精確度。甘肅應用酵母文庫
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酵母單雜交篩選:(4)在篩選到的轉(zhuǎn)錄因子中,***GL1促進HIV-2轉(zhuǎn)錄。***GL1在免疫細胞中***表達,并與HIV的其他轉(zhuǎn)錄***因子,即Sp1、AP-1和PCAF/CBP/P300存在相互作用,本研究中顯示HEK293T細胞中,***GL1過表達后,與LTR連接的螢火素酶表達上升近2倍,說明***GL1是一個轉(zhuǎn)錄***因子。值得一提的是,文章的背景介紹內(nèi)容中,對應用其他技術(shù)(如RNAi、scRNA-seq、CRISPR等)對HIV轉(zhuǎn)錄調(diào)控方向的已有成果分析,發(fā)現(xiàn)這些方法為HIV-1的復制和潛伏期提供了見解,但并沒有直接評估轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合和功能。文章中也對酵母單雜交技術(shù)與其他互作組技術(shù)(如Chip-seq、motif預測)進行了比較分析,發(fā)現(xiàn)eY1H技術(shù)對已識別因子的驗證率為30-60%,同等或優(yōu)于其他技術(shù)。甘肅應用酵母文庫
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