酵母文庫篩選：為了系統(tǒng)地揭示調(diào)控叢枝菌根共生的轉(zhuǎn)錄因子，研究者以51個水稻基因的啟動子為誘餌，利用包含1570個水稻全長轉(zhuǎn)錄因子的文庫進行了酵母單雜交篩選。這51個基因主要是已報道的參與或調(diào)節(jié)菌根共生的基因。文庫篩選發(fā)現(xiàn)了一個由266個轉(zhuǎn)錄因子和47個啟動子高度連接的網(wǎng)絡，稱之為"叢枝菌根共生酵母單雜交網(wǎng)絡（YAM）"。平均每個啟動子可以和4個轉(zhuǎn)錄因子互作。266個轉(zhuǎn)錄因子分屬至少11個轉(zhuǎn)錄因子家族。72%（192個）的YAM轉(zhuǎn)錄因子在根中存在表達（FPKM>1）。與非定殖根相比，19個YAM轉(zhuǎn)錄因子在叢枝菌根***定殖的根中表達上調(diào)。合作文章上百篇，平均影響因子高達7.124 歐易生物酵母文庫。北京品質(zhì)酵母文庫報價
目前，歐易生物負責該水稻轉(zhuǎn)錄因子文庫的維護和保存工作，并對廣大水稻科研工作者提供轉(zhuǎn)錄因子篩選服務。如去年歐易生物助力中國科學院分子植物科學***創(chuàng)新中心的王二濤老師應用該文庫對水稻-叢枝菌根進行了深入研究，成功構(gòu)建了水稻-叢枝菌轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡，結(jié)果發(fā)表于《Cell》封面。截至文章發(fā)表，該文庫已收錄了1683個水稻轉(zhuǎn)錄因子，隸屬于54個家族，覆蓋預測的水稻轉(zhuǎn)錄因子總量的70%。文庫中水稻轉(zhuǎn)錄因子的a基因信息來源于PlantTFDB和KOME數(shù)據(jù)庫。文庫載體使用pGADT7，酵母菌株使用Y187，每一個轉(zhuǎn)錄因子菌株**保存于96孔板中。北京品質(zhì)酵母文庫報價進口試劑高服務質(zhì)量市場份額大酵母文庫。
酵母雜交試驗:隨著分子生物學研究進入以蛋白質(zhì)組學為標志的后基因組時代，蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)-DNA相互作用已成為互作組學研究的熱門主題。人類基因粗略約編碼2萬種蛋白，只算一對一的相互作用種類也有12萬到100萬種。而加上動態(tài)變化，每個物種、個體、細胞中都存在著一張張不同的互作網(wǎng)絡圖，這一張張圖譜中，蘊藏著各種生命的奧秘。有兩種通用的相互作用組圖譜繪制方式：第一種酵母雜交試驗，通過偶聯(lián)基因表達體現(xiàn)細胞內(nèi)發(fā)生直接相互作用的蛋白對。第二種是通過抗體/標簽分離純化復合體，然后用質(zhì)譜鑒定復合體內(nèi)部組分，識別直接相互作用或間接相互作用的蛋白質(zhì)。兩種高通量方法彼此互補，相互驗證。
酵母文庫實驗本研究鑒定了一個可以與MdMYB9相互作用的蛋白MdTRB1。實驗表明，MdTRB1可以正向調(diào)節(jié)花青素和原花青素的累積。MdTRB1與MdMYB9結(jié)合可以增強后者對下游基因的轉(zhuǎn)錄***活性。而MdTRB1與MdJAZ1的結(jié)合，可以干擾其與MdMYB9的互作，進而負向調(diào)控MdTRB1介導的對花青素和原花青素積累的促進作用。本研究表明，JAZ1-TRB1-MYB9復合物可以動態(tài)調(diào)控JA介導的花青素和原花青素的積累。本研究為進一步研究JA對花青素和原花青素生物合成的調(diào)節(jié)提供了新見解。酵母雙雜交文庫構(gòu)建實驗流程。
酵母雙雜交、pulldown和BiFC實驗均顯示，MdTRB1可以通過其C末端與JAZ1蛋白互作。在蘋果葉片和愈傷組織中過表達MdJAZ1，花青素和原花青素的累積受到明顯抑制。在蘋果葉片和愈傷組織***表達MdJAZ1/MdJAZ1，結(jié)果顯示過表達MdJAZ1抑制了MdTRB1對花青素和原花青素累積的促進作用。Pull down 實驗和熒光素酶互補成像實驗結(jié)果表明，在 MdJAZ1 存在下，MdTRB1 與 MdMYB9 的結(jié)合減弱（圖 a-c）；外源施加 JA 可以部分恢復 MdTRB1 與 MdMYB9 的結(jié)合。對于 MdTRB1 在 JA 介導的花青素和原花青素積累中的作用機制，本研究建立了一個新的模型：MdTRB1 通過與 MdMYB9 互作，增強了 MdMYB9 對下游基因的轉(zhuǎn)錄***活性，進而正向調(diào)節(jié)了 JA 介導的花青素和原花青素累積。在 JA 缺乏的條件下，MdJAZ1 與 MdTRB1 互作，干擾了 MdTRB1 與 MdMYB9 之間的結(jié)合；在 JA 存在的條件下，MdJAZ1 被降解，MdTRB1 被釋放出來以參與后續(xù)過程。酵母雙雜交優(yōu)惠快速出報告品牌歐易生物特色科學嚴謹準確。河北篩庫酵母文庫
酵母單雜交/雙雜交文庫構(gòu)建簡述酵母雙雜交。北京品質(zhì)酵母文庫報價
通過酵母雙雜篩選實驗，進一步研究AaWRKY9蛋白功能，結(jié)果篩選到了與AaWRKY9互作的AaJAZ9蛋白，并通過Y2H、BiFC、CoIP等進行了驗證確認。JAZs是JA介導的植物相應中的負向調(diào)控因子，在毛狀體和老葉中高表達，在芽尖和嫩葉中表達量低。為確認AaJAZ9是否抑制了AaWRKY9在促進青蒿素積累過程中的轉(zhuǎn)錄***功能，通過雙熒光素酶報告基因檢測實驗發(fā)現(xiàn)，當AaWRKY9與AaJAZ9共表達時，其轉(zhuǎn)錄活性被抑制，而使用MeJA處理后，這種抑制作用被抵消，且AaWRKY9轉(zhuǎn)錄活性增強，反向驗證實驗結(jié)果一致。說明JA可以通過降解JAZ9，提高AaWRKY9轉(zhuǎn)錄活性，促進青蒿素生物合成。北京品質(zhì)酵母文庫報價
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