鈣離子成像技術(shù)(Calciumimaging)是指利用鈣離子指示劑監(jiān)測(cè)組織內(nèi)鈣離子濃度的方法,常用于神經(jīng)系統(tǒng)的研究,指示神經(jīng)元內(nèi)鈣離子的變化,提示神經(jīng)元活動(dòng)。其原理在于借助鈣離子濃度與神經(jīng)元活動(dòng)之間的嚴(yán)格對(duì)應(yīng)關(guān)系,利用特殊的熒光染料或者蛋白質(zhì)熒光探針(鈣離子指示劑,<spanlang=EN-US>Calciumindicator),將神經(jīng)元中鈣離子的濃度通過(guò)熒光強(qiáng)度表現(xiàn)出來(lái),并被顯微鏡捕捉,從而達(dá)到監(jiān)測(cè)神經(jīng)元活動(dòng)的目的。鈣離子在神經(jīng)元功能中起著重要的作用:它們作為細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)可觸發(fā)響應(yīng),如改變基因表達(dá)和突觸囊泡中神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。由于細(xì)胞內(nèi)有離子泵在各種信號(hào)刺激下選擇性地運(yùn)輸這些離子,胞內(nèi)鈣濃度是高度動(dòng)態(tài)的。鈣成像利用鈣離子流的優(yōu)勢(shì),在活神經(jīng)細(xì)胞上直接可視化鈣信號(hào)。鈣成像技術(shù)被廣泛應(yīng)用于同時(shí)監(jiān)測(cè)成百上千個(gè)神經(jīng)元內(nèi)鈣離子的變化。重慶光遺傳鈣成像價(jià)格多少
大家都知道,只有游離鈣才具有生物學(xué)活性,而細(xì)胞質(zhì)內(nèi)鈣離子濃度由鈣離子的內(nèi)外流平衡所決定,同時(shí)也受鈣結(jié)合蛋白的影響。細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流的方式有很多種,其中包括電壓門控鈣離子通道、離子型谷氨酰胺受體、煙堿型膽堿能受體(nAChR)和瞬時(shí)受體電位C型通道(TRPC)等。神經(jīng)元鈣成像的原理就是利用特殊的熒光染料或鈣離子指示劑將神經(jīng)元中鈣離子濃度的變化通過(guò)熒光強(qiáng)度表現(xiàn)出來(lái),以反映神經(jīng)元活性。該方法可以同時(shí)觀察多個(gè)功能或位置相關(guān)的腦細(xì)胞。江蘇鈣成像代理進(jìn)行鈣測(cè)定必須借助外界的某種可視化物質(zhì)作為它的標(biāo)志物。
紫外光激發(fā)Ca2+熒光探針:Fura-2和Indo-1都是紫外光激發(fā)的雙波長(zhǎng)Ca2+熒光指示劑,也是目前較常用的比率型鈣離子熒光探針。與其他代的熒光指示劑相比,它們的熒光信號(hào)更強(qiáng),對(duì)Ca2+的選擇性也更強(qiáng)。比率指示劑會(huì)在與Ca2+結(jié)合后會(huì)改變吸收/發(fā)射特性。以雙波長(zhǎng)激發(fā)指示劑Fura-2為例。如圖2所示,低Ca2+濃度下,F(xiàn)ura-2在~380nm處激發(fā),高Ca2+濃度下,在~340nm處激發(fā)。光譜由兩個(gè)峰組成:左側(cè)較短波長(zhǎng)的吸收峰隨Ca2+濃度的增加而增大,右側(cè)較長(zhǎng)波長(zhǎng)的吸收峰隨Ca2+濃度的增加而減小。通過(guò)340/380nm交替激發(fā),獲取在510nm處對(duì)應(yīng)的發(fā)射光熒光強(qiáng)度的比率,就可以對(duì)Ca2+濃度進(jìn)行定量的測(cè)量。因?yàn)镕ura-2結(jié)果準(zhǔn)確,且不易被漂白,所以得到了普遍使用。
對(duì)新環(huán)境的探索確保了生存和進(jìn)化的適應(yīng)性,這是通過(guò)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)動(dòng)態(tài)變化的探索性回合和逮捕來(lái)表達(dá)的。因此,調(diào)節(jié)探索性行為的神經(jīng)環(huán)路應(yīng)該參與經(jīng)驗(yàn)的整合,并利用它來(lái)選擇適當(dāng)?shù)男袨檩敵觥Mㄟ^(guò)空間探索分析,研究人員發(fā)現(xiàn)在之前動(dòng)物被逮捕的地點(diǎn),瞬間逮捕數(shù)隨著經(jīng)驗(yàn)的增加而增加。在自由探索的小鼠身上進(jìn)行的Inscopix鈣成像顯示,基底外側(cè)杏仁核中有一個(gè)遺傳和投射定義的神經(jīng)元群,在自我控制的行為停止期間是活躍的。這個(gè)合集是以經(jīng)驗(yàn)依賴的方式響應(yīng)的,對(duì)這些神經(jīng)元的nVoke閉環(huán)光遺傳操作表明,它們?cè)谔剿鬟^(guò)程中驅(qū)動(dòng)經(jīng)驗(yàn)依賴的逮捕是充分和必要的。投影特異性成像和光遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示,這些yizhi是由投射到**杏仁核的基底外側(cè)杏仁核神經(jīng)元影響的,揭示了杏仁核環(huán)路,該回路介導(dǎo)了熟悉部位的短暫阻止,但不影響回避或焦慮/恐懼樣行為。雙光子熒光顯微鏡的發(fā)展,使在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處于活動(dòng)狀態(tài)下的鈣成像技術(shù)取得了飛速進(jìn)展。
Anderson研究團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室雄性小鼠對(duì)雌性和雄性的攀爬行為可以通過(guò)是否存在超聲發(fā)聲(USV)來(lái)區(qū)分。這些和更多的行為數(shù)據(jù)表明,大多數(shù)雄性主導(dǎo)的攀爬是攻擊性的,盡管在極少數(shù)情況下可能是性行為。研究人員調(diào)查了USV+和USV-攀爬是否使用相同或不同的下丘腦神經(jīng)基質(zhì)。通過(guò)使用Inscopix自由行為顯微鈣成像方法觀察內(nèi)側(cè)視前區(qū)(MPOA)或腹內(nèi)側(cè)下丘腦腹側(cè)細(xì)分(VMHvl)中雌jisu受體1(ESR1)陽(yáng)性神經(jīng)元,發(fā)現(xiàn)在小鼠活動(dòng)中可以解碼出在USV+和USV-攀爬過(guò)程中神經(jīng)元活動(dòng)的獨(dú)特模式。交叉光遺傳刺激表達(dá)ESR1和囊狀GABA轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(VGAT)的MPOA神經(jīng)元,可促進(jìn)USV+攀爬,并將雄性的定向攻擊轉(zhuǎn)換為USV攀爬。功能性多神經(jīng)元鈣成像是一種通過(guò)記錄神經(jīng)元內(nèi)Ca2+信號(hào)變化,監(jiān)測(cè)大量神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢坏墓鈱W(xué)記錄技術(shù)。哈爾濱熒光顯微鈣成像
長(zhǎng)時(shí)間追蹤相同細(xì)胞,進(jìn)行可重復(fù)的科學(xué)研究對(duì)自由行為動(dòng)物進(jìn)行慢性鈣成像研究。重慶光遺傳鈣成像價(jià)格多少
眾所周知,只有游離鈣才具有生物學(xué)活性,而細(xì)胞質(zhì)內(nèi)鈣離子濃度由鈣離子的內(nèi)外流平衡所決定,同時(shí)也受鈣結(jié)合蛋白的影響。細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流的方式有很多種,其中包括電壓門控鈣離子通道、離子型谷氨酰胺受體、煙堿型膽堿能受體(nAChR)和瞬時(shí)受體電位C型通道(TRPC)等。神經(jīng)元鈣成像的原理就是利用特殊的熒光染料或鈣離子指示劑將神經(jīng)元中鈣離子濃度的變化通過(guò)熒光強(qiáng)度表現(xiàn)出來(lái),以反映神經(jīng)元活性。該方法可以同時(shí)觀察多個(gè)功能或位置相關(guān)的腦細(xì)胞。重慶光遺傳鈣成像價(jià)格多少