芬蘭雙分子層膜片鉗

膜片鉗的基本原理則是利用負(fù)反饋電子線路，將微電極前列所吸附的一個(gè)至幾個(gè)平方微米的細(xì)胞膜的電位固定在一定水平上，對(duì)通過(guò)通道的微小離子電流作動(dòng)態(tài)或靜態(tài)觀察，從而研究其功能。膜片鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)膜電流固定的關(guān)鍵步驟是在玻璃微電極前列邊緣與細(xì)胞膜之間形成高阻密封，其阻抗數(shù)值可達(dá)10～100GΩ(此密封電阻是指微電極內(nèi)與細(xì)胞外液之間的電阻)。由于此阻值如此之高，故基本上可看成絕緣，其上之電流可看成零，形成高阻密封的力主要有氫健、范德華力、鹽鍵等。此密封不僅電學(xué)上近乎絕緣，在機(jī)械上也是較牢固的。又由于玻璃微電極前列管徑很小，其下膜面積只約1μm2，在這么小的面積上離子通道數(shù)量很少，一般只有一個(gè)或幾個(gè)通道，經(jīng)這一個(gè)或幾個(gè)通道流出的離子數(shù)量相對(duì)于整個(gè)細(xì)胞來(lái)講很少，可以忽略，也就是說(shuō)電極下的離子電流對(duì)整個(gè)細(xì)胞的靜息電位的影響可以忽略，那么，只要保持電極內(nèi)電位不變，則電極下的一小片細(xì)胞膜兩側(cè)的電位差就不變，從而實(shí)現(xiàn)電位固定。滔博生物TOP-Bright專(zhuān)注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專(zhuān)業(yè)團(tuán)隊(duì),7*28小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢(xún).Eberwine等于1991年首先將膜片鉗技術(shù)與RT-PCR技術(shù)結(jié)合起來(lái)運(yùn)用。芬蘭雙分子層膜片鉗

    電壓鉗技術(shù)，是20世紀(jì)初由Cole發(fā)明，Hodgkin和Huxley完善，其設(shè)計(jì)的主要目的是為了證明動(dòng)作電位的產(chǎn)生機(jī)制，即動(dòng)作電位的峰電位是由于膜對(duì)鈉的通透性發(fā)生了一過(guò)性的增大過(guò)程。但當(dāng)時(shí)沒(méi)有直接測(cè)定膜通透性的方法，于是就用膜對(duì)某種離子的電導(dǎo)來(lái)**該種離子的通透性，膜電導(dǎo)測(cè)定的依據(jù)是電學(xué)中的歐姆定律，如膜的Na電導(dǎo)GNa與電化學(xué)驅(qū)動(dòng)力（Em-ENa）和膜電流INa的關(guān)系GNa=INa/（Em-ENa）.因此可通過(guò)測(cè)量膜電流，再利用歐姆定律來(lái)計(jì)算膜電導(dǎo)，但是，利用膜電流來(lái)計(jì)算膜電導(dǎo)時(shí)，記錄膜電流期間的膜電位必須保持不變，否則膜電流的變化就不能**膜電導(dǎo)的變化。這一條件是利用電壓鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)的。下張幻燈中的右邊兩張圖是Hodgkin和Huxley在半個(gè)世紀(jì)以前利用電壓鉗記錄的搶烏賊的動(dòng)作電位和動(dòng)作電位過(guò)程中的膜電流的變化圖，他們的實(shí)驗(yàn)***證明參與動(dòng)作電位的離子流由Na，k，漏（Cl）三種成分組成。并對(duì)這些離子流進(jìn)行了定量分析。這一技術(shù)對(duì)闡明動(dòng)作電位的本質(zhì)和離子通道的的研究做出了極大的貢獻(xiàn)。 高通量全自動(dòng)膜片鉗解決方案浸溶細(xì)胞溶液和微電極玻璃管內(nèi)的填充液成分對(duì)全細(xì)胞膜片鉗記錄也是很重要的內(nèi)容。

膜片鉗技術(shù)是一種用于研究生物細(xì)胞膜離子通道的實(shí)驗(yàn)方法。它通過(guò)在細(xì)胞膜上形成小孔，從而對(duì)細(xì)胞膜的離子通道進(jìn)行精確的電生理記錄和描述。在膜片鉗實(shí)驗(yàn)中，研究人員通常會(huì)先將細(xì)胞膜上的脂質(zhì)雙層通過(guò)特殊設(shè)備進(jìn)行穿刺，形成一個(gè)小孔。然后，他們將一個(gè)玻璃微電極插入這個(gè)小孔中，以接觸并測(cè)量細(xì)胞膜內(nèi)部的電位變化。這個(gè)玻璃微電極的端非常細(xì)，不會(huì)對(duì)細(xì)胞膜產(chǎn)生太大的干擾。通過(guò)膜片鉗技術(shù)，科學(xué)家可以精確地測(cè)量離子通道的活動(dòng)，從而了解離子通道在細(xì)胞生理學(xué)中的作用。例如，他們可以測(cè)量離子通道在不同刺激下如何開(kāi)啟或關(guān)閉，以及這些變化如何影響細(xì)胞的電活動(dòng)和化學(xué)信號(hào)傳遞。此外，膜片鉗技術(shù)還可以用于研究和鑒定新的藥物靶點(diǎn)。通過(guò)觀察藥物對(duì)離子通道活動(dòng)的影響，科學(xué)家可以評(píng)估新藥對(duì)特定疾病的zhi療潛力。總的來(lái)說(shuō)，膜片鉗技術(shù)是一種非常有用的實(shí)驗(yàn)方法，它為我們提供了深入研究細(xì)胞膜離子通道以及藥物作用機(jī)制的工具。

膜片鉗技術(shù)的建立1.拋光及填充好玻璃管微電極，并將它固定在電極夾持器中。2.通過(guò)一個(gè)與電極夾持器連接的導(dǎo)管給微電極內(nèi)一個(gè)壓力，一直到電極浸入記錄槽溶液中。3.當(dāng)電極浸沒(méi)在溶液中時(shí)給電極一個(gè)測(cè)定脈沖（命令電壓，如5-10ms，10mV）讀出電流，按照歐姆定律計(jì)算電阻。4.通過(guò)膜片鉗放大器的控制鍵將微電極前列的連接電位（junctionpotentials）調(diào)至零位，這種電位差是由于電極內(nèi)填充溶液與浸浴液不同離子成分的遷移造成的。5.用微操縱器將微電極前列在直視下靠近要記錄的細(xì)胞表面，并觀察電流的變化，直至阻抗達(dá)到1GΩ以上形成"干兆封接"6.調(diào)整靜息膜電位到期望的鉗位電壓的水平，使放大器從"搜尋"轉(zhuǎn)到"電壓鉗"時(shí)細(xì)胞不至于鉗位到零。滔博生物TOP-Bright專(zhuān)注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專(zhuān)業(yè)團(tuán)隊(duì),7*36小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢(xún).膜片鉗具有雙探頭，相當(dāng)于兩臺(tái)膜片鉗放大器。也具有單探頭膜片鉗放大器。

早在膜片鉗誕生之前，20世紀(jì)50~60年代，Hodgkin與Hexley便發(fā)現(xiàn)并使用了電壓鉗技術(shù)，他們通過(guò)雙電極電壓鉗在烏賊軸突上發(fā)現(xiàn)了動(dòng)作電位的離子機(jī)制，并因此獲得了諾貝爾生理醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。這也為后來(lái)膜片鉗的誕生奠定了基礎(chǔ)。于1976年，德國(guó)馬克斯普朗克生物物理化學(xué)研究所的Neher和Sakmann第1次于青蛙的肌細(xì)胞上，用玻璃電極吸下了一小片細(xì)胞膜，記錄導(dǎo)了皮安級(jí)的單通道離子電流，從而產(chǎn)生了膜片鉗技術(shù)。1980年，耶魯大學(xué)醫(yī)學(xué)院Sigworth等人在記錄電極內(nèi)增加了負(fù)壓吸引，實(shí)現(xiàn)了10-100GΩ的高阻抗封接，使得單電極可以同時(shí)實(shí)現(xiàn)鉗制電位和記錄單通道電流。1991年，Neher與Sakmann因?yàn)閷?duì)膜片鉗技術(shù)的突出貢獻(xiàn)獲得了諾貝爾生理醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。膜片鉗技術(shù)，在人類(lèi)對(duì)生理學(xué)的探究中，無(wú)異于一條道路，通往了名為細(xì)胞電生理的國(guó)度。膜片鉗技術(shù)也許某一天會(huì)被更便捷或更精確的技術(shù)取代，但其至今仍然是離子通道相關(guān)研究中使用蕞廣的技術(shù)。膜片鉗是一種用于夾持薄膜或其他薄片材料的工具。德國(guó)雙電極膜片鉗高阻抗封接

膜片鉗技術(shù)是用玻璃微電極吸管把只含1-3個(gè)離子通道、面積為幾個(gè)平方微米的細(xì)胞膜通過(guò)負(fù)壓吸引封接起來(lái)。芬蘭雙分子層膜片鉗

膜片鉗的應(yīng)用范圍：1.單離子通道(如鈉、鉀)的功能研究；2.心肌細(xì)胞離子通道研究（尤其與藥物作用相關(guān)的）；3.常規(guī)與病理的離子通道作用機(jī)制研究；4.單細(xì)胞的形態(tài)與功能關(guān)系的研究；5.心血管藥理學(xué)的研究；6.腦片膜片鉗（證實(shí)了腦組織在體外也能存活并保持很好的活性狀態(tài)，能使對(duì)腦細(xì)胞的研究更接近生理狀態(tài)下的情況，可檢驗(yàn)不同腦區(qū)間的神經(jīng)通路與功能鏈接）；7.神經(jīng)環(huán)路的研究（光遺傳或化學(xué)遺傳病毒載體表達(dá)的驗(yàn)證）；8.神經(jīng)突觸可塑性的研究。芬蘭雙分子層膜片鉗