染料法是指在qPCR反應(yīng)體系中加入一種與雙鏈DNA分子結(jié)合的熒光染料，包括SYBR®Green I、BEBO和LC Green TMI等染料，它們可以與雙鏈DNA（double strands DNA，dsDNA）的小溝非特異性結(jié)合，激發(fā)較強(qiáng)的熒光產(chǎn)生。經(jīng)熒光定量PCR儀器檢測后，對核酸進(jìn)行定性和定量分析。qPCR 染料法原理:這種方法的優(yōu)點(diǎn)是，需要一對特異性引物，操作簡單、檢測成本低。缺點(diǎn)是由于熒光染料非特異結(jié)合dsDNA產(chǎn)物，無法正確區(qū)分目的產(chǎn)物，尤其是染料結(jié)合引物二聚體易產(chǎn)生錯(cuò)誤的擴(kuò)增曲線，易形成誤判。雖然在PCR擴(kuò)增程序后添加熔解曲線分析，可以方便判斷生成的熒光擴(kuò)增曲線是否屬于目的產(chǎn)物，但是對于高靈敏度要求的實(shí)驗(yàn)來說，染料法并不是比較好的選擇。熒光檢測系統(tǒng)可接收熒光信號(hào)，每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，熒光信號(hào)累積和PCR產(chǎn)物形成是同步。廣東單通道qPCR儀作用
交聯(lián)和裂解——穩(wěn)定復(fù)合物并分離核組分:第一步對時(shí)間要求嚴(yán)格并且需要優(yōu)化。體內(nèi)共價(jià)交聯(lián)穩(wěn)定蛋白質(zhì)-DNA相互作用并于特定時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行分析。通常采用甲醛交聯(lián)，加入甘氨酸以終止反應(yīng)。交聯(lián)劑滲透到完整細(xì)胞中并將蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物鎖定在一起從而進(jìn)行分析。交聯(lián)劑在整個(gè)過程中保持復(fù)合物穩(wěn)定，但其作用必須是可逆的才能用于ChIP。一些非常穩(wěn)定的蛋白質(zhì)-DNA相互作用則不需要交聯(lián)。接下來，使用裂解液透化細(xì)胞膜，釋放細(xì)胞組分，然后蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物變得可溶。去除細(xì)胞溶質(zhì)蛋白以減少背景信號(hào)并增加靈敏度。注意：此時(shí)可以停止ChIP測定。 經(jīng)過交聯(lián)，淬滅和洗滌細(xì)胞沉淀后，將裂解物于-80℃儲(chǔ)存。華南地區(qū)Quantagene q225qPCR儀應(yīng)用Real-timePCR是在PCR擴(kuò)增過程中，通過熒光信號(hào)，對PCR進(jìn)程進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time fluorescence quantitative PCR，qPCR）通過在普通 PCR 反應(yīng)體系中加入了熒光標(biāo)記探針或熒光染料，利用熒光信號(hào)的變化實(shí)時(shí)檢測PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物變化。通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。具有專一性更高、可實(shí)時(shí)監(jiān)控、可重復(fù)精確定量等優(yōu)勢。qPCR的種類根據(jù)qPCR的化學(xué)發(fā)光原理一般分為2大類：一類是探針法，利用與靶序列特異雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加；一類是基于SYBR Green I 的染料法，通過熒光染料來指示產(chǎn)物的增加。
Quantagene q225 系列熒光定量PCR 系統(tǒng)主要特點(diǎn)：精確定量 以可靠的數(shù)據(jù)助力您的研究。采用擬合算法計(jì)算 Ct 值，定量誤差不超過±10%。液體冷卻循環(huán)系統(tǒng)確?？组g溫度高度一致，溫差不超過 ±0.15°C。光學(xué)系統(tǒng)無運(yùn)動(dòng)部件，穩(wěn)定性增加，長期使用無需校準(zhǔn)與維護(hù)。的儀器間重復(fù)性，不同位置、不同反應(yīng)體積均不影響定量結(jié)果?？焖俑咝?用更短的時(shí)間獲得更多數(shù)據(jù)。40 個(gè)循環(huán)的常規(guī) qPCR 只需43 分鐘，較常見qPCR 儀多縮短60% 的時(shí)間。在提高速度的同時(shí)保持了96 孔的高通量，滿足絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)需求。小巧輕便 節(jié)省空間及您的寶貴樣品小體積為移動(dòng)實(shí)驗(yàn)和大量部署提供可能。5-10 μl 的推薦反應(yīng)體積，較常規(guī)實(shí)驗(yàn)節(jié)省80%的試劑用量，更節(jié)約您的珍貴樣品。dPCR比qPCR準(zhǔn)確度與精密度高。
SYBR Green I染料試劑：SYBR Green I染料法采用了Applied Biosystems SYBR Green I染料，一種可以在PCR循環(huán)過程中隨著PCR產(chǎn)物的累計(jì)而對其進(jìn)行檢測的高度特異性雙鏈DNA結(jié)合染料。TaqMan和SYBR Green I染料法為重要的區(qū)別在于SYBR Green I染料試劑可以檢測所有雙鏈DNA，包括非特異性的反應(yīng)產(chǎn)物。因此這樣經(jīng)過特別優(yōu)化的反應(yīng)體系，對于獲取準(zhǔn)確的結(jié)果而言是非常必要的。使用SYBR Green I染料法的檢測類型SYBR Green I染料法可用于以下檢測類型：用于RNA定量的一步法RT-PCR；用于RNA定量的兩步法RT-PCR；DNA/cDNA定量。SYBR Green I 是一種結(jié)合于所有雙鏈DNA（dsDNA）雙螺旋小溝區(qū)域的具有綠色激發(fā)波長的染料。華南地區(qū)Quantagene q225qPCR儀應(yīng)用
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限，實(shí)現(xiàn)每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度。廣東單通道qPCR儀作用
Quantagene q225 系列熒光定量PCR 43分鐘完成實(shí)驗(yàn)，再加3分鐘做完熔解曲線需43分鐘即可完成一個(gè)40循環(huán)的常規(guī)qpcr實(shí)驗(yàn)。DNA熔解曲線的檢測快可在3分鐘內(nèi)完成。使用快速試劑，30個(gè)熱循環(huán)的檢測更可縮短至20分鐘。精密設(shè)計(jì)的加熱塊和孔板q225的加熱塊經(jīng)過精密設(shè)計(jì)，能夠很大程度地貼合孔板形狀，實(shí)現(xiàn)高效的熱傳導(dǎo)，使得在加熱塊達(dá)到預(yù)定溫度后反應(yīng)溶液也能在短時(shí)間內(nèi)達(dá)到相同溫度，反應(yīng)溶液溫度更為均一?？焖傺h(huán)，穩(wěn)定溫度 q225 出色的熱循環(huán)系統(tǒng)設(shè)計(jì)使得40 個(gè)循環(huán)的常規(guī) qPCR 可以在短短43 分鐘內(nèi)輕松完成，讓您的工作效率獲得質(zhì)的提升。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中溫度穩(wěn)定，不受實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長而導(dǎo)致的機(jī)器內(nèi)部背景溫度上升的影響。廣東單通道qPCR儀作用
廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司致力于精細(xì)化學(xué)品，是一家服務(wù)型公司。公司業(yè)務(wù)分為數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀等，目前不斷進(jìn)行創(chuàng)新和服務(wù)改進(jìn)，為客戶提供良好的產(chǎn)品和服務(wù)。公司將不斷增強(qiáng)企業(yè)重點(diǎn)競爭力，努力學(xué)習(xí)行業(yè)知識(shí)，遵守行業(yè)規(guī)范，植根于精細(xì)化學(xué)品行業(yè)的發(fā)展。雙螺旋科學(xué)儀器憑借創(chuàng)新的產(chǎn)品、專業(yè)的服務(wù)、眾多的成功案例積累起來的聲譽(yù)和口碑，讓企業(yè)發(fā)展再上新高。