上海進(jìn)口數(shù)字PCR市場(chǎng)前景

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-02-05

ThermoFisherQuantStudio3D是另一個(gè)經(jīng)典的芯片式數(shù)字PCR平臺(tái),其基本的檢測(cè)流程是:將反應(yīng)液加入到涂布器中,通過(guò)涂布器將反應(yīng)液均勻涂布在有20000個(gè)微孔的芯片上,將芯片放在PCR儀上擴(kuò)增,將芯片放入讀取儀中采取拍照的方式讀取熒光信號(hào)。操作較為復(fù)雜,整個(gè)過(guò)程在封閉的芯片中進(jìn)行,污染的風(fēng)險(xiǎn)較低。STILLANaica是一個(gè)較新的數(shù)字PCR平臺(tái),基本的檢測(cè)流程是:將反應(yīng)液加入芯片,將芯片放入微滴生成擴(kuò)增系統(tǒng),生成30,000個(gè)微滴單層平鋪于芯片中,PCR擴(kuò)增在芯片上完成。然后將擴(kuò)增后的芯片轉(zhuǎn)移至微滴閱讀分析系統(tǒng),采取拍照的方式讀取熒光信號(hào)。由于整個(gè)過(guò)程在封閉的芯片中進(jìn)行,污染的風(fēng)險(xiǎn)較低。影響dPCR定量結(jié)果的因素:儀器采用的分散方式與數(shù)量、溶液稀釋方法、分散體積的準(zhǔn)確性以及結(jié)果表達(dá)方式。上海進(jìn)口數(shù)字PCR市場(chǎng)前景

Drop-off實(shí)驗(yàn)包括兩個(gè)針對(duì)相同擴(kuò)增子的TaqMan探針:與野生型序列互補(bǔ)而與突變位點(diǎn)不發(fā)生互補(bǔ)的Drop-off探針和與突變型和野生型基因都互補(bǔ)的Reference探針(如圖1A)。在野生型等位基因的存在下,Drop-off探針和Reference探針都將與目標(biāo)雜交,產(chǎn)生雙重陽(yáng)性信號(hào)(如圖1B,藍(lán)色群)。相反,如果存在突變的等位基因,即使一個(gè)核苷酸的突變也會(huì)阻止Drop-off探針與之雜交,因此只有Reference探針對(duì)目標(biāo)基因進(jìn)行退火,從而得到一個(gè)陽(yáng)性信號(hào)。上海進(jìn)口數(shù)字PCR市場(chǎng)前景通過(guò)不同cluster的位置進(jìn)行突變位點(diǎn)的判斷時(shí)存在誤判的現(xiàn)象。

PCR(PolymeraseChainReaction)技術(shù),即聚合酶連反應(yīng),是一種擴(kuò)大和復(fù)制目的片段DNA的技術(shù),其發(fā)現(xiàn)對(duì)于生命科學(xué)的發(fā)展具有重要的意義。而3D數(shù)字PCR到底是什么鬼?它其實(shí)是出現(xiàn)的一款PCR儀,其具有對(duì)目的DNA分子做出定量的優(yōu)點(diǎn),進(jìn)而提供的準(zhǔn)確性、靈敏度。應(yīng)用該技術(shù),實(shí)現(xiàn)對(duì)DNA進(jìn)行精確定量,精確度可通過(guò)復(fù)制次數(shù)實(shí)現(xiàn)。通過(guò)準(zhǔn)確性的進(jìn)行定量檢測(cè)基因,有助于臨床上在、病毒等疾病作參考。同時(shí),其具有高通量,檢測(cè)速度快,成本相對(duì)低等優(yōu)點(diǎn),為后期精細(xì)奠定基礎(chǔ)。

相比于cPCR技術(shù)和第二代qPCR技術(shù),dPCR技術(shù)具有定量,可溯源至SI國(guó)際單位制摩爾;基質(zhì)成分干擾較小[51];靈敏度高;對(duì)抑制劑的敏感性較低;適合多重轉(zhuǎn)基因檢測(cè)[52.53],可提高分析效率;實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化簡(jiǎn)單[54]對(duì)實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化的要求較低,適合多重基因檢測(cè)等優(yōu)勢(shì),可為轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物提供準(zhǔn)確的量值保證,目前dPCR儀器的價(jià)格仍然十分昂貴,但隨著系統(tǒng)加工工藝的改進(jìn)以及使用較便宜的材料,聚合成更小的體積[556],其價(jià)格將會(huì)不斷的降低,使其應(yīng)用到更多的檢測(cè)中。20世紀(jì)末,Bert Vogelstein等提出數(shù)字PCR的概念。

PCR常使用目標(biāo)序列的拷貝數(shù)或某一給定樣品中轉(zhuǎn)基因的百分比來(lái)體現(xiàn)方法靈敏度。由于qPCR和dPCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程所用試劑的兼容性較好,在使用dPCR進(jìn)行轉(zhuǎn)基因檢測(cè)時(shí),通常直接參照qPCR的方法。使用不同技術(shù)對(duì)相同樣品檢測(cè)時(shí),兩種方法的靈敏度是否具有可比性成為關(guān)注的問(wèn)題。Burns等21]使用Fluidigm公司的12.765(12板,每板765個(gè)微單元)芯片數(shù)字PCR分析儀測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)ERM-AD413檢測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米MON810。該小組應(yīng)用dPCR技術(shù)評(píng)估在qPCR定義下的靈敏度數(shù)值,在拷貝數(shù)200-700之間,dPCR與qPCR的測(cè)量結(jié)果具有一致性。但與qPCR的靈敏度相比,dPCR在低于拷貝數(shù)200時(shí)有被低估的風(fēng)險(xiǎn),在高于拷貝數(shù)1000時(shí)有被高估的風(fēng)險(xiǎn)。dPCR在同一陣列上同時(shí)測(cè)量轉(zhuǎn)基因和內(nèi)源性靶點(diǎn)時(shí),需要稀釋內(nèi)源性靶點(diǎn)和轉(zhuǎn)基因靶點(diǎn)在合理拷貝數(shù)范圍內(nèi)以保證dPCR測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性。數(shù)字PCR的**原理:有限稀釋、終點(diǎn)PCR和泊松分布。蘇州臻準(zhǔn)數(shù)字PCR性能特點(diǎn)

在患者術(shù)后復(fù)發(fā)檢測(cè)中,數(shù)字PCR評(píng)估出的ctDNA陽(yáng)性,可以早于影像學(xué)數(shù)月提前揭示出患者復(fù)發(fā)。上海進(jìn)口數(shù)字PCR市場(chǎng)前景

對(duì)于檢測(cè)需要高靈敏度以及技術(shù)確認(rèn)的情況下,數(shù)字PCR技術(shù)也可以發(fā)揮重要作用。技術(shù)數(shù)據(jù)表明,數(shù)字PCR技術(shù)對(duì)的比較低檢測(cè)下限可到2copies/ml,比qPCR靈敏度提升了100倍。經(jīng)測(cè)試,數(shù)字PCR在檢測(cè)和診斷的某些方面優(yōu)于金標(biāo)準(zhǔn)qPCR,尤其是在低病毒載量樣本中,相比起qPCR,數(shù)字PCR特異性、靈敏度、重現(xiàn)性和檢測(cè)限受影響更小。因此,未來(lái)預(yù)計(jì)數(shù)字PCR技術(shù)也將在類疾病中得到更加廣的應(yīng)用。數(shù)字PCR的應(yīng)用甚廣,除了可應(yīng)用于進(jìn)行突變的檢測(cè)以外,也可運(yùn)用于基因擴(kuò)增的檢測(cè)。通過(guò)數(shù)字PCR技術(shù)可建立多重?zé)晒怏w系,用于同時(shí)檢測(cè)比如非小細(xì)胞肺中常見(jiàn)的MET和HER2耐藥擴(kuò)增。有研究報(bào)道,使用數(shù)字PCR技術(shù)對(duì)436例非小細(xì)胞肺樣品進(jìn)行檢測(cè),并挑選樣本驗(yàn)證了數(shù)字PCR與RNA fish的檢測(cè)一致性。結(jié)果表明,該數(shù)字PCR技術(shù)在保證了基因擴(kuò)增檢測(cè)準(zhǔn)確性的同時(shí),還節(jié)約了檢測(cè)時(shí)間。上海進(jìn)口數(shù)字PCR市場(chǎng)前景

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