基于數(shù)字PCR技術平臺，塔歌生物成功地開發(fā)了胎兒染色體非整倍體(T21,T18和T13)無創(chuàng)產(chǎn)前篩查試劑盒（數(shù)字PCR-NIPT），并已完成數(shù)百例臨床樣本驗證。數(shù)字PCR-NIPT的陽性檢出率和NGS相似，且成本接近血清學，可以在上述應急策略中取代血清學作為靈敏度和特異性更高的初篩方法，以有效提高陽性檢出率，降低需要復篩的假陽性樣本數(shù)和節(jié)省總的篩查成本。數(shù)字PCR應用前景廣闊，可用于病原微生物檢測、基因檢測、無創(chuàng)產(chǎn)前篩查、測序結果驗證等領域。但目前，大多數(shù)醫(yī)院采購的數(shù)字PCR儀器是用于科研層面，在臨床應用上仍處于起步階段，未得到普遍應用。dPCR被稱作第三代PCR技術，但dPCR技術的廣泛應用逐漸顯現(xiàn)出一些不足之處。廣州數(shù)字PCR試劑盒
數(shù)字PCR是一種核酸分子定量技術。當前核酸分子的定量有三種方法，光度法基于核酸分子的吸光度來定量；實時熒光定量PCR（RealTimePCR）基于Ct值，Ct值就是指可以檢測到熒光值對應的循環(huán)數(shù)；數(shù)字PCR是的定量技術，基于單分子PCR方法來進行計數(shù)的核酸定量，是一種定量的方法。主要采用當前分析化學熱門研究領域的微流控或微滴化方法，將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應器或微滴中，每個反應器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后，有一個核酸分子模板的反應器就會給出熒光信號，沒有模板的反應器就沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應器的體積，就可以推算出原始溶液的核酸濃度。廣州數(shù)字PCR試劑盒無創(chuàng)產(chǎn)前篩查有望成為數(shù)字PCR在臨床快速落地的應用。
在PCR進行的過程中，首先是引物和探針分別結合，然后開始擴增。如果一個微滴當中有目標基因的片段，Taqman探針就會被酶切碎，熒光基團和淬滅基團分離。在后面的檢測過程中，熒光基團被激發(fā)光路激發(fā)之后就會發(fā)熒光。如果沒有，Taqman探針就不會被切碎，在后面的檢測過程中，熒光基團吸收到激發(fā)光的能量，就會被淬滅基團給淬滅，那么儀器就檢測不到這個微滴的信號。檢測的過程中，并不是說一個樣本中檢測到了幾個亮點，這個反應當中就有幾個目標基因的拷貝。因為目標基因的片段，在微滴當中的分布，是符合泊松分布的（也就是說進不進的概率相等，并且相互獨立）。所以，一個發(fā)光的微滴中，可能有一個或者三個四個，甚至更多個目標基因的拷貝。因此，發(fā)光的微滴數(shù)與原始的基因拷貝數(shù)并不是一對一的對應關系。
PCR已成為分子診斷領域重要的技術手段之一，占據(jù)分子診斷市場的半壁江山。數(shù)字PCR是一代PCR技術，也是當前靈敏度和定量精度比較高的分子檢測技術。但數(shù)字PCR使用成本仍然相對較高，檢測靶點數(shù)少（一般≤6靶點/反應），阻礙了其在臨床中的大規(guī)模應用，提高數(shù)字PCR的多重檢測能力迫在眉睫?；跓晒馔ǖ罃?shù)的增加和基于探針濃度梯度增加，均可以在一定程度上提高數(shù)字PCR檢測重數(shù)，然而只能達到"線性"增加的目的?；谔结槤舛忍荻鹊亩嘀貦z測技術雖然光'f明顯增加多重能力，但由于無法避免交叉反應現(xiàn)象，不能確保獲得位點特異性的分簇，因此穩(wěn)定性不足、靈敏度較差，難以滿足臨床級別的數(shù)據(jù)要求。而基于創(chuàng)新的且數(shù)字PCR獨特適用的熒光編碼技術可以實現(xiàn)“指數(shù)”級的多重檢測，顛覆性的提高數(shù)字PCR檢測重數(shù)，覆蓋臨床應用多場景需求。楊雁峰博士堅信數(shù)字PCR是可以應用于無創(chuàng)產(chǎn)前篩查的理想技術之一，這也是他2016年創(chuàng)立塔歌生物的初衷。
數(shù)字PCR技術流分類目前，dPCR的基本方法都已經(jīng)建立，根據(jù)反應單元的不同形式，主要可分為微板式、微腔式和和微滴式三大類系統(tǒng)。微液滴制備的方法，目前主流的有四種：1）芯片微孔物理分割法，俗稱物理分隔法，公司有Fluidgm，Qiagen，Roche，ThermoFisher，;2）液滴分割法，俗稱油包水，代替公司有Bio-Rad;3）雜交式芯片液滴法，公司有Stilla;4）注射振動制滴法。PS：芯片式物理分割技術所有已經(jīng)過期，目前有不少公司在這個技術的基礎上進行開發(fā)，例如羅氏。20世紀末，Bert Vogelstein等提出數(shù)字PCR的概念。德國賽默飛數(shù)字PCR熒光通道
臻準推出新款數(shù)字PCR產(chǎn)品：AccuONE2.0數(shù)字PCR系統(tǒng)。廣州數(shù)字PCR試劑盒
在定量PCR時，我們常常糾結一個問題，究竟是相對定量還是***定量呢？如今，你無需糾結了，因為數(shù)字PCR（digitalPCR）來了。盡管這兩種技術有些類似，都是估計起始樣品中的核酸量，但它們有一個重要的區(qū)別。定量PCR是依靠標準曲線或參照基因來測定核酸量，而數(shù)字PCR則讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個數(shù)，是對起始樣品的***定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應用領域：拷貝數(shù)變異、突變檢測、基因相對表達研究（如等位基因不平衡表達）、二代測序結果驗證、miRNA表達分析、單細胞基因表達分析等。廣州數(shù)字PCR試劑盒
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