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人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體，包括內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血小板、平滑肌細(xì)胞等。當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時(shí)，外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合，進(jìn)而靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，從而細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。有報(bào)道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細(xì)胞膜上未能檢測(cè)出。三是外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA。外泌體（Exosome）發(fā)現(xiàn)于1986年，是一種直徑約30~100nm的雙層膜囊泡狀結(jié)構(gòu)小體。開封正規(guī)外泌體提取試劑服務(wù)電話

外泌體的提取、分離方法：尺寸排阻色譜法和超濾法；尺寸排阻色譜法是利用分子篩理論，較初是根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小分離蛋白質(zhì)的色譜技術(shù)。該方法的主要優(yōu)點(diǎn)是不需要很大的離心力，從而保證了外泌體的完整性。Mol等[13]對(duì)比超高速離心和尺寸排阻色譜法得到的外泌體蛋白，結(jié)果顯示，后者得到的外泌體的蛋白豐度高于前者。這些基于過濾或尺寸排阻色譜的新方法為外泌體大規(guī)模的生產(chǎn)和臨床應(yīng)用提供了可能。超濾也是根據(jù)外泌體的尺寸將其分離出來的一種方法，超濾一般被認(rèn)為是外泌體分離過程中的一個(gè)準(zhǔn)備過程，通過超濾除去大分子和小分子的蛋白質(zhì)。不過連續(xù)的超濾可以分離出外泌體，和超高速離心相比，超濾不需要特殊的設(shè)備就可以較短時(shí)間內(nèi)分離出外泌體。但是，超濾膜對(duì)外泌體的黏附作用會(huì)降低外泌體的產(chǎn)量，并且超濾過程中施加的外力可能會(huì)使外泌體變形或者破裂。開封正規(guī)外泌體提取試劑服務(wù)電話將人尿液來源細(xì)胞的培養(yǎng)基通過0.22微米濾膜過濾，以去除大的細(xì)胞殘片以及其它雜質(zhì)。

由于這些核酸被囊膜包裹而被保護(hù)，穩(wěn)定性高，不易降解，是一種用于一些病癥診斷和預(yù)后監(jiān)測(cè)的非常理想的新型生物標(biāo)記物一些疾病的早期診斷、用藥監(jiān)控、預(yù)后判斷。近年來，隨著人們對(duì)外泌體的研究和認(rèn)識(shí)加深，外泌體檢測(cè)作為一種新型的液體活檢熱點(diǎn)技術(shù)已被許多臨床科研機(jī)構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷、治病和監(jiān)測(cè)；如何高效地提取外泌體是實(shí)現(xiàn)這項(xiàng)新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵。外泌體(Exosome)是從體液(尿液、血液、唾液、腹水、胸腹水等)和細(xì)胞液中快速提取的，其是活細(xì)胞分泌到胞外的囊泡樣小體，含有多種蛋白和核酸分子(DNA、RNA、以及miRNA)，在體內(nèi)細(xì)胞間物質(zhì)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起到重要作用。

作為一種分子通斷開關(guān)的KRAS發(fā)生突變時(shí)會(huì)處于“開啟”狀態(tài)。在80%～95%的胰腺導(dǎo)管腺?。≒DAC）當(dāng)中，這個(gè)基因發(fā)生突變，這也是這種一些疾病中較為常見的突變。這些研究人員證實(shí)iExosome能夠運(yùn)送特異性地靶向KRAS的siRNA和shRNA分子，并且比他們的合成對(duì)應(yīng)物脂質(zhì)體（liposome）更加高效。脂質(zhì)體不具有外泌體表現(xiàn)出的天然復(fù)雜性和優(yōu)勢(shì)。德州大學(xué)MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學(xué)助理教授ValerieLeBleu博士說，“我們的研究提示著與脂質(zhì)體相比，外泌體表現(xiàn)出運(yùn)送siRNA分子和壓制侵襲性胰腺瘤生長(zhǎng)的優(yōu)異能力。我們也證實(shí)外泌體表面上的CD47存在允許它們躲避來自循環(huán)單核細(xì)胞的吞噬作用。”近年來，隨著人們對(duì)外泌體的研究和認(rèn)識(shí)加深。

外泌體研究的主要應(yīng)用：外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、一些病癥侵襲等方方面面。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成，促進(jìn)了一些病癥的生長(zhǎng)與侵襲。一些病癥。一些病癥轉(zhuǎn)移。來自白血病干細(xì)胞的外泌體促進(jìn)急性骨髓性白血?。ˋML）細(xì)胞的增殖、遷移和壓制細(xì)胞凋亡。治病靶標(biāo)。利用外泌體遞送小干擾RNA來沉默KRASG12D，從而特異性高效靶向至胰腺病細(xì)胞，以明顯降低RAS活化、病細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移過程。免疫。β細(xì)胞將含有蛋白質(zhì)和miRNA的外泌體釋放到細(xì)胞外，并可轉(zhuǎn)移到其他代謝部位或免疫內(nèi)皮細(xì)胞，有利于維持葡萄糖體內(nèi)平衡或造成胰島素抵抗。心血管。外泌體介導(dǎo)miR-155從平滑肌細(xì)胞轉(zhuǎn)移到內(nèi)皮細(xì)胞導(dǎo)致了內(nèi)皮細(xì)胞的損傷促進(jìn)動(dòng)脈硬化。分子標(biāo)記。疾病診斷。在酒精性肝病、NASH、菌類性肝炎、藥物性肝損傷和肝細(xì)胞病中發(fā)現(xiàn)循環(huán)EVs的水平上升用無菌針管吸取上層含有外泌體的液體，置于80℃儲(chǔ)存?zhèn)溆?。金華外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家

外泌體的提取、分離方法：聚合物沉淀法。開封正規(guī)外泌體提取試劑服務(wù)電話

具體步驟是:以下所有步驟都在4℃下進(jìn)行，1、300×g10min，棄沉淀，去除細(xì)胞2、2000×g20min，棄沉淀，去除死細(xì)胞3、10,000×g30min，棄沉淀，去除細(xì)胞碎片等亞細(xì)胞成分4、10,000×g70min，棄上清，沉淀即為外泌體5、PBS（每10ml細(xì)胞培養(yǎng)液用30mlPBS重懸）清洗沉淀物，混勻，10,000×g70min6、lmlPBS溶解沉淀（外泌體），立即使用或置于-80℃?zhèn)溆谩?、一般超速離心法會(huì)結(jié)合密度梯度離心，這樣得到的外泌體更純，具體做法第4步后蔗糖梯度離心，10,000×g70min，以去除密度大于1.21g/ml的顆粒。優(yōu)點(diǎn)是：成本低，操作簡(jiǎn)單，獲得的囊泡數(shù)較多。缺點(diǎn)是：耗時(shí)耗力（需用時(shí)8-30h，并且每次只能處理6個(gè)樣本），獲得的外泌體純度不是很高，高速及重復(fù)離心也會(huì)對(duì)外泌體產(chǎn)生很大的傷害，并且不適用于如血漿和血清等粘性液體生物樣本。開封正規(guī)外泌體提取試劑服務(wù)電話