細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,這樣在需要的時候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種,起到了細(xì)胞保種的作用。為什么要進行細(xì)胞凍存?連續(xù)培養(yǎng)的細(xì)胞系容易發(fā)生遺傳漂變,有限細(xì)胞系較終會發(fā)生衰老,所有培養(yǎng)的細(xì)胞都易受到微生物污染,即使運轉(zhuǎn)情況較好的實驗室也會遇到設(shè)備故障的問題。由于已建立的細(xì)胞系是一種寶貴資源,更換細(xì)胞系成本高昂,而且耗費時間,因此,十分有必要將細(xì)胞冷凍起來長期保存。除此之外,還可以利用細(xì)胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細(xì)胞。度保存的無血清凍存液緩慢加入離心后的細(xì)胞沉淀中。寧波無血清細(xì)胞凍存液供應(yīng)商
細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中細(xì)胞進行保種并長期保存的常用方法,其中細(xì)胞凍存液,作為細(xì)胞凍存時必須使用的一種溶液,不光光是說只是用來進行細(xì)胞的保存,在細(xì)胞的購買、寄贈、交換和運送過程中也起著關(guān)鍵作用,因此選擇一款好的細(xì)胞凍存液就尤為重要。如果不加任何條件直接凍存細(xì)胞,細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會形成冰晶,能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、pH值改變、蛋白變性等,從而引起細(xì)胞死亡。而細(xì)胞凍存液就相當(dāng)于細(xì)胞的保護劑,在凍存細(xì)胞時將細(xì)胞懸浮于凍存液中,可使冰點降低,提高細(xì)胞膜對水的通透性,在緩慢的凍結(jié)條件下,能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞,可以防止或減少冷凍冰晶對細(xì)胞的損傷作用。這樣就使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,在需要時直接復(fù)蘇就可恢復(fù)細(xì)胞活性。寧波無血清細(xì)胞凍存液供應(yīng)商無血清凍存液用途:置于-20℃保存,有效期為3年。
細(xì)胞凍存液的作用是什么?滲透性冷凍保護劑:可以滲透到細(xì)胞內(nèi),一般是一些小分子物質(zhì),主要包括甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等。非滲透性冷凍保護劑:不能滲透到細(xì)胞內(nèi),一般是些大分子物質(zhì),主要包括聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白以及Hetastarch等。冷凍保護劑同溶液中的水分子結(jié)合,發(fā)生水合作用,弱化水的結(jié)晶過程使溶液的粘性增加從而減少冰晶的形成,同時冷凍保護劑可以通過在細(xì)胞內(nèi)外維持一定的摩爾濃度,降低細(xì)胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度,使細(xì)胞免受溶質(zhì)的損傷。滲透性冷凍保護劑的保護機制是在細(xì)胞冷凍懸液完全凝固之前,滲透到細(xì)胞內(nèi),在細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)生一定的摩爾濃度,降低細(xì)胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度,從而保護細(xì)胞免受高濃度電解質(zhì)的損傷同時。細(xì)胞內(nèi)水分也不會過分外滲,避免了細(xì)胞過分脫水皺縮。
復(fù)蘇方:法1)從冰箱里取出細(xì)胞冷凍保存管,立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍。2)待凍存管中細(xì)胞混合液完全融化后,立即加入1ml細(xì)胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細(xì)胞混合,再將細(xì)胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細(xì)胞培養(yǎng)基的試管中,混合均勻。3)離心收集培養(yǎng)細(xì)胞(參考離心條件:1,000~2,000rpm,4℃,3~5min),移去上清液。4)清洗細(xì)胞,充分洗凈殘留凍存液。5)加入適量的新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基,使用移液管緩緩地均勻細(xì)胞混合液。適量地稀釋后,將細(xì)胞混合液移至事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)瓶中。6)鏡檢后,研究者可根據(jù)各自方法和需要來進行細(xì)胞培養(yǎng)。適量地稀釋后,將細(xì)胞混合液移至事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)瓶中。
無血清快速細(xì)胞凍存液,是一種新型的快速凍存細(xì)胞的保護液,可將細(xì)胞置于-80^C直接冷凍保存。NM4100內(nèi)含天然抗凍蛋白(Naturalantifrereprotein),不含動物來源的血清成分,能夠有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力,減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染,確保凍存細(xì)胞安全,能夠滿足大部分體外培養(yǎng)細(xì)胞的凍存需求。注意事項:請選擇對數(shù)生長期細(xì)胞進行凍存;凍存液加入細(xì)胞后,請盡快放入-80C冰箱凍存;3.本產(chǎn)品凍存細(xì)胞可以在-80°C冰箱保存3年以上;4.若需長期凍存細(xì)胞,請轉(zhuǎn)移至液氮罐中貯存;凍存液中含DMSO成分,為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套。從冰箱里取出細(xì)胞冷凍保存管,立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍。成都無血清細(xì)胞凍存液廠家直銷
無血清細(xì)胞凍存液:凍存細(xì)胞復(fù)蘇率在90%以上。寧波無血清細(xì)胞凍存液供應(yīng)商
細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的原則是:慢凍速融,這樣更加有利于保持細(xì)胞的活力。凍存細(xì)胞不加任何保護劑,會導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生,從而使細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機械損傷,引起細(xì)胞內(nèi)環(huán)境滲透壓,PH,電解質(zhì)等的改變,進而促使細(xì)胞死亡。在過去的幾十年中,科研工作者將培養(yǎng)基、血清和DMSO按照一定的比例配制成凍存液,并配合手工使細(xì)胞從4℃,-20℃,-80℃到液氮中逐步轉(zhuǎn)移使其達(dá)到“慢凍”的效果。但這種自制的凍存液儲存時間一般比較短,不能滿足時間跨度大的實驗項目的需求。且這樣人力和時間成本大,人手操作的誤差和血清制品的批間差也給實驗結(jié)果帶來了不穩(wěn)定性。寧波無血清細(xì)胞凍存液供應(yīng)商