鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法。各個(gè)材料及其重量配比為鼠尾膠原蛋白∶聚乙烯醇∶殼聚糖為余量為水,采用冷凍干燥工藝制備。本發(fā)明所制備的止血材料主要采用鼠尾膠原蛋白制備,較傳統(tǒng)的止血材料不可吸收、容易引起機(jī)體過敏、止血效果差等缺點(diǎn),本發(fā)明所制備的止血材料具有人體內(nèi)可吸收,生物相容性好;止血效果快,具有很強(qiáng)的親水性;同時(shí)可啟動(dòng)血小板的凝聚,一旦血小板凝聚,就可形成血栓,進(jìn)而促使血漿結(jié)塊阻止血流。同時(shí),膠原表面的特定區(qū)域可以與細(xì)胞表面存在的類似纖連蛋白的糖蛋白結(jié)合,可以起到防止腸粘連的功效。鼠尾膠原醋酸溶解:將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中。貴陽鼠尾膠原廠家供應(yīng)
鼠尾Ⅰ型膠原:選擇適當(dāng)?shù)墓切迯?fù)材料是治好骨缺損的中心環(huán)節(jié)。目前,臨床上常用的有人工骨移植、自體骨移植和同種異體骨移植。其中,人工骨材料多為磷酸三鈣、半水硫酸鈣等含有鈣和磷的無機(jī)礦物材料[1-2],由于不含自體骨組織中的有機(jī)大分子Ⅰ型膠原蛋白,其臨床療效遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于自體骨組織。但是,自體骨移植和同種異體骨移植均來源于人類自身骨組織,數(shù)量有限,難以滿足臨床需要。因此,研發(fā)與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料,成為全世界骨組織工程學(xué)者孜孜以求的目標(biāo)。由于天然骨組織是Ⅰ型膠原蛋白和羥基磷灰石鈣生物礦化的產(chǎn)物,在分子結(jié)構(gòu)上,羥基磷灰石鈣晶體是以Ⅰ型膠原纖維為模板,呈片狀鑲嵌在膠原纖維分子間隙,沿著膠原纖維的長軸縱向礦化生長[3]。本研究仿生天然骨組織的分子結(jié)構(gòu),酸解提取鼠尾肌腱的Ⅰ型膠原蛋白,重構(gòu)形成Ⅰ型膠原纖維,然后將Ⅰ型膠原纖維放置在礦化液中模擬人體內(nèi)骨生物礦化,通過透射電子顯微鏡(TEM)和電子衍射觀察羥基磷灰石鈣晶體在膠原纖維內(nèi)部的骨生物礦化。太原正規(guī)鼠尾膠原哪家好鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基,它具有促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞(特別是上皮細(xì)胞)貼壁的作用。
利用鼠尾Ⅰ型膠原構(gòu)建與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料。方法通過醋酸酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白,并重構(gòu)成膠原纖維。然后,將重構(gòu)后的膠原纖維放置在礦化液中模仿骨生物礦化2~6d,通過透射電子顯微鏡和電子衍射觀察骨生物礦化。結(jié)果酸解提取的鼠尾Ⅰ型膠原蛋白能夠重構(gòu)成膠原纖維,并且具有特征性的D-Band結(jié)構(gòu)。透射電子顯微鏡和電子衍射顯示:礦化2d后,羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維,膠原纖維部分礦化;礦化6d后,膠原纖維內(nèi)部完全礦化,形成Ⅰ型膠原蛋白/羥基磷灰石鈣的仿生骨材料。結(jié)論利用酸解法提取的鼠尾Ⅰ型膠原蛋白可以重構(gòu)成膠原纖維,經(jīng)礦化可形成與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)一致的仿生骨材料。
具體實(shí)施方式實(shí)施例1止血材料的制備1、選擇能與鼠尾膠原蛋白聯(lián)合發(fā)揮作用的聚乙烯醇、殼聚糖作為輔料。各個(gè)材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?.2%0.2%。余量為水。2、將混合材料用無菌水溶解后澆入培養(yǎng)小板,-40°C預(yù)凍池,再轉(zhuǎn)入_80°C超低溫冰箱急凍4h,再轉(zhuǎn)入真空冷凍干燥機(jī)中將復(fù)合材料在-4°C下冷凍干燥10h,即可以得到復(fù)合型凍干止血材料。Co60輻射滅菌,干燥保存。凍干的材料可直接用于各種傷口的止血。實(shí)施例2止血材料的制備1、選擇能與鼠尾膠原蛋白聯(lián)合發(fā)揮作用的聚乙烯醇、殼聚糖作為輔料。各個(gè)材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?%2%1%,余量為水。2、將混合材料用無菌水溶解后澆入培養(yǎng)板,-20°C預(yù)凍,再轉(zhuǎn)入_80°C超低溫冰箱急凍8h,再轉(zhuǎn)入真空冷凍干燥機(jī)中將復(fù)合材料在-4°C下冷凍干燥30h,即可以得到復(fù)合型凍干止血材料。Co60輻射滅菌,干燥保存。鼠尾膠原醋酸溶解:不要晃動(dòng)或攪拌。
鼠尾膠原醋酸溶解:1.將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解。2.建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動(dòng)或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會(huì)導(dǎo)致丟失蛋白。3.稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。4.按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過夜。5.從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的,這時(shí)候可以在無菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。在接種細(xì)胞前用無菌的水漂洗。手持尾巴,用止血鉗夾住鼠尾的較高,折斷尾骨后拉出尾腱。貴陽正規(guī)鼠尾膠原廠家供應(yīng)
利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi)。貴陽鼠尾膠原廠家供應(yīng)
鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用:兩組培養(yǎng)皿中,隨著過氧化氫濃度的增高,均可見細(xì)胞凋亡狀態(tài)明顯加重,細(xì)胞存活率及細(xì)胞內(nèi)過氧化氫活力明顯下降,細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞內(nèi)丙二醛水平明顯增高,Bcl-2/Bax比值明顯降低,呈劑量依賴性。而在相同濃度過氧化氫誘導(dǎo)下,與對照組相比,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡狀態(tài)明顯減弱,細(xì)胞存活率、超氧化物歧化酶活力及Bcl-2/Bax比值增高,細(xì)胞凋亡率和丙二醛水平明顯減低。表明鼠尾膠原對過氧化氫所致的心肌細(xì)胞氧化損傷具有保護(hù)作用,其機(jī)制可能與提高超氧化物歧化酶活力,減少丙二醛產(chǎn)生及提高Bcl-2的表達(dá)有關(guān)。貴陽鼠尾膠原廠家供應(yīng)