鼠尾Ⅰ型膠原:材料與方法:1.主要材料、試劑和儀器鼠尾、鹽酸、等滲氯化鈉溶液、鈣液、磷液均購自上海晶純生化科技股份有限公司。日立高新TEMHT770(日本日立公司);多功能粉末X射線衍射儀。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白取大鼠尾巴洗凈,用75%的乙醇浸泡5min。將尾巴剪開,去掉皮毛,并剪成小段,抽出銀色的肌腱。將肌鍵剪斷置于平皿中,用無菌等滲氯化鈉溶液浸泡。吸去等滲氯化鈉溶液,將肌鍵置于平皿中剪碎,按每克肌鍵50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液。搖晃,將肌鍵分散于醋酸溶液中,4℃放置一周,然后以2186×g離心20min。在醋酸溶液的酸解下,肌腱水解成膠凍狀凝膠,置于冰箱4℃保存。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄,并且制作簡便,成本低廉。可以在無菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。在接種細(xì)胞前用無菌的水漂洗。開封鼠尾膠原平均價(jià)格
鼠尾膠原:含細(xì)胞三維膠原凝膠的制備(以配制1mg/mL三維膠1mL為例)準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞,并放置于冰浴中。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入23μL10×PBS或10×培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時(shí)需要測定pH值)。加入760μL的細(xì)胞懸浮液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。本品在室溫下pH中性時(shí)可迅速成膠,在操作過程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存,切勿凍存,有效期一年。石家莊鼠尾膠原推薦廠家鼠尾膠原醋酸溶解:不建議用過濾的方法無菌化。
鼠尾膠原,10mg包裝,配制方法如下:1.配0.1M的乙酸溶液100ml。即取575ul冰乙酸加超純水至100ml,容量瓶配制比較準(zhǔn)確。2.用吸管吸取10ml剛配好的0.1M乙酸溶液(不要用*加,吸十次不如加一次z準(zhǔn)確),加入盛膠原的瓶中,輕輕顛倒,不要震蕩,蛋白容易起泡。幾分鐘即可,蛋白質(zhì)非常好溶解。3.將膠原溶液移入事先壓好的玻璃瓶中,比青霉素瓶大點(diǎn)的就行。用*在瓶底加1ml氯仿,打到一檔就行,避免加入氣泡。然后4度過夜除菌。4.第二天將上層膠原溶液分裝進(jìn)EP管中。用封口膜封口,4度保存,勿冷凍。
膠原蛋白的提取方法:酶法提取:酶法提取是利用蛋白酶使膠原溶解,水解條件溫和,反應(yīng)速率快,提取的膠原蛋白仍有完整的三股螺旋結(jié)構(gòu),蛋白純度高,理化性質(zhì)穩(wěn)定,且無環(huán)境污染。酶法提取常用的蛋白酶有:胃蛋白酶、胰蛋白酶或者復(fù)合酶。工藝可選擇一步法,即利用酶液直接提??;二步法,即先用酸或者堿進(jìn)行初步提取,然后再用酶提取。Langmaier等[6]用MgO預(yù)處理革屑,然后用堿性蛋白酶提取膠原的水解產(chǎn)物。CabezaL.F.T等[7]先用胃蛋白酶,再用堿性蛋白酶提取了2種不同的膠原水解產(chǎn)物。趙蒼碧等[2]采用胃蛋白酶和無花果蛋白酶消化法從牛腱中提取膠原蛋白,探討了酶和酶的加入量對(duì)提取結(jié)果的影響,給出了酶對(duì)膠原提取較佳工藝配比,酶與牛腱的質(zhì)量比為0.1時(shí)效果較佳,而使用無花果蛋白酶時(shí),0.01的配比較佳。制備鼠尾膠原:取大鼠尾巴洗凈,75%酒精浸泡5分鐘。
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說明:含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞,并放置于冰浴中。將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入23ul10×PBS或10×培養(yǎng)液,混勻(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時(shí)需要用pH試紙測試)。加入760ul的細(xì)胞懸浮液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后,加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄,并且制作簡便,成本低廉。免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的分泌上皮細(xì)胞特征。石家莊鼠尾膠原直銷價(jià)
鼠尾膠原蛋白是從老鼠尾巴提取出來的物質(zhì)。開封鼠尾膠原平均價(jià)格
蘇州君欣生物科技有限公司鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基和一種天然的黏附劑,可用于細(xì)胞培養(yǎng)皿的包被,特別適合普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細(xì)胞的培養(yǎng);也可用于制備三維膠,模擬真實(shí)的生長環(huán)境,使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長。不開玩笑的說,本身高純度的鼠尾膠原蛋白是能吃的。但是,實(shí)驗(yàn)室里制備出來的各種材料和原材料都不應(yīng)該被食用,實(shí)驗(yàn)室也是禁食的。這是傳說中的制作方法:面對(duì)大家都感興趣的知識(shí),智圈始終抱著嚴(yán)謹(jǐn)且專業(yè)的態(tài)度,決心找出科學(xué)的制作方法。開封鼠尾膠原平均價(jià)格