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細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：細(xì)胞狀態(tài)這點(diǎn)非常重要，不要急于求成，一定要讓細(xì)胞處于較佳的生長(zhǎng)狀態(tài)再做。有文獻(xiàn)說傳代不要超過17代。細(xì)胞復(fù)蘇后的3代左右時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較好，不要用傳了很多代的細(xì)胞去做，細(xì)胞的形態(tài)都會(huì)發(fā)生變化。大多數(shù)已建立的細(xì)胞系都是非整倍體，原代培養(yǎng)包括了表達(dá)不同基因組合的細(xì)胞的混合物。細(xì)胞培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室中保存數(shù)月和數(shù)年后會(huì)經(jīng)歷突變，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化。這會(huì)導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化。如果隨時(shí)間發(fā)現(xiàn)這種變化，融化一管新鮮的細(xì)胞可能會(huì)恢復(fù)原先的轉(zhuǎn)染活性。因此，如果觀察到轉(zhuǎn)染效率降低，可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細(xì)胞以恢復(fù)較佳結(jié)果?；蛘?，幾種來(lái)源于經(jīng)篩選，轉(zhuǎn)染效率較高細(xì)胞亞系的細(xì)胞系現(xiàn)在有售~因?yàn)镈NA攝入效率和表達(dá)水平在不同實(shí)驗(yàn)中差異較大，實(shí)驗(yàn)必須很小心。廣州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷價(jià)

轉(zhuǎn)染方式：細(xì)胞由帶負(fù)電荷的磷脂雙分子層構(gòu)成，這對(duì)大分子物質(zhì)來(lái)說是個(gè)不可透過的屏障，比如DNA和RNA的磷酸骨架，其也帶負(fù)電荷。為了使核酸穿過細(xì)胞膜，研究人員開發(fā)了多種技術(shù)，大致分為三類：化學(xué)方法---利用載體分子包被核酸使其呈現(xiàn)中性電荷或正電荷。生物方法---利用基因工程細(xì)菌轉(zhuǎn)染非細(xì)菌基因到細(xì)胞中。物理方法---在細(xì)胞膜表面產(chǎn)生一個(gè)瞬時(shí)的孔從而導(dǎo)入DNA。然而，沒有一種方法適用于所有的細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)，理想的方法應(yīng)根據(jù)您的細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選擇，理想的方法應(yīng)具有高轉(zhuǎn)染效率，低細(xì)胞毒性和對(duì)正常生理學(xué)的影響較小，并且易于使用和可重復(fù)性等特點(diǎn)。廣州細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪里買震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存，使用前還需震蕩。

轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：細(xì)胞鋪板密度用于轉(zhuǎn)染的較佳細(xì)胞密度根據(jù)不同的細(xì)胞類型或應(yīng)用而異。一般轉(zhuǎn)染時(shí)，貼壁細(xì)胞密度為70%-90%，懸浮細(xì)胞密度為2×106-4×106細(xì)胞/ml時(shí)效果較好。確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞沒有長(zhǎng)滿或處于靜止期。因?yàn)檗D(zhuǎn)染效率對(duì)細(xì)胞密度很敏感，所以在不同實(shí)驗(yàn)間保持一個(gè)基本的傳代步驟很重要。鋪板細(xì)胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細(xì)胞產(chǎn)量。在三種不同密度進(jìn)行細(xì)胞鋪板的比較表明鋪板密度較高的，CAT活性也較高。得到較高活性所需的LIPOFECTAMINE試劑的量也相應(yīng)增加了。這些結(jié)果說明，對(duì)于轉(zhuǎn)染相同量的DNA所需的較佳陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑的量會(huì)因細(xì)胞密度而異

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率影響因素：1.細(xì)胞密度一般來(lái)說，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到60%～80%時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染可以取得較高的轉(zhuǎn)染效率，過低或過高都會(huì)影響轉(zhuǎn)染效果。2.細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)這點(diǎn)非常關(guān)鍵，很多時(shí)候傳代次數(shù)太少或者太多都將導(dǎo)致細(xì)胞對(duì)轉(zhuǎn)染試劑敏感度的改變。因此，為了提高轉(zhuǎn)染效率以及轉(zhuǎn)染穩(wěn)定性、降低細(xì)胞毒性，應(yīng)盡量使用適度傳代的細(xì)胞系，并在不同次實(shí)驗(yàn)時(shí)保持細(xì)胞傳代次數(shù)的一致性。3.細(xì)胞種類不同細(xì)胞種類的細(xì)胞在做轉(zhuǎn)染時(shí)所需要的轉(zhuǎn)染體系是不同的，不能一種體系用在所有類型細(xì)胞的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)對(duì)大多數(shù)細(xì)胞而言，均需要在轉(zhuǎn)染當(dāng)天或前現(xiàn)在鋪板，第二天上午進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的方法有哪些：1..電穿孔法。通過短暫的高電場(chǎng)電脈沖處理細(xì)胞，沿細(xì)胞膜的電壓差異會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜的暫時(shí)穿孔。DNA被認(rèn)為是穿過孔擴(kuò)散到細(xì)胞內(nèi)的。電脈沖和場(chǎng)強(qiáng)的優(yōu)化對(duì)于成功的轉(zhuǎn)染非常重要，因?yàn)檫^高的場(chǎng)強(qiáng)和過長(zhǎng)的電脈沖時(shí)間會(huì)不可逆地傷害細(xì)胞膜而裂解細(xì)胞。理論上說電穿孔法可用于各種細(xì)胞，且不需要另外采購(gòu)特殊試劑，但需要昂貴的電轉(zhuǎn)儀。此法每次轉(zhuǎn)染需要更多的細(xì)胞和DNA，因?yàn)榧?xì)胞的死亡率高。每種細(xì)胞電轉(zhuǎn)的條件都需要進(jìn)行多次優(yōu)化。2.細(xì)菌介導(dǎo)的傳染。傳染需要將目的基因克隆到特定的細(xì)菌體系中，經(jīng)過包裝細(xì)胞的包裝得到改造后的細(xì)菌，再進(jìn)行傳染。優(yōu)點(diǎn)是轉(zhuǎn)染效率特別高，尤其是難以轉(zhuǎn)染的原代細(xì)胞、細(xì)胞。缺點(diǎn)是構(gòu)建細(xì)菌周期長(zhǎng)，環(huán)節(jié)多，易出錯(cuò)，費(fèi)用也高有血清時(shí)的轉(zhuǎn)染 血清一度曾被認(rèn)為會(huì)降低轉(zhuǎn)染效率。昆明細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑生產(chǎn)廠家

代細(xì)胞和傳代次數(shù)多的細(xì)胞都不是較佳選擇。廣州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷價(jià)

細(xì)胞電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的幾點(diǎn)建議：1.電場(chǎng)強(qiáng)度要合適合適的電場(chǎng)強(qiáng)度對(duì)于電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)非常重要，電場(chǎng)強(qiáng)度不能過高，過高會(huì)增加細(xì)胞的死亡率；也不能過低，過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同細(xì)胞系具有不同的較佳場(chǎng)強(qiáng)值，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)測(cè)定所轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的較佳電場(chǎng)強(qiáng)度。2.細(xì)胞狀態(tài)要好用于電轉(zhuǎn)的細(xì)胞一般選取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞（15代以內(nèi)，傳代后2d）。因?yàn)樘幱趯?duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞分裂旺盛，表面結(jié)構(gòu)致密比穩(wěn)定期的細(xì)胞差，電轉(zhuǎn)后，細(xì)胞膜的恢復(fù)能力強(qiáng)，而且處于有絲分裂期的細(xì)胞更容易接受外源DNA.廣州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷價(jià)