經典Trizol法并不能獲得總RNA:這個事實可能會刷不少新手甚至老手的三觀,但確有實驗支持:經典Trizol法會選擇性丟失低GC比的miRNA。這一點,源自一則作者自撤稿的故事。V.NarryKim是韓國鼎鼎大名的美女科學家,專做RNA相關的研究,包括miRNA。幾年前她們組發(fā)現一個奇怪的“現象”,即貼壁細胞在消化之后,會有一些miRNA的豐度突然降低,看起來好像是被快速“降解”掉了,并據此寫了一篇文章發(fā)到MolecularCell上。但很快她們就發(fā)現,這個“現象”難以重復:如果用Trizol做實驗,就一定是陽性結果,而用試劑盒提RNA,就重復不出來。難道是號稱能提總RNA的Trizol方案出了問題?確實如此。經進一步實驗后發(fā)現,經典的Trizol方案會使得低GC比的miRNA丟失??俁NA提取試劑試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。珠海RNA提取試劑直銷廠家
新型土壤總RNA快速提取試劑盒:獨特裂解劑/裂解液迅速裂解細胞和滅活細胞內核酸酶,然后RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于玻璃奶,然后將粗純化的玻璃奶轉移到離心柱,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗液將腐植酸、細胞代謝物、蛋白等雜質去除,較后低鹽的洗脫緩沖液將純凈RNA從硅基質膜上洗脫。試劑盒特點:離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復性好??朔藝a試劑盒膜質量不穩(wěn)定的弊端。兼容性強,適用于各種不同的土壤、糞便以及其他soil.不需要使用有毒的苯酚等試劑,也不需要乙醇沉淀等步驟。快速,簡捷,單個樣品操作一般可在1小時內完成。多次柱漂洗確保高純度,OD260/OD280典型的比值達1.9以上,可直接用于PCR,Northern-blot和各種酶切反應。蕪湖正規(guī)RNA提取試劑平均價格RNA提取試劑TRIpure是基于世界上使用較普遍的異硫氰酸胍/酚法研制而成的總RNA抽提試劑。
酵母RNA的提取方法:濃鹽法。酵母菌外層是厚達1.2μm的細胞壁,其化學成分是葡聚糖(30-40%)和甘露聚糖(30%),此外,脂類8.5-13.5%,蛋白質6-8%,還含有幾丁質,酵母菌的葡聚糖,分子是為240000道爾頓,是一種分枝聚合物,葡聚糖與甘露糖之間由蛋白質維系起來。近10%的甘露聚糖的側鏈通過磷酸二酯鍵與磷酸邊接,所有這些連接方式都使得酵母提取物首要的也是關鍵的是如何破壞細胞壁。破壁方法有自溶破壁、酶法破壁等多種方法,而用高濃度鹽溶液處理,同時加熱,以改變細胞的通透性,就可以使核酸從細胞內釋放出來。由于RNA鈉鹽易溶于水,在含鹽的菌體溶液中,RNA有較高的溶解度,這樣,通過控制溫度使蛋白質變性沉淀,通過離心將RNA及蛋白質和脫核酵母菌體分離,從而達到提取之目的。其中食鹽起到自溶促進劑,以及防腐與脫臭的作用。
功能的區(qū)別:1、RNA的功能:mRNA是依據DNA序列轉錄而成的蛋白質合成模板;tRNA是mRNA上遺傳密碼的識別者和氨基酸的轉運者;rRNA是組成核糖體的部分,而核糖體是蛋白質合成的機械。細胞中還有許多種類和功能不一的小型RNA,可調節(jié)基因表達。而其他如I、II型內含子、RNaseP、HDV、核糖體RNA等等都有催化生化反應過程的活性,即具有酶的活性,這類RNA被稱為核酶。2、DNA的功能:DNA有傳遞遺傳信息的功能,而蛋白質則是由DNA的指令合成的。鑒定親子關系用得較多的是DNA分型鑒定。人的血液、毛發(fā)、唾液、口腔細胞等都可以用于用親子鑒定,十分方便。DNA是人身體內細胞的原子物質。每個原子有46個染色體,另外,男性的精子細胞和女性的卵子,各有23個染色體,當精子和卵子結合的時候。這46個原子染色體就制造一個生命,因此,每人從生父處繼承一半的分子物質,而另一半則從生母處獲得。RNA由核糖核苷酸經磷酸二酯鍵縮合而成長鏈狀分子。
石蠟包埋組織RNA快速提取試劑盒(離心柱型):原理簡介:改進的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細胞和滅活RNA酶,然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗液將細胞代謝物、蛋白等雜質去除,較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA(RNA)從硅基質膜上洗脫。試劑盒特點:1、離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復性好。克服了國產試劑盒膜質量不穩(wěn)定的弊端。2、結合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好,純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點,不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過程,RNA可以直接從離心柱上洗脫避免了過度干燥不易溶解問題。3、獨有的MRL裂解液配方,可以有效的消除基因組污染。4、多次漂洗去蛋白過程,提取RNA純度更高。拭子RNA提取試劑的選擇?對離心柱法而言,拭子核酸得率的高低。珠海RNA提取試劑直銷廠家
RNA提取試劑注意事項:需自備氯仿,異丙醇,DEPC,75%乙醇(DEPC水配制),和DEPC水。珠海RNA提取試劑直銷廠家
血漿/血清中miRNA提取試劑盒:是專門針對血清、血漿樣本中miRNA提取而開發(fā)的,利用吸附柱法從血清、血漿樣品中簡單快捷提取高純度高質量的miRNA。該試劑盒中的裂解液miRBP1及柱結合液miRBP2具有高效裂解及提取效果。試劑盒中的吸附柱采用特殊的硅基質膜材料,對RNA尤其是smallRNA(<200nt)具有結合能力,與常用的抗凝劑(包括肝素、EDTA、檸檬酸鈉、草酸鈉)兼容,得到的miRNA可直接用于RT-PCR和Northern雜交等后續(xù)分子生物學實驗操作。普通植物總RNA提取試劑盒:采用進口硅基質膜制作的總RNA吸附柱,可以從普通植物的根、莖、葉中快速提取總RNA,30~40分鐘內即可完成提取過程,提取的總RNA純度高,沒有DNA和蛋白質的污染,適用于RT-PCR、qRT-PCR、芯片分析、Northernblot雜交等實驗??俁NA吸附柱保證RNA提取速度快,提取效率高。高效去除植物組織中的色素、酚類等雜質,提取RNA的純度高,產量大。珠海RNA提取試劑直銷廠家