詳細步驟如下:1.75%酒精浸泡大鼠尾巴30min;2.將尾巴剪開、去掉皮毛,并剪成小段(3cm左右),抽出銀色的尾鍵;3.把剪碎的尾鍵置于150ml,0.1%消過毒的醋酸中,4℃放置,并不時振蕩;4.48h后取上清,4000轉(zhuǎn)離心30min后,取上清;5.分裝上清(鼠尾膠)4度(或-20度)保存。有時可繼續(xù)向4。中沉淀中加入10-20ml醋酸,重復以上步驟,以制備更多的鼠尾膠。在使用時,先將冰存的膠原液在室溫下解凍,再按以下步驟包被培養(yǎng)器皿:1)用吸管吸取膠原液,在無菌的培養(yǎng)器皿的生長面內(nèi)壁上均勻地涂上薄薄的一層膠原溶液。2)若包被的是培養(yǎng)瓶,可向培養(yǎng)瓶通入氨氣或用浸有氨水的棉球封口片刻。讓氨氣充入瓶內(nèi)后,即可旋緊瓶蓋或塞緊瓶塞。若為培養(yǎng)皿或板的話,可將培養(yǎng)皿或板放在已消毒的飯盒內(nèi),將浸有氨水的棉球放入飯盒內(nèi),蓋緊飯盒蓋,四周用封口膠封死。通常情況下骨質(zhì)總量中的鈣、鎂、磷等無機物質(zhì)光占總量的百分之幾而膠原蛋白等有機物質(zhì)卻要占超過80%。合肥鼠尾膠原進貨價
鼠尾Ⅰ型膠原:材料與方法:1.主要材料、試劑和儀器鼠尾、鹽酸、等滲氯化鈉溶液、鈣液、磷液均購自上海晶純生化科技股份有限公司。日立高新TEMHT770(日本日立公司);多功能粉末X射線衍射儀。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白取大鼠尾巴洗凈,用75%的乙醇浸泡5min。將尾巴剪開,去掉皮毛,并剪成小段,抽出銀色的肌腱。將肌鍵剪斷置于平皿中,用無菌等滲氯化鈉溶液浸泡。吸去等滲氯化鈉溶液,將肌鍵置于平皿中剪碎,按每克肌鍵50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液。搖晃,將肌鍵分散于醋酸溶液中,4℃放置一周,然后以2186×g離心20min。在醋酸溶液的酸解下,肌腱水解成膠凍狀凝膠,置于冰箱4℃保存。杭州正規(guī)鼠尾膠原進貨價我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導致丟失蛋白。
含細胞三維膠原凝膠的制備(以配制1mg/mL三維膠1mL為例)準備好懸浮于培養(yǎng)液的細胞,并放置于冰浴中。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入23μL10×PBS或10×培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時需要測定pH值)。加入760μL的細胞懸浮液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,加入適當體積的細胞培養(yǎng)液,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。本品在室溫下pH中性時可迅速成膠,在操作過程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存,切勿凍存,有效期一年。
膠原蛋白的功效與作用:可以預防心血管病。研究表明,膠原蛋白可以降低血甘油三酯和膽固醇,并可增高體內(nèi)某些缺乏的必需微量元素,從而使其維持在一個相對正常的范圍之內(nèi),是一種理想的降血脂食品。此外,膠原蛋白在協(xié)助機體排出鋁質(zhì),減少鋁質(zhì)在體內(nèi)聚集方面也有獨特之處。鋁對人體有害,研究表明,日前逐漸增多的老年癡呆癥與鋁的攝入量有關,同時膠原蛋白有加速血紅蛋白和紅細胞生成的功效,它具有改善循環(huán)、對、缺血性腦病有利。鼠尾膠原蛋白的用途很普遍,可用于化妝品,工業(yè)和食品生產(chǎn)等領域。
膠原蛋白的提取方法:1.堿法提取:堿法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等。如Holzer等[5]采用1%~1.5%石灰水浸泡的方法提取膠原蛋白。由于它容易造成肽鍵水解,因此得到的水解產(chǎn)物分子量比較低。所以,若想保留膠原的三股螺旋結(jié)構,此法不可取。2.鹽法提取:鹽法提取膠原蛋白所用的中性鹽有鹽酸-三羥甲基胺基甲烷(Tris-HCl)、氯化鈉、檸檬酸鹽等。在中性條件下,當鹽的濃度達到一定量時,膠原溶解。并且可采用不同濃度的氯化鈉對提取的膠原蛋白進行鹽析處理,可以沉淀出不同類型的膠原蛋白。制備鼠尾膠原:取大鼠尾巴洗凈,75%酒精浸泡5分鐘。成都正規(guī)鼠尾膠原廠家
從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。合肥鼠尾膠原進貨價
鼠尾膠原,10mg包裝,配制方法如下:1.配0.1M的乙酸溶液100ml。即取575ul冰乙酸加超純水至100ml,容量瓶配制比較準確。2.用吸管吸取10ml剛配好的0.1M乙酸溶液(不要用*加,吸十次不如加一次z準確),加入盛膠原的瓶中,輕輕顛倒,不要震蕩,蛋白容易起泡。幾分鐘即可,蛋白質(zhì)非常好溶解。3.將膠原溶液移入事先壓好的玻璃瓶中,比青霉素瓶大點的就行。用*在瓶底加1ml氯仿,打到一檔就行,避免加入氣泡。然后4度過夜除菌。4.第二天將上層膠原溶液分裝進EP管中。用封口膜封口,4度保存,勿冷凍。合肥鼠尾膠原進貨價