廣州細胞高效轉染試劑銷售廠家

細胞轉染的注意事項：血清A、DNA-陽離子脂質體復合物形成時不能含血清，因為血清會影響復合物的形成。B、一般細胞對無血清培養(yǎng)可以耐受幾個小時沒問題，轉染用的培養(yǎng)液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被認為會降低轉染效率，轉染培養(yǎng)基中加入血清需要對條件進行優(yōu)化。C、對于對血清缺乏比較敏感的細胞，可以使用營養(yǎng)豐富的無血清培養(yǎng)基，或者在轉染培養(yǎng)基中使用血清。對血清缺乏比較敏感的貼壁細胞，建議使用**轉染試劑。有條件的話，可以用無血清培養(yǎng)基代替PBS洗細胞兩遍，注意洗的時候要輕，靠邊緣緩緩加入液體，然后不要吹吸細胞而是轉動培養(yǎng)板讓液體滾動在細胞表面。如果洗的太厲害，細胞又損失一部分，加了脂質體后，細胞受影響就更大了，死亡細胞會增多一般的瞬時轉染 方法多采用脂質體法。廣州細胞高效轉染試劑銷售廠家

細胞轉染的注意事項：物品(PS)物品，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉染的培養(yǎng)基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性，使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率低。所以，在轉染培養(yǎng)基中不能使用物品，甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品。這樣，在轉染前也不必潤洗細胞。對于穩(wěn)定轉染，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素，ICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外，為了保證無血清培養(yǎng)基中細胞的健康生長，使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量。金華細胞高效轉染試劑產品介紹果觀察到轉染效率降低，可以試著轉染新鮮培養(yǎng)的細胞以恢復較佳結果。

DNA細胞轉染步驟：1.提前現(xiàn)在細胞鋪板提前現(xiàn)在將細胞種植在24孔板中，以轉染時細胞密度在60％左右為宜。2.轉染過程⑴將0.8μg的DNA用25μl無血清稀釋液稀釋，充分混勻，制成DNA稀釋液。注意：無血清稀釋液建議采用OPTI-MEM、無血清DMEM或1640。⑵將2μlEntransterTM-H4000用25μl無血清稀釋液體稀釋，充分混勻，制成EntransterTM-H4000稀釋液。室溫靜置5分鐘。⑶將EntransterTM-H4000稀釋液分別加入到DNA稀釋液中，充分混勻（可用振蕩器振蕩或用加樣器吹吸10次以上），室溫靜置15分鐘。轉染復合物制備完成。⑷將轉染復合物加入到含細胞和完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器上，輕柔混勻。注意：①對本試劑，采用含血清的全培養(yǎng)基有助于提升轉染效率。②完全培養(yǎng)基可加物品。

細胞轉染實驗注意事項：1.如為貼壁生長細胞，一般要求在轉染前一日，必須應用胰酶處理成單細胞懸液，重新接種于培養(yǎng)皿或瓶，轉染當日的細胞密度以70-90%（貼壁細胞）或2×106-4×106細胞/ml（懸浮細胞）為宜，較好在轉染前4h換一次新鮮培養(yǎng)液。2.用于轉染的質粒DNA必須無蛋白質，無RNA和其他化學物質的污染，OD260/280比值應在1.8以上。3.培養(yǎng)基中的血清在開始準備DNA和陽離子脂質體試劑稀釋液時要使用無血清的培養(yǎng)基，因為血清會影響復合物的形成。其實，只要在DNA-陽離子脂質體復合物形成時不含血清，在轉染過程中是可以使用血清的。細胞密度以及轉染的時間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉染效率的重要因素。

瞬時轉染和轉染效率的監(jiān)測：基因的瞬時表達在24-72小時內就結束了。這種快速的瞬時表達非常適用于驗證質粒表達和監(jiān)測轉染步驟的效率?？梢允褂脠蟾婊騺泶_定優(yōu)化條件，其表達蛋白易檢測，在目的細胞中不含此蛋白或水平很低。常用的報告基因包括氯霉素乙酰轉移酶（CAT），綠色熒光蛋白（GFP），熒光素酶（Lux或Luc）以及b-半乳糖苷酶（b-gal）?？梢允褂煤唵蔚姆峭凰胤椒z測b-gal的表達以測定轉染效率和活性。pCMVSPORT-bgal質粒包含CMV啟動子調控下的LacZ基因，轉染入真核細胞內后可以直接表達bgal。結合簡單的檢測步驟，可以做為監(jiān)測轉染條件的一種方便靈敏的方法。因為DNA攝入效率和表達水平在不同實驗中差異較大，實驗必須很小心。細胞高效轉染試劑哪里買

由于脂質體對細胞有一定的毒性，所以轉染時間一般不超過24小時。廣州細胞高效轉染試劑銷售廠家

細胞轉染：(1)轉染試劑的準備A.將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。B.震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存，使用前還需震蕩，。(2)選擇合適的混合比例(1：1-1：2/脂質體體積：DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉染試劑，再次震蕩。(3)將混合液在室溫放置10—15分鐘。(4)吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次。(5)加入混合液，將細胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時。(6)到時后，根據細胞種類決定是否移除混合液，之后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時。廣州細胞高效轉染試劑銷售廠家