為了給醫(yī)療和科學(xué)領(lǐng)域提供 、值得信賴的產(chǎn)品及專業(yè)服務(wù),數(shù)十年以來,除持續(xù)在營銷與服務(wù)上的改進(jìn)外,力康一直不懈努力優(yōu)化供應(yīng)鏈管理和生產(chǎn)流程。我們擁有專業(yè)的質(zhì)量控制體系及高度整合的生產(chǎn)模式,在客戶需求鑒別的基礎(chǔ)上,嚴(yán)格執(zhí)行規(guī)范的作業(yè)流程,準(zhǔn)確地使用作業(yè)工具、規(guī)范作業(yè)方法和生產(chǎn)記錄,并按照作業(yè)標(biāo)準(zhǔn)把控各個(gè)生產(chǎn)和檢驗(yàn)環(huán)節(jié),實(shí)時(shí)進(jìn)行質(zhì)量測(cè)量和監(jiān)督檢查,控制產(chǎn)品質(zhì)量,使之符合質(zhì)量技術(shù)要求。無論是采購、生產(chǎn)、新品開發(fā)、成品抽檢還是改進(jìn)產(chǎn)品,我們認(rèn)真對(duì)待每個(gè)環(huán)節(jié)的檢驗(yàn),關(guān)注細(xì)節(jié),了解產(chǎn)品質(zhì)量現(xiàn)狀,積極應(yīng)對(duì)測(cè)試中發(fā)現(xiàn)的問題,采取措施來滿足客戶的需求,“不允許不合格品件進(jìn)入下一道工序”是我們的一貫宗旨。PCR實(shí)驗(yàn)室在儀器設(shè)備等硬件上要滿足開展臨床檢驗(yàn)的條件,包括生物安全柜和PCR儀。國產(chǎn)梯度PCR儀廠家直銷價(jià)
目前,采用熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)可以對(duì)淋球菌、沙眼衣原體、解脲支原體、人類瘤病毒、單純皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、結(jié)核分枝桿菌、EB病毒和巨細(xì)胞病毒等病原體進(jìn)行定量測(cè)定。與傳統(tǒng)的檢測(cè)方法相比具有靈敏度高、取樣少、快速簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。如:結(jié)核菌基因診斷的意義主要表現(xiàn)在:a.區(qū)分TB與其它分枝桿菌;b.檢測(cè)TB耐藥基因;c.提高TB的陽性檢出率。⑵產(chǎn)前診斷到目前為止,人們對(duì)遺傳性物質(zhì)改變引起的遺傳性疾病還無法,只能通過產(chǎn)前監(jiān)測(cè),減少病嬰出生,以防止各類遺傳性疾病的發(fā)生,如為減少X連鎖遺傳病患兒的出生,從孕婦的外周血中分離胎兒DNA,用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)其Y性別決定區(qū)基因是一種無創(chuàng)傷性的方法,易為孕婦所接受。⑶藥物療效考核對(duì)乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)定量分析顯示:病毒量與某些藥物的療效關(guān)系。HCV高水平表達(dá),干擾素作用不敏感,而HCV低滴度,干擾素作用敏感;在拉米夫定過程中,HBV-DNA的血清含量曾有下降,隨后若再度上升或超出以前水平,則提示病毒發(fā)生變異。如PCR技術(shù)在HBV檢測(cè)中的應(yīng)用及意義:a.了解乙肝病毒在體內(nèi)存在的數(shù)量。b.是否復(fù)制。c.是否傳染,傳染性有多強(qiáng)。d.是否有必要服藥。 國產(chǎn)梯度PCR儀批發(fā)價(jià)PCR儀也叫基因擴(kuò)增儀。
PCR基因擴(kuò)增法在遺傳性疾病產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用,遺傳病是由于遺傳物變化而引起的機(jī)體某一功能或缺陷或異常所致的疾病,其根本變化在于遺傳物質(zhì)。苯西酮尿癥(PKU)是一種常染色體隱性遺傳病,患者因苯丙酸羥化酶轉(zhuǎn)化為酷氨酸,使苯氨酸及其代謝物在體內(nèi)大量蓄積,出現(xiàn)腦組損傷及不可逆性智力發(fā)育障礙。PKU患者出生時(shí)正常,新生兒一經(jīng)確診為PKU停止母乳喂養(yǎng)采用低苯丙氨酸欽食療法8—10年,可使患者智力水平發(fā)展維持正常。由于低苯丙氨酸欽食非常昂貴,一般家庭難以承受,因此,施行產(chǎn)前診斷,防止患兒出生是比較好的選擇。PAH只在肝細(xì)胞中表達(dá),不能用血細(xì)胞,成纖維細(xì)胞、羊水、絨毛細(xì)胞進(jìn)行酶活性分析,只能進(jìn)行基因診斷。PKU的基因變化并非全部PAH基因的缺失,而是以點(diǎn)突變?yōu)橹饕憩F(xiàn)形式,而且其突變位點(diǎn)很多。必須使用PCR擴(kuò)增結(jié)合,ASO,SSCP或使用擴(kuò)增片段長度多態(tài)性分析(AmpFLA)進(jìn)行檢測(cè),這些技術(shù)都較復(fù)雜,檢驗(yàn)人員須經(jīng)專業(yè)培訓(xùn)。
選擇該物種使用頻率高的密碼子,以降低引物的簡(jiǎn)并性。③應(yīng)努力避免3’末端的簡(jiǎn)并,對(duì)于大多數(shù)氨基酸殘基來說,意味著引物3’末端不要位于密碼子的第三位。④在一些多義位置使用脫氧次黃嘌呤(dI)代替簡(jiǎn)并堿基。4.測(cè)序引物設(shè)計(jì)當(dāng)然,測(cè)序引物的設(shè)計(jì)一般都由測(cè)序公司來完成,如果需要自己設(shè)計(jì)的話;那么除了按照上面所提到的引物設(shè)計(jì)通用標(biāo)準(zhǔn)外,還需要注意兩點(diǎn):①測(cè)序引物的特異性的標(biāo)準(zhǔn)掌握應(yīng)該更嚴(yán)格一些,也就是說設(shè)計(jì)時(shí)更優(yōu)先考慮特異性。因?yàn)樵跍y(cè)序反應(yīng)中,如果引物與模板在非預(yù)期位置退火并引發(fā)鏈延伸,會(huì)對(duì)結(jié)果對(duì)來很大的干擾甚至造成結(jié)果無法識(shí)讀。②測(cè)序引物的Tm值適當(dāng)高一些?,F(xiàn)在大部分測(cè)序反應(yīng)均選用耐熱的測(cè)序級(jí)DNA聚合酶來催化,并采用PCR的熱循環(huán)程序。選用的測(cè)序引物的Tm值稍高一些,有助于使反應(yīng)順利跨過待測(cè)模板的二級(jí)結(jié)構(gòu)區(qū),也有助于降低非特異反應(yīng)。5.探針的設(shè)計(jì)探針的設(shè)計(jì),根據(jù)不同的用途各有其設(shè)計(jì)特點(diǎn),這里只是就通用的原則進(jìn)行討論:①探針的長短一般在20-50核苷酸之間,過長合成成本高,且易出現(xiàn)聚合酶合成錯(cuò)誤,雜交時(shí)間長。太短則特異性下降。②注意G和C的含量努力控制在40-60%,同時(shí)一種堿基連續(xù)重復(fù)不超過4個(gè),以免非特異性雜交產(chǎn)生。 DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。
熒光定量PCR儀因操作方便、運(yùn)行速度快、實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確,受到越來越多的分子生物學(xué)研究者青睞。在實(shí)驗(yàn)技術(shù)成熟的現(xiàn)今,難得不是實(shí)驗(yàn)技術(shù)上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀——你要征詢實(shí)驗(yàn)室成員的意見、分析實(shí)驗(yàn)室目前乃至將來的需求、平衡實(shí)驗(yàn)室的預(yù)算,更要詳細(xì)研究各種極富誘惑力的宣傳資料。面對(duì)各種不同性能的產(chǎn)品,您又該如何選擇呢?首先建議大家走出認(rèn)識(shí)熒光定量PCR的兩個(gè)誤區(qū):誤區(qū)一:儀器通道越多越好隨著PCR技術(shù)的成熟運(yùn)用,多重?cái)U(kuò)增越來越熱鬧,熒光定量PCR儀也不能幸免。在使用有些廠家5通道的熒光定量儀時(shí),為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確性和準(zhǔn)確性都要在實(shí)驗(yàn)中使用ROX(一種熒光染料)或Referencedye,這些熒光染料都必須單獨(dú)使用一個(gè)檢測(cè)通道。這樣以來,真正能檢測(cè)多重PCR熒光信號(hào)的有效通道只有4個(gè),而且使用校正染料可能會(huì)增加后期的使用成本??紤]多重?zé)晒舛縋CR的通道數(shù)的時(shí)候也應(yīng)該從實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況出發(fā),多重PCR并非人人適用、人人可用,因?yàn)樗箤?shí)驗(yàn)復(fù)雜化了。誤區(qū)二:real-timePCR儀無需梯度功能對(duì)于使用染料法的定量PCR反應(yīng),雖然有各種各樣的PCR引物設(shè)計(jì)軟件或者經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算熔解溫度(Tm值),但運(yùn)用的公式不同、引物序列不同。PCR技術(shù)起初的臨床應(yīng)用就是從檢測(cè)鐮狀細(xì)胞和β-地中海貧血的基因突變開始的。國產(chǎn)實(shí)驗(yàn)室PCR儀規(guī)格有哪些
PCR擴(kuò)增儀通常由熱蓋部件、熱循環(huán)部件、傳動(dòng)部件、控制部件和電源部件等部分組成。國產(chǎn)梯度PCR儀廠家直銷價(jià)
PCR儀的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:1、模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備;2、模板DNA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合;3、引物的延伸:DNA模板--引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈",而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個(gè)循環(huán)需2~4分鐘,2~3小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬倍(Plateau)。到達(dá)平臺(tái)期所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。在此同時(shí)認(rèn)識(shí)到蛋白質(zhì)是接受RNA的遺傳信息而合成的。50年代Zamecnik等在形態(tài)學(xué)和分離的亞細(xì)胞組分實(shí)驗(yàn)中已發(fā)現(xiàn)微粒體(microsome)是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成的部位。 國產(chǎn)梯度PCR儀廠家直銷價(jià)
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