移動(dòng)箱式PCR實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格按照生物安全實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)建造,配備有各類儀器設(shè)備,注重保障實(shí)驗(yàn)人員安全,同時(shí)具備機(jī)動(dòng)靈活、反應(yīng)迅速等特點(diǎn),協(xié)助前線醫(yī)院開展檢測(cè)工作,為防控奉獻(xiàn)綿薄之力。由于集裝箱在出廠前已經(jīng)完成了單個(gè)箱體里面配置的所有安裝,水、電、風(fēng)、廢水和廢氣排放等系統(tǒng)已經(jīng)在箱體配備,同時(shí)保證了外面環(huán)境的安全。在現(xiàn)場(chǎng)基礎(chǔ)平整的條件下,只需要簡(jiǎn)單的進(jìn)行箱體吊裝安放、給水和用電對(duì)接即可——在極端情況下甚至可以在無水無電的情況下短時(shí)運(yùn)行,真正做到組裝迅速。對(duì)接安裝本身不需要非常專業(yè)的人員,常規(guī)的疾控維修人員或工程人員就可以完成對(duì)接。箱體安放位置一般在室外,對(duì)于病人的隔離或控制病毒擴(kuò)散都是有利的。室外空氣流通快,不會(huì)像室內(nèi)空氣那樣高度聚集及停留產(chǎn)生氣溶膠導(dǎo)致病毒擴(kuò)散的風(fēng)險(xiǎn)加大,箱式PCR實(shí)驗(yàn)室有效的避免了聚集性和傳染性,當(dāng)箱式PCR實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部環(huán)境受到污染時(shí),可以快速通過送排風(fēng)系統(tǒng)置換新鮮的空氣達(dá)到實(shí)驗(yàn)室凈化的要求。箱式PCR實(shí)驗(yàn)室可以重復(fù)使用,當(dāng)結(jié)束以后,經(jīng)過專業(yè)人員的消毒,可以重新運(yùn)到疾控中心、醫(yī)院、港口或者第三方檢測(cè)等單位再次使用,也可經(jīng)過專業(yè)存放和維護(hù),待需要時(shí)重新投入使用。實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)是近年來的新型檢測(cè)技術(shù),已成為分子醫(yī)學(xué)/生物學(xué)研究的工具,并在許多領(lǐng)域得到了應(yīng)用.PCR儀規(guī)格有哪些
1.一般性原則(1)長(zhǎng)度:一般引物互補(bǔ)區(qū)的長(zhǎng)度為16-25bp,引物互補(bǔ)區(qū)的4×(G十C)十2×(A十T)不要沒有必要大于70,一般也不要低于50(2)G十c含量:好在45%一55%之間,但有時(shí)受模板限制,無法理想化。但在有幾種選擇時(shí),可以把G十c含量接近50%作為參數(shù)之一(3)堿基分布的隨機(jī)性:應(yīng)避免連續(xù)出現(xiàn)4個(gè)以上的單一堿基。尤其是不應(yīng)在其3’端出現(xiàn)超過3個(gè)的連續(xù)G或C,否則會(huì)使引物在G十C富集序列區(qū)錯(cuò)誤引發(fā)。(4)引物自身:不能含有很長(zhǎng)的牢固的自身互補(bǔ)序列,尤其是引物3‘端回折形成的發(fā)夾不要一般超過3堿基,否則會(huì)影響引物與模板的結(jié)合(5)引物之間:兩個(gè)引物之間不應(yīng)有很長(zhǎng)的牢固的互補(bǔ)或同源堿基,尤應(yīng)避免3’端的互補(bǔ)重疊。2.具體原則①引物長(zhǎng)度;特異性一般通過引物長(zhǎng)度和退火溫度控制。如果PCR的退火溫度設(shè)置在近于引物Tm值(引物/模板雙鏈體的解鏈溫度)幾度的范圍內(nèi),18到24個(gè)堿基的寡核苷酸鏈?zhǔn)怯泻芎玫男蛄刑禺愋缘?。引物越長(zhǎng),擴(kuò)增退火時(shí)被引發(fā)的模板越少。為優(yōu)化PCR反應(yīng),使用確保溶解溫度不低于54℃的短的引物,可獲得好的效率和特異性??偟膩碚f,好在特異性允許的范圍內(nèi)尋求安全性。每增加一個(gè)核苷酸,引物特異性提高4倍;這樣,大多數(shù)應(yīng)用的短引物長(zhǎng)度為18個(gè)核苷酸。 力康熒光定量PCR儀廠家直銷價(jià)通過PCR進(jìn)行基因分型,也是對(duì)遺傳病中的突變進(jìn)行遺傳分析的一個(gè)基本方式。
引物設(shè)計(jì)時(shí)使合成的寡核苷酸鏈(18~24聚物)適用于多種實(shí)驗(yàn)條件仍不失為明智之舉。②引物的二級(jí)結(jié)構(gòu)包括引物自身二聚體、發(fā)卡結(jié)構(gòu)、引物間二聚體等。這些因素會(huì)影響引物和模板的結(jié)合從而影響引物效率。對(duì)于引物的3’末端形成的二聚體,應(yīng)控制其ΔG大于,因?yàn)榇朔N情形的引物二聚體有進(jìn)一步形成更穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的可能性,引物中間或5’端的要求可適當(dāng)放寬。引物自身形成的發(fā)卡結(jié)構(gòu),也以3’端或近3’端對(duì)引物-模板結(jié)合影響更大;影響發(fā)卡結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性的因素除了堿基互補(bǔ)配對(duì)的鍵能之外,與莖環(huán)結(jié)構(gòu)形式亦有很大的關(guān)系。應(yīng)盡量避免3’末端有發(fā)卡結(jié)構(gòu)的引物。③引物GC含量和Tm值PCR引物應(yīng)該保持合理的GC含量。含有50%的G+C的20個(gè)堿基的寡核苷酸鏈的Tm值大概在56~62℃范圍內(nèi),這可為有效退火提供足夠熱度。一對(duì)引物的GC含量和Tm值應(yīng)該協(xié)調(diào)。協(xié)調(diào)性差的引物對(duì)的效率和特異性都較差,因?yàn)榻档土薚m值導(dǎo)致特異性的喪失。這種情況下引物Tm值越高,其錯(cuò)誤引發(fā)的機(jī)率也越大。若采用太高的退火溫度,Tm值低的引物對(duì)可能完全不發(fā)揮作用。在從一批在特定序列范圍內(nèi)已合成好的寡核苷酸中選擇一對(duì)新的引物時(shí),這種GC含量和Tm值的協(xié)調(diào)非常關(guān)鍵。一般來說。
基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)又稱PCR實(shí)驗(yàn),其特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加,PCR是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法,應(yīng)用于生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域,例如:特定基因的檢測(cè)和診斷,DNA指紋、個(gè)體識(shí)別、親子鑒定及法醫(yī)物證,動(dòng)、植物檢疫,動(dòng)物及其衍生產(chǎn)品檢測(cè),動(dòng)物飼料、化妝品、食品衛(wèi)生檢測(cè),轉(zhuǎn)基因作物與轉(zhuǎn)基因微生物檢測(cè)等。PCR實(shí)驗(yàn)室原則上為試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域并設(shè)有走廊,各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)緩沖間,工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區(qū)應(yīng)是分隔的,各工作區(qū)有明顯的標(biāo)志,不能直通,如果緊密相連,需安裝物品傳遞窗。前兩區(qū)為擴(kuò)增前區(qū),后兩區(qū)為擴(kuò)增后區(qū),擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開。實(shí)驗(yàn)材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等,只能從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū),即從試劑準(zhǔn)備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū),不得逆向流動(dòng)。實(shí)驗(yàn)室的氣流也應(yīng)從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū),不得逆向流動(dòng)。各工作區(qū)頂部應(yīng)安裝紫外燈,紫外燈的波長(zhǎng)為254nm,每20㎡一支40W的紫外燈。目前,PCR已成為實(shí)驗(yàn)室中的一項(xiàng)常規(guī)技術(shù),是分子生物學(xué)家們不可缺少的工具.
原位PCR儀:用于從細(xì)胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細(xì)胞內(nèi)基因擴(kuò)增儀稱作原位PCR儀。如病源基因在細(xì)胞的位置或目的基因在細(xì)胞內(nèi)的作用位置等。是保持細(xì)胞或組織的完整性,使PCR反應(yīng)體系滲透到組織和細(xì)胞中,在細(xì)胞的靶DNA所在位置上進(jìn)行基因擴(kuò)增。不但可以檢測(cè)到靶DNA,又能標(biāo)出靶序列在細(xì)胞內(nèi)的位置,對(duì)于在分子和細(xì)胞水平上研究疾病的發(fā)病機(jī)理和臨床過程及病理的轉(zhuǎn)變有重大的實(shí)用價(jià)值。主要應(yīng)用于臨床、科研。原位PCR儀,主要應(yīng)用于:檢測(cè)外源性基因片段,提高檢出率,集中在病毒的檢查上,如HIV、HPV、HBV、CMV等;觀察病原體在體內(nèi)分布規(guī)律;內(nèi)源性基因片段,如人體的單基因病、重組基因、易位的染色體、Ig的mRN段、基因片段等;檢測(cè)導(dǎo)入基因;遺傳病基因檢測(cè)如β-地中海貧血。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀:在普通PCR儀的基礎(chǔ)上增加一個(gè)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)的PCR儀稱作熒光定量PCR儀。其PCR擴(kuò)增原理和普通PCR儀擴(kuò)增原理相同,只是PCR擴(kuò)增時(shí)加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記,使用引物和熒光探針同時(shí)與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增。擴(kuò)增的結(jié)果通過熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號(hào)連接輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)得出量化的實(shí)時(shí)結(jié)果輸出。把這種PCR儀叫做實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。PCR儀的應(yīng)用涉及大部分生命科學(xué)領(lǐng)域:食品檢測(cè),臨床檢驗(yàn),疾病控制,檢驗(yàn)檢疫,科研實(shí)驗(yàn)室,環(huán)境衛(wèi)生等.實(shí)時(shí)定量PCR儀價(jià)格便宜
PCR的特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加。PCR儀規(guī)格有哪些
PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseChainReaction)的簡(jiǎn)稱。是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DN段,可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。其特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加,是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法,PCR實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域,PCR實(shí)驗(yàn)室主要實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目:檢測(cè),乙型肝炎,禽疫病,基因的檢測(cè)和診斷,DNA指紋,個(gè)體識(shí)別,親子鑒定及法醫(yī)物證等等。pcr實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)建設(shè)中容易出現(xiàn)的問題:1、PCR實(shí)驗(yàn)室的空氣流向必須嚴(yán)格按照試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)空氣壓力逐漸遞減方式進(jìn)行,防止擴(kuò)增產(chǎn)物順空氣氣流進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域。需要嚴(yán)格的通風(fēng)設(shè)計(jì),若通風(fēng)設(shè)計(jì)不合理,會(huì)使風(fēng)速流向混亂,甚至危害人們健康。2、人流路徑與物流路徑設(shè)計(jì)不合理進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室區(qū)域工作人員應(yīng)該按照以下路徑:公共清潔區(qū)——更衣間(更換潔凈服)——緩沖間——污染實(shí)驗(yàn)區(qū)工作人員退出實(shí)驗(yàn)室的路徑為:污染試驗(yàn)區(qū)——緩沖間——淋浴間。 PCR儀規(guī)格有哪些
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