1993年,美國科學(xué)家Mulis眾望所歸地獲得了諾貝爾化學(xué)獎,他所取得的成就是發(fā)明了PCR技術(shù)。PCR,中文譯為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),其實是一種DNA的快速擴增技術(shù),其擴增效率之高就象核裂變的“鏈?zhǔn)椒磻?yīng)”那樣。PCR技術(shù)通過兩個短的稱為引物的DNA小片段和一種耐熱的酶的作用,可以在3個小時內(nèi)把特定的DNA量提高1000萬倍。這種技術(shù)一問世,立刻引起了分子生物學(xué)研究的一場**,人們利用這種轟動全世界的技術(shù)很快就把微觀領(lǐng)域的生物學(xué)研究地往前推了一步??梢赃@么說,PCR技術(shù)使分子生物學(xué)研究一下子獲得了突破,而且隨著PCR技術(shù)的日趨完善,PCR在人類社會生活中的應(yīng)用也越來越。比如說在“DNA指紋”中我們提到,科學(xué)家們只需要一根頭發(fā)甚至一個細胞就可以完成DNA指紋的鑒定工作,這里實際上就要采用PCR技術(shù),因為一個細胞中的DNA含量實在太少了,人們根本不可能檢測到它的指紋;有了PCR技術(shù)就好辦了,通過PCR技術(shù)把這個細胞中的DN斷擴增1000萬倍,這樣DNA量就足夠作指紋鑒定了。再比如,在醫(yī)院里檢驗血液中的某種病毒,有時病毒量極少(例如病毒攜帶者),通過傳統(tǒng)的檢查方法費力又費時,這時PCR技術(shù)也許就可以幫上忙??梢韵冗x定這種病毒DNA上的一段DNA,設(shè)計合適的引物DNA。 普通PCR儀主要應(yīng)用于科研、教學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗、檢疫等。熒光定量PCR儀銷售廠家
它能降解特異性熒光記探針,因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能。(2)此后熒光雙標(biāo)記探針的運用使在一密閉的反應(yīng)管中能實時地監(jiān)測反應(yīng)全過程。這兩個發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展導(dǎo)致real-timeQ-PCR方法在研究工作中的運用。PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)方式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)方式生成模板,從而進入平臺期。在傳統(tǒng)的PCR中,常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測PCR反應(yīng)的終擴增產(chǎn)物,因此用此終點法對PCR產(chǎn)物定量存在不可靠之處。在real-timeQ-PCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的監(jiān)測和連續(xù)地分析擴增相關(guān)的熒光信號,隨著反應(yīng)時間的進行,監(jiān)測到的熒光信號的變化可以繪制成一條曲線。在PCR反應(yīng)早期,產(chǎn)生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別,而后熒光的產(chǎn)生進入指數(shù)期、線性期和終的平臺期,因此可以在PCR反應(yīng)處于指數(shù)期的某一點上來檢測PCR產(chǎn)物的量,并且由此來推斷模板初的含量。為了便于對所檢測樣本進行比較,在real-timeQ-PCR反應(yīng)的指數(shù)期,首先需設(shè)定一定熒光信號的域值,一般這個域值(threshold)是以PCR反應(yīng)的前15個循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號(baseline)。 力康熒光定量PCR儀廠家直供PCR反應(yīng)的特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性。
而引物3’末端后5到6個核苷酸的錯配應(yīng)盡可能的少。如果3’末端的錯配過多,通過降低反應(yīng)的退火溫度來補償這種錯配不會有什么效果,反應(yīng)幾乎注定要失敗。引物3’末端的另一個問題是防止一對引物內(nèi)的同源性。應(yīng)特別注意引物不能互補,尤其是在3’末端。引物間的互補將導(dǎo)致不想要的引物雙鏈體的出現(xiàn),這樣獲得的PCR產(chǎn)物其實是引物自身的擴增。這將會在引物雙鏈體產(chǎn)物和天然模板之間產(chǎn)生競爭PCR狀態(tài),從而影響擴增成功。引物3’末端的穩(wěn)定性由引物3’末端的堿基組成決定,一般考慮末端5個堿基的ΔG。此值的大小對擴增有較大的影響,負值大,則3’末端穩(wěn)定性高,擴增效率更高,同時也更易于異位引發(fā)。需要注意的是,引物3’末端應(yīng)盡量避免T。實驗證明,以T結(jié)尾的引物即使與T,G或C錯配仍可有效延伸。⑥PCR產(chǎn)物的長度及在耙序列內(nèi)的位置所有的計算機程序都提供對PCR產(chǎn)物長度范圍的選擇。一般說來,PCR產(chǎn)物長度對擴增效率有影響。特定的應(yīng)用情況下,PCR產(chǎn)物長度部分取決于模板材料。預(yù)期產(chǎn)物的特定長度經(jīng)常取決于應(yīng)用的需要。若目的是建立測定特異DN段的臨床檢驗方法,120~300bp的小DNA擴增產(chǎn)物可能是好的。產(chǎn)物應(yīng)具有好的特異性和高的產(chǎn)生效率。
3).無創(chuàng)產(chǎn)前檢查鐮狀細胞貧血(sicklecellanemia)是HBB基因突變引起的常染色體顯性遺傳病,有嚴(yán)重的危害,可以導(dǎo)致高達5%的胎兒死亡率及。而有效的無創(chuàng)產(chǎn)前診斷是預(yù)防鐮狀細胞貧血患兒出生的有效方法。研究人員采用dPCR技術(shù)檢測孕婦胎兒游離DNA(cff-DNA)HBB基因突變。結(jié)果顯示,dPCR技術(shù)能夠確定87%的男性胎兒(n=45)和75%的女性胎兒(n=20)HBB基因的突變狀態(tài)。當(dāng)cff-DNA濃度大于7%時,可以100%的檢測出HBB基因突變[3],可以說是相當(dāng)厲害了。Nacia數(shù)字PCRNaica數(shù)字PCR系統(tǒng)——簡便、快速地完成3通道檢測Naica數(shù)字PCR系統(tǒng)是法國Stilla公司開發(fā)的下一代核酸定量技術(shù)。使用cutting-edge微流體創(chuàng)新型芯片——Sapphire芯片作為數(shù)字PCR過程的耗材。樣品通過毛細通道網(wǎng)格以30,000個微滴的形式進入2D芯片中,可稱作Crystal微滴。Naica數(shù)字PCR擴增實驗在芯片上實現(xiàn)。對微滴成像用以檢測包含擴增片段的微滴。一步是對陽性微滴計數(shù)從而得到的核酸數(shù)量。Naica數(shù)字PCR,結(jié)合了強大的圖像分析技術(shù)和直觀可視的檢測功能,從而達到了數(shù)字PCR定量的置信水平,獲得的數(shù)據(jù)真實可信。 梯度PCR儀多應(yīng)用于科研、教學(xué)機構(gòu)。
力康熒光定量pcr儀X960型數(shù)據(jù)分析系統(tǒng):向?qū)降娜形牟僮鹘缑?,直觀、清晰、功能 -實時記錄熒光信號的原始數(shù)據(jù);涵蓋多種分析模式:相對/ 定量、標(biāo)準(zhǔn)溶解曲線、終點法等位基因鑒定、高分辨率溶解曲線、等溫擴增等;內(nèi)置統(tǒng)計分析工具和自定義公式編輯工具,數(shù)據(jù)無需導(dǎo)出,直接在儀器軟件中分析完成。力康熒光定量pcr儀X960型其他人性化設(shè)計:具有梯度、Touchdown等高級編程功能、WIFI或LAN連接PC端-可實現(xiàn)一臺PC機連接多臺qPCR;低噪音、低能耗、長壽命。PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物.力康熒光定量PCR儀廠家直供
通過PCR進行基因分型,也是對遺傳病中的突變進行遺傳分析的一個基本方式。熒光定量PCR儀銷售廠家
目前,采用熒光定量PCR檢測技術(shù)可以對淋球菌、沙眼衣原體、解脲支原體、人類瘤病毒、單純皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、結(jié)核分枝桿菌、EB病毒和巨細胞病毒等病原體進行定量測定。與傳統(tǒng)的檢測方法相比具有靈敏度高、取樣少、快速簡便等優(yōu)點。如:結(jié)核菌基因診斷的意義主要表現(xiàn)在:a.區(qū)分TB與其它分枝桿菌;b.檢測TB耐藥基因;c.提高TB的陽性檢出率。⑵產(chǎn)前診斷到目前為止,人們對遺傳性物質(zhì)改變引起的遺傳性疾病還無法,只能通過產(chǎn)前監(jiān)測,減少病嬰出生,以防止各類遺傳性疾病的發(fā)生,如為減少X連鎖遺傳病患兒的出生,從孕婦的外周血中分離胎兒DNA,用實時熒光定量PCR檢測其Y性別決定區(qū)基因是一種無創(chuàng)傷性的方法,易為孕婦所接受。⑶藥物療效考核對乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)定量分析顯示:病毒量與某些藥物的療效關(guān)系。HCV高水平表達,干擾素作用不敏感,而HCV低滴度,干擾素作用敏感;在拉米夫定過程中,HBV-DNA的血清含量曾有下降,隨后若再度上升或超出以前水平,則提示病毒發(fā)生變異。如PCR技術(shù)在HBV檢測中的應(yīng)用及意義:a.了解乙肝病毒在體內(nèi)存在的數(shù)量。b.是否復(fù)制。c.是否傳染,傳染性有多強。d.是否有必要服藥。 熒光定量PCR儀銷售廠家
力新儀器(上海)有限公司專注技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品研發(fā),發(fā)展規(guī)模團隊不斷壯大。一批專業(yè)的技術(shù)團隊,是實現(xiàn)企業(yè)戰(zhàn)略目標(biāo)的基礎(chǔ),是企業(yè)持續(xù)發(fā)展的動力。公司以誠信為本,業(yè)務(wù)領(lǐng)域涵蓋數(shù)字化手術(shù)室,實驗室儀器,新生兒科設(shè)備,ICU重癥產(chǎn)品,我們本著對客戶負責(zé),對員工負責(zé),更是對公司發(fā)展負責(zé)的態(tài)度,爭取做到讓每位客戶滿意。公司力求給客戶提供全數(shù)良好服務(wù),我們相信誠實正直、開拓進取地為公司發(fā)展做正確的事情,將為公司和個人帶來共同的利益和進步。經(jīng)過幾年的發(fā)展,已成為數(shù)字化手術(shù)室,實驗室儀器,新生兒科設(shè)備,ICU重癥產(chǎn)品行業(yè)出名企業(yè)。