細(xì)胞培養(yǎng)中建議使用支原體檢測的原因主要有以下幾點:
1. 支原體污染率高:常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染率保守估計在15-35%之間。
2. 影響實驗結(jié)果:支原體污染會嚴(yán)重干擾實驗結(jié)果的可信度,影響培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)和生理特征。
3. 難以用光學(xué)顯微鏡檢測:支原體是極小的細(xì)菌,其細(xì)胞膜周圍沒有細(xì)胞壁,無法用光學(xué)顯微鏡檢測到。
4. 難以消滅:支原體能夠迅速滲透整個實驗室,一旦污染很難徹底消滅。
5. 影響產(chǎn)品質(zhì)量:支原體污染會影響細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量,監(jiān)管機(jī)構(gòu)推薦檢測所有細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物中是否存在支原體。
6. 保證實驗準(zhǔn)確性:定期進(jìn)行支原體檢測和去除,確保無支原體存在細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi),才能獲得準(zhǔn)確的實驗結(jié)果。
科研中常見的支原體檢測方法?廣州細(xì)胞支原體檢測方法等溫擴(kuò)增
支原體去除試劑在清*支原體的過程中可能會對細(xì)胞的生長狀態(tài)產(chǎn)生一定的影響。支原體去除試劑是一種非抗*素類試劑,它通過與支原體膜特異性結(jié)合,改變支原體膜的通透性,從而導(dǎo)致支原體破裂死亡。盡管該產(chǎn)品在作用期間可能會對細(xì)胞的活力和形態(tài)有一定的影響,但由于它不能穿過真核細(xì)胞的細(xì)胞膜,因此不會改變細(xì)胞的任何特性。支原體被清*后,細(xì)胞在后續(xù)的傳代過程中能快速恢復(fù)其正常的生長和增殖狀態(tài),細(xì)胞后續(xù)的生長增殖幾乎無影響。
此外,該產(chǎn)品不含抗*素,不會使支原體發(fā)生耐藥反應(yīng),細(xì)胞毒性小。然而,需要注意的是,不同細(xì)胞對支原體去除試劑的耐受程度有所差異,可以根據(jù)實驗結(jié)果適當(dāng)調(diào)整細(xì)胞量和處理條件。在某些情況下,如果出現(xiàn)細(xì)胞變形、生長緩慢等現(xiàn)象,可以更換成標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液終止作用,或者調(diào)整去除試劑的使用濃度和作用時間。
北京細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測服務(wù)支原體檢測方法LAMP法?
根據(jù)提供的信息,支原體去除試劑是一種混合制劑,通過抑制DNA和支原體生長所必須的相關(guān)蛋白合成來取得良好的支原體清*效果,同時對細(xì)胞無傷害。它被設(shè)計為對細(xì)胞毒性小,不影響后續(xù)的細(xì)胞實驗,包括細(xì)胞活力檢測和細(xì)胞轉(zhuǎn)染等。這表明使用支原體去除試劑去除支原體后,理論上不應(yīng)該對細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率產(chǎn)生負(fù)面影響。
此外,支原體污染本身會對細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率產(chǎn)生負(fù)面影響。研究表明,與未污染的細(xì)胞相比,支原體污染的細(xì)胞轉(zhuǎn)染后具有較低的基因表達(dá)水平。因此,去除支原體后,可以預(yù)期細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率會得到改善,因為移除了影響細(xì)胞正常功能的污染物。
在科研中,支原體檢測是確保細(xì)胞培養(yǎng)純凈性的重要環(huán)節(jié)。以下是一些在科研中常見的支原體檢測方法:
1. 支原體培養(yǎng)法:這是一種傳統(tǒng)的檢測方法,通過將細(xì)胞培養(yǎng)物接種到特定的培養(yǎng)基中,觀察是否有支原體生長。這是直接的檢測方法,但耗時較長,通常需要數(shù)周時間。
2. DNA染色法:使用熒光染料(如Hoechst或DAPI)染色細(xì)胞核,然后通過熒光顯微鏡觀察。這種方法操作簡便,可以快速得到結(jié)果,但特異性不高,可能會有假陽性。
3. 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法:這是一種分子生物學(xué)技術(shù),通過設(shè)計特異性的引物,擴(kuò)增支原體DNA,從而檢測支原體的存在。PCR法具有高靈敏度和特異性,已成為日常細(xì)胞培養(yǎng)維護(hù)的可靠方法。
4. 核酸擴(kuò)增技術(shù)(NAT):NAT技術(shù)通過擴(kuò)增并檢測特定的支原體基因組保守序列來進(jìn)行支原體污染檢測,具有快速、簡便的特點。
細(xì)胞培養(yǎng)為什么建議使用支原體檢測?
qPCR法,即定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(QuantitativePolymeraseChainReaction)法,在支原體檢測中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在以下幾個方面:
1. 快速定性檢測:qPCR法可以快速檢測生產(chǎn)原料、細(xì)胞庫、病毒種子、病毒或細(xì)胞收獲液、治*用細(xì)胞中潛在的支原體污染。
2. 臨床樣本檢測:qPCR法可用于檢測實驗室樣本及臨床樣本中的支原體,具有快速、特異性強(qiáng)、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點。
3. 監(jiān)管要求:基于TaqMan的qPCR測定專門針對檢測細(xì)胞治*和復(fù)雜生物生產(chǎn)樣本中的支原體而開發(fā),其性能滿足或超出監(jiān)管要求,如10CFU/mL。
4. 藥物質(zhì)量控制:qPCR法提供早期檢測支原體污染的方法,適用于藥物質(zhì)量控制,具有快速、高度特異性、靈敏性,并符合國際準(zhǔn)則。
支原體檢測方法qPCR法?南京支原體檢測試劑多少錢
細(xì)胞培養(yǎng)過程中支原體污染怎么預(yù)防?廣州細(xì)胞支原體檢測方法等溫擴(kuò)增
LAMP法,即環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)(Loop-mediated isothermal amplification),是一種在恒定溫度下進(jìn)行的核酸擴(kuò)增方法。它由日本學(xué)者Notomi于2000年開發(fā)。LAMP法檢測有以下特性:
快速高效:LAMP技術(shù)可以在1小時內(nèi)把幾拷貝的目的序列迅速擴(kuò)增到10^9^~10^10^拷貝,擴(kuò)增效率高。
簡便性:LAMP技術(shù)不需要進(jìn)行模板的預(yù)變性,減少了PCR技術(shù)升降溫帶來的影響以及對昂貴、精密實驗儀器的要求,同時擴(kuò)增效率高,可以在較短時間內(nèi)完成檢測。
LAMP法因其快速、高效、特異、靈敏和經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點,已經(jīng)應(yīng)用于病原菌、寄生蟲、病毒、疾病和轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測等領(lǐng)域,并且還將廣泛應(yīng)用于臨床診斷、環(huán)境監(jiān)測、食源安全等領(lǐng)域,具有更為廣闊的發(fā)展應(yīng)用前景。
廣州細(xì)胞支原體檢測方法等溫擴(kuò)增