杭州Protein AG免疫沉淀實驗視頻

來源： 發(fā)布時間：2024-06-21

免疫沉淀Co-IP實驗中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實驗情況。
瓊脂糖珠海綿狀的結構  (直徑 50-150 μm)  可以結合抗體  (繼而結合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結合抗體，而不需借助特殊的專業(yè)設備。瓊脂糖珠呈多孔結構，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸，具有更高的結合載量。
與瓊脂糖珠不同，磁珠是固體，抗體的結合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ，盡管磁珠沒有多孔中心增加結合能力，但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結合表面積滿足高容量的抗體結合。
簡而言之，瓊脂糖珠的結合能力較強，而磁珠在得率，可重復性以及自動化方面有明顯的優(yōu)勢。
免疫沉淀和免疫共沉淀的區(qū)別？杭州Protein AG免疫沉淀實驗視頻

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免疫沉淀技術（Immunoprecipitation, IP）的實驗步驟通常包括以下幾個關鍵環(huán)節(jié)：
1. 細胞裂解：首先需要收集細胞并裂解它們，以釋放細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)。這通常通過添加含有蛋白酶抑制劑的裂解緩沖液來完成，以防止蛋白質(zhì)降解。
2. 裂解物上清：裂解后的細胞混合物通常需要通過離心來去除未破碎的細胞碎片和未裂解的細胞，從而獲得上清。
3. 抗體的添加：將特定于目標蛋白的抗體加入到裂解物中。這些抗體將特異性地結合到目標蛋白上。
4. 免疫復合物的形成：抗體與目標蛋白結合形成免疫復合物。
5. 免疫復合物的捕獲：使用Protein A/G結合的磁珠來捕獲免疫復合物。
6. 洗滌：捕獲免疫復合物后，需要用裂解/洗滌緩沖液多次洗滌，以去除未結合的蛋白質(zhì)和其他污染物。
7. 洗脫：免疫復合物可以通過加入SDS樣品緩沖液進行洗脫，這將導致抗體和抗原變性并從珠子上釋放下來，或者使用低pH緩沖液進行溫和洗脫，以保持蛋白質(zhì)的天然構象。
8. 分析：洗脫后的樣品可以通過SDS-PAGE凝膠電泳、Western blot等方法進行分析，以驗證目標蛋白的存在和狀態(tài)。
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免疫沉淀技術（Immunoprecipitation, IP）是一種用于研究蛋白質(zhì)相互作用和蛋白質(zhì)特性的重要方法。它具有一些明顯的優(yōu)點，但也存在一些局限性。
優(yōu)點:
1. 特異性強：IP技術利用特異性抗體對目標蛋白進行捕獲，因此具有很高的特異性。
2. 富集低豐度蛋白：可以從小量樣本中富集低豐度的目標蛋白，有助于研究稀有蛋白。
3. 研究蛋白質(zhì)相互作用：通過Co-IP等變體技術，可以研究蛋白質(zhì)之間的相互作用。
4. 操作簡便：IP實驗步驟相對簡單，容易在實驗室中實施。

缺點:
1. 對抗體質(zhì)量依賴性高：需要高質(zhì)量的特異性抗體，否則可能導致假陽性或?qū)嶒炇　?
2. 存在非特異性結合：樣本中的其他蛋白質(zhì)可能非特異性地結合到抗體或固相載體上。
3. 可能破壞蛋白質(zhì)的天然構象：裂解和洗滌步驟可能破壞蛋白質(zhì)的天然結構，影響其功能。
4. 可能存在背景噪聲：非特異性結合可能導致背景噪聲，影響結果的清晰度和解釋。

免疫沉淀技術（Immunoprecipitation, IP）在生物醫(yī)學研究中有著廣泛的應用，以下是一些主要的應用領域：
1. 蛋白質(zhì)相互作用研究：IP技術可以用來研究蛋白質(zhì)之間的相互作用，揭示蛋白質(zhì)復合物的組成和蛋白質(zhì)之間的相互作用網(wǎng)絡。
2. 信號轉導研究：通過IP技術，可以富集信號轉導通路中的關鍵蛋白質(zhì)，研究信號轉導的機制和調(diào)控[。
3. 蛋白質(zhì)修飾研究：IP技術可以用于富集經(jīng)過特定修飾的蛋白質(zhì)，例如磷酸化、乙?；?，進而研究蛋白質(zhì)修飾的功能和調(diào)控。
4. 藥物靶點篩選：IP技術可以用于富集藥物靶點蛋白質(zhì)，幫助篩選潛在的藥物靶點。
5. 疾病機制研究：通過分析疾病相關蛋白質(zhì)的相互作用，IP技術有助于揭示疾病的分子機制，為理解疾病的發(fā)展過程和尋找靶點提供重要信息。
6. 藥物相互作用分析：IP技術可以用于分析藥物與蛋白質(zhì)的相互作用，為藥物作用機制研究提供重要信息。
7. 生物標志物發(fā)現(xiàn)：IP技術可以用于鑒定與疾病狀態(tài)相關的蛋白質(zhì)相互作用，篩選出潛在的生物標志物，用于疾病的診斷和預后評估。
免疫沉淀技術IP的實驗設計。

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染色質(zhì)免疫共沉淀（Chromatinimmunoprecipitation，ChIP）技術是目前公認的研究此相互作用的選擇，是真核生物基因表達機制研究中不可或缺的技術之一。
它的基本原理是在活細胞狀態(tài)下，固定蛋白質(zhì)-DNA（染色質(zhì)）復合物，并將其切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過免疫學方法（抗體親和）沉淀此復合體，特異性地富集目的蛋白結合的 DNA，通過對目的片段的純化與后期檢測，從而獲得蛋白質(zhì)與 DNA 相互作用的信息。
這項技術通過蛋白質(zhì)與DNA互作來分析目標基因活性以及已知蛋白質(zhì)的靶基因，被廣泛應用于體內(nèi)轉錄調(diào)控因子與靶基因啟動子上特異核苷酸序列結合方面的研究。該技術常與DNA芯片和分子克隆技術相結合。
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免疫沉淀技術RIP是什么？杭州Protein AG免疫沉淀實驗視頻

RIP技術的優(yōu)勢在于：
1. 特異性：利用特異性抗體，可以精確地捕獲目標RNA結合蛋白及其相互作用的RNA。
2. 應用場景多：適用于研究RNA結合蛋白、miRNA、lncRNA等非編碼RNA與蛋白質(zhì)的相互作用。
3. 技術結合：RIP后的RNA可以用于多種下游分析，如qPCR、測序等，為研究RNA的功能和調(diào)控提供了重要信息。
RIP技術的限制包括：
1. 抗體質(zhì)量：需要高質(zhì)量的特異性抗體，否則可能得到假陽性或假陰性結果。
2. 非特異性結合：可能存在非特異性結合問題，需要仔細的實驗設計和對照來控制。
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