廣州RIP免疫沉淀磁珠貨期

來源： 發(fā)布時間：2024-05-31

免疫沉淀技術（Immunoprecipitation，簡稱IP）是一種生物化學方法，它利用特異性抗體對抗原進行親和純化。在含有目的抗原的細胞裂解液中加入特定的抗體以及Protein A/G-Beads（預先將Protein A/G固定結合在磁珠上），根據(jù)抗原與抗體、Protein A/G與抗體的Fc的特異性，形成“抗原-抗體-Protein A/G-Beads”復合物，清洗離心后去除溶液中未結合的雜蛋白，檢測是否存在目的蛋白。
免疫沉淀技術常用于從細胞或組織裂解物中分離用于免疫印跡檢測或其他檢測技術的蛋白和其他生物分子。它的目標是分離足夠用于Western Blot或其他檢測方法檢測的蛋白質(zhì)。
免疫沉淀技術ChIP的實驗設計。廣州RIP免疫沉淀磁珠貨期

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Co-IP（免疫共沉淀）技術主要用于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用，其應用場景如下：
1. 蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡的鑒定：Co-IP可用于構建蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡，發(fā)現(xiàn)目標蛋白的結合伙伴。
2. 信號傳導途徑的研究：通過Co-IP技術，科學家們發(fā)現(xiàn)了許多關鍵的細胞信號通路，如MAPK和PI3K/Akt通路等，為深入理解這些通路的功能和調(diào)控機制提供了重要線索。
3. 藥物靶點篩選：利用Co-IP技術，研究人員可以篩選潛在的藥物靶點。
疾病機制研究：通過分析疾病相關蛋白質(zhì)的相互作用，Co-IP有助于揭示疾病的分子機制。
4. 抗體藥物開發(fā)：Co-IP可用于研究抗體藥物與其靶標蛋白的結合特性，評估抗體藥物的親和力和特異性。
5. 轉錄因子研究：Co-IP技術可以用于研究轉錄因子與蛋白質(zhì)的相互作用，進而揭示基因調(diào)控網(wǎng)絡。
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ChIP實驗的基本步驟包括：
1. 交聯(lián)（Crosslinking）：細胞被甲醛等交聯(lián)劑處理，使得蛋白質(zhì)和DNA之間的相互作用被固定，形成穩(wěn)定的蛋白質(zhì)-DNA復合物。
2. 細胞裂解：裂解細胞，釋放染色質(zhì)，同時保持蛋白質(zhì)-DNA復合物的完整性。
3. 超聲或酶解：通過超聲或酶解將染色質(zhì)切割成較小的片段，以便于后續(xù)步驟中的免疫沉淀。
4. 免疫沉淀（Immunoprecipitation）：加入針對特定組蛋白修飾或轉錄因子的抗體，這些抗體會特異性地結合到目標蛋白質(zhì)上。
5. 捕獲復合物：使用蛋白A或蛋白G結合的珠子捕獲抗體-蛋白質(zhì)-DNA復合物。
6. 洗滌：洗滌珠子以去除未特異性結合的蛋白質(zhì)和DNA片段。
7. 逆轉錄交聯(lián)：將捕獲的復合物從珠子上洗脫，并進行逆轉錄交聯(lián)，使固定的蛋白質(zhì)-DNA復合物分離。
8. DNA純化：純化從免疫沉淀中得到的DNA片段。
9. 分析：通過qPCR、芯片分析（ChIP-chip）或高通量測序（ChIP-seq）等方法分析沉淀的DNA片段，以確定特定蛋白質(zhì)在基因組上的結合位點。

免疫沉淀實驗步驟：
1. 樣品制備
a. 懸浮細胞樣品處理：離心收集細胞（4℃, 1000g, 5 min），用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制劑的裂解液（裂解液應在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑Cocktail，使蛋白酶抑制劑Cocktail的終濃度為1×）?；靹蚝笾糜诒咸幚?0 min；離心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上備用（或置于-20℃長期保存）。
b. 貼壁細胞樣品處理：移去培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞兩遍；用細胞刮棒刮脫細胞，收集至1.5mL EP管內(nèi)，按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制劑的裂解液（裂解液應在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑Cocktail，使蛋白酶抑制劑Cocktail的終濃度為1×）。吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸?；靹蚝笾糜诒咸幚?0 min；離心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上備用（或置于-20℃長期保存）。
4. 后續(xù)：磁珠預處理——抗體吸附——抗原結合反應——抗體洗脫
免疫沉淀和免疫共沉淀的區(qū)別？

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免疫沉淀技術RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）是一種用于研究細胞內(nèi)RNA與蛋白質(zhì)相互作用的技術。RIP技術可以幫助我們了解轉錄后調(diào)控網(wǎng)絡的動態(tài)過程，并發(fā)現(xiàn)miRNA等非編碼RNA的調(diào)節(jié)靶點。
RIP技術的原理是利用針對特定RNA結合蛋白的抗體，將細胞內(nèi)的RNA-蛋白質(zhì)復合物沉淀下來。然后，可以通過分離純化，對這些復合物中的RNA進行檢測，如qPCR驗證或測序分析。
表觀遺傳學和RNA生物學領域對不同RNA作用和功能的關注增加。RNA-蛋白質(zhì)相互作用能夠調(diào)控mRNA和非編碼RNA的功能。對RNA潛能的這一新認識帶動了新方法的發(fā)展，使研究人員能夠定位 RNA-蛋白質(zhì)相互作用。
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免疫沉淀技術Co-IP實驗步驟。廣州RIP免疫沉淀磁珠貨期

免疫共沉淀分析（Co-IP）實驗原理與IP十分類似，基本的技術都是采用目標抗原特異性的固相化抗體；但IP的目標是純化單一抗原，而Co-IP旨在分離抗原及與抗原結合的蛋白質(zhì)或配體。

在Co-IP實驗中，已知抗原稱為誘餌蛋白，與之結合的蛋白則稱為靶蛋白。靶蛋白可能是一些復雜的伴侶蛋白、信號分子、結構蛋白、輔助因子等，蛋白間相互作用強度范圍可能介于高度瞬時和十分穩(wěn)定之間。基本的Co-IP實驗方案與IP相同，實際上任何IP系統(tǒng)均可用于Co-IP。但是，還有許多其他因素需要考慮，例如，結合和洗滌條件的優(yōu)化，優(yōu)化時，需要考慮到誘餌蛋白-靶蛋白的相互作用強度以及抗體-誘餌蛋白的親和力。
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世途科生物簡介：

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