CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于生物制藥行業(yè)中的質(zhì)量控制和安全監(jiān)測。其主要用途包括：①生物制品質(zhì)量控制：通過檢測CHO細(xì)胞殘留DNA的存在和數(shù)量，可以評估生物制品的質(zhì)量和純度，確保產(chǎn)品符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和法規(guī)要求。②安全性評估：CHO細(xì)胞殘留DNA可能攜帶病毒、細(xì)菌或其他有害基因，對患者造成潛在風(fēng)險。通過檢測CHO細(xì)胞殘留DNA，可以評估生物制品的安全性，保障患者的用藥安全。③工藝監(jiān)測：CHO細(xì)胞殘留DNA的檢測可以監(jiān)測生產(chǎn)過程中的污染情況，及時采取措施避免CHO細(xì)胞殘留DNA的污染，保證生產(chǎn)過程的可控性和穩(wěn)定性。Vero宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的質(zhì)量控制。泰州正揚(yáng)生物HEK293細(xì)胞殘留D...

南京正揚(yáng)CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測原理：試劑盒利用Taqman熒光探針原理，定量檢測各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成品中殘留的CHO宿主細(xì)胞DNA。PCR反應(yīng)過程中通過熒光標(biāo)記的特異性探針檢測PCR產(chǎn)物量，通過連續(xù)監(jiān)測反應(yīng)體系中熒光數(shù)值的變化，可即時反映特異性擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化。在反應(yīng)過程中所釋放的熒光強(qiáng)度達(dá)到預(yù)設(shè)的閾值時，體系的PCR循環(huán)數(shù)(Ct值)與該體系所含的起始DNA模板量的對數(shù)值呈線性關(guān)系。采用已知濃度的DNA標(biāo)準(zhǔn)品，依據(jù)以上關(guān)系，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線，對特定模板進(jìn)行定量分析，測定供試品中的外源DNA殘留量。檢測快速、特異性強(qiáng)、檢測靈敏度高，蕞低檢測限可以達(dá)到fg級別。CHO宿主細(xì)胞殘...

凍干人用狂犬病疫苗以其在生產(chǎn)工藝、經(jīng)濟(jì)效益和質(zhì)量等方面的綜合優(yōu)勢，占據(jù)了我國的大部分狂犬病疫苗市場。目前，人用狂犬病疫苗的生產(chǎn)需要經(jīng)過Vero細(xì)胞培養(yǎng)、病毒增殖、病毒收獲和濃縮、病毒滅活以及純化等過程。然而，在細(xì)胞培養(yǎng)和病毒增殖的過程中，會產(chǎn)生游離的宿主DNA及與病毒蛋白結(jié)合的宿主DNA。這些殘留DNA會隨疫苗一起被注入到人體內(nèi)，使得人體由于異源物質(zhì)的注入引起不良反應(yīng)。鑒于上述風(fēng)險，國內(nèi)外監(jiān)管部門分別出臺了相應(yīng)的指導(dǎo)原則并提供了宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的方法。哪些公司有CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒？CHO細(xì)胞殘留DNA檢測注意事項南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的Vero宿主細(xì)胞殘留D...

實時熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)在生物制品質(zhì)量控制方面應(yīng)用非常普遍，如宿主細(xì)胞殘留DNA檢測，鼠源、禽源等外源病毒檢測，微生物快檢（支原體、分枝桿菌、細(xì)菌、zhen菌等），復(fù)制型病毒檢測（RCL、RCR、rcAAV等）、質(zhì)?？截悢?shù)檢測及其它工藝雜質(zhì)檢測等。qPCR檢測結(jié)果以擴(kuò)增曲線圖呈現(xiàn)，正常擴(kuò)增曲線為S型，分為基線期、指數(shù)擴(kuò)增期、線性擴(kuò)增期和平臺期；線形光滑、拐點清晰，基線平直或略微下降，無明顯上揚(yáng)。定量檢測實驗中，對標(biāo)曲的要求主要從斜率（與擴(kuò)增效率相關(guān)）和R2兩方面進(jìn)行考察，要求斜率滿足-3.8~-3.1（對應(yīng)擴(kuò)增效率為83.3%~110%），R2滿足高于0.99。CHO宿主細(xì)胞殘留DN...

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測：實時熒光定量PCR法宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的原理和方法：實時熒光定量PCR是基于PCR擴(kuò)增時，在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，產(chǎn)物的增加可以通過熒光信號指示，通過實時監(jiān)控PCR體系中的熒光信號，對樣本中初始模板進(jìn)行定量分析。實時熒光定量PCR可實時檢測產(chǎn)物的生成量，通過加入已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后根據(jù)待測樣品在標(biāo)準(zhǔn)曲線中的位置推算初始模板的濃度，從而達(dá)到檢測宿主細(xì)胞殘留DNA含量的目的。如何高效完成宿主細(xì)胞殘留DNA檢測？廣州HEK293細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒美國藥典（USP）對宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的規(guī)定：美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)發(fā)...

南京正揚(yáng)CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測原理：試劑盒利用Taqman熒光探針原理，定量檢測各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成品中殘留的CHO宿主細(xì)胞DNA。PCR反應(yīng)過程中通過熒光標(biāo)記的特異性探針檢測PCR產(chǎn)物量，通過連續(xù)監(jiān)測反應(yīng)體系中熒光數(shù)值的變化，可即時反映特異性擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化。在反應(yīng)過程中所釋放的熒光強(qiáng)度達(dá)到預(yù)設(shè)的閾值時，體系的PCR循環(huán)數(shù)(Ct值)與該體系所含的起始DNA模板量的對數(shù)值呈線性關(guān)系。采用已知濃度的DNA標(biāo)準(zhǔn)品，依據(jù)以上關(guān)系，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線，對特定模板進(jìn)行定量分析，測定供試品中的外源DNA殘留量。檢測快速、特異性強(qiáng)、檢測靈敏度高，蕞低檢測限可以達(dá)到fg級別。CHO宿主細(xì)胞殘...

南京正揚(yáng)生科科技有限公司自主研發(fā)的CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒的優(yōu)點有哪些？①試劑盒經(jīng)過獨(dú)特的設(shè)計開發(fā)，可以防止PCR產(chǎn)物污染；②產(chǎn)品檢測靈敏度高，定量限可低至1fg/μL；③試劑盒檢測準(zhǔn)確度高，試劑盒配套定量參考品，且定量參考品均溯源至國家標(biāo)準(zhǔn)品，每批試劑質(zhì)檢時均會與國家標(biāo)準(zhǔn)品對標(biāo)，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性；④試劑盒穩(wěn)定性好，PCR檢測試劑盒在常溫儲存一周、反復(fù)凍融10次，產(chǎn)品性能仍滿足要求；南京正揚(yáng)生科科技有限公司自主研發(fā)的CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒的優(yōu)點有哪些？①重復(fù)性好，同一樣品重復(fù)檢測20次，CV＜15%；②提取回收率好，尤其對于低濃度樣品；③操作簡便，無需自行...

宿主細(xì)胞殘留DNA是影響生物制品安全性的關(guān)鍵因素之一，它不僅會降低生物藥的有效性，還可能帶來傳染性或致瘤性等安全問題。因此建立合適的宿主細(xì)胞殘留DNA檢測方法有助于監(jiān)測生產(chǎn)工藝，確保生物制品的安全性和質(zhì)量。各國藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對宿主細(xì)胞殘留DNA的殘留量有著嚴(yán)格的限度控制，因此都相繼出臺了有關(guān)生物制品中宿主細(xì)胞殘留DNA的指南。其中，定量PCR法是中國2019年國家藥典委員會確認(rèn)的外源性DNA殘留測定方法，也是新版USP中推薦生物制品中宿主殘留DNA的檢測標(biāo)準(zhǔn)方法。大腸桿菌宿主細(xì)胞殘留DNA檢測。南京正揚(yáng)生物質(zhì)粒殘留DNA檢測試劑盒 南京正揚(yáng)生科科技有限公司自主研發(fā)的CHO宿主細(xì)胞殘留DNA...

動物源性基質(zhì)材料的脫細(xì)胞過程被認(rèn)為是非常重要的，細(xì)胞殘留DNA定量檢測是評價脫細(xì)胞過程及控制產(chǎn)品質(zhì)量的重要措施之一。據(jù)GB/T16886.1—2022/ISO10993-1:2018《醫(yī)療器械生物學(xué)評價第1部分:風(fēng)險管理過程中的評價與試驗》，醫(yī)療器械必須經(jīng)歷生物相容性的挑戰(zhàn)，其中對于生物學(xué)的風(fēng)險評定要求包含：無細(xì)胞毒性、無致敏性、無遺傳毒性、無致ai性等。南京正揚(yáng)生物科技有限公司已按照ISO9001質(zhì)量體系研發(fā)生產(chǎn)多款滿足法規(guī)需求的細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒，范圍涵蓋宿主細(xì)胞殘留DNA提取試劑盒、宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒、微生物快檢試劑盒，所有產(chǎn)品均已進(jìn)行了多面的性能驗證，質(zhì)量可靠有保證，可...

實時熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)在生物制品質(zhì)量控制方面應(yīng)用非常普遍，如宿主細(xì)胞殘留DNA檢測，鼠源、禽源等外源病毒檢測，微生物快檢（支原體、分枝桿菌、細(xì)菌、zhen菌等），復(fù)制型病毒檢測（RCL、RCR、rcAAV等）、質(zhì)?？截悢?shù)檢測及其它工藝雜質(zhì)檢測等。qPCR檢測結(jié)果以擴(kuò)增曲線圖呈現(xiàn)，正常擴(kuò)增曲線為S型，分為基線期、指數(shù)擴(kuò)增期、線性擴(kuò)增期和平臺期；線形光滑、拐點清晰，基線平直或略微下降，無明顯上揚(yáng)。定量檢測實驗中，對標(biāo)曲的要求主要從斜率（與擴(kuò)增效率相關(guān)）和R2兩方面進(jìn)行考察，要求斜率滿足-3.8~-3.1（對應(yīng)擴(kuò)增效率為83.3%~110%），R2滿足高于0.99。哪些公司的HEK293...

用qPCR法進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測時，出現(xiàn)擴(kuò)增曲線末尾起跳的原因可能是什么？①陰性質(zhì)控或無模板對照曲線末尾出現(xiàn)起跳情況，考慮環(huán)境存在污染所致，建議對實驗環(huán)境做好控制，如使用低吸附帶濾芯qiang頭和低吸附ep管，保證實驗分區(qū)（樣品處理區(qū)、試劑保存及配制區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)）、用DNA清除劑處理環(huán)境等。②待測樣品曲線末尾出現(xiàn)起跳情況，在確保陰性質(zhì)控或無模板對結(jié)果正常的情況下，可以進(jìn)行復(fù)測，復(fù)測結(jié)果一致，則考慮是樣品中待測物濃度較低所致。美國FDA對Ecoli宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的要求。深圳質(zhì)粒殘留DNA檢測方法學(xué)宿主細(xì)胞殘留DNA檢測在動物源性生物材料領(lǐng)域的應(yīng)用及要求：參考YY/T0606.2...

美國藥典（USP）對宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的規(guī)定：美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)發(fā)布的指導(dǎo)原則中指出生物制品宿主細(xì)胞DNA殘余限度不得超過100pg/劑量，對于大劑量的如單克隆抗體的生物制品，根據(jù)其殘余DNA來源及給藥途徑，DNA殘留量可放寬至10ng/劑量?！睹绹幍洹?USP40－NF35)通則＜1130＞收錄了3種外源性DNA殘留量測定的方法，分別為DNA探針雜交法、閾值法和實時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCＲ)法。歐洲藥典（EP）對宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的規(guī)定：歐洲藥品管理局指出需要對連續(xù)傳代哺乳細(xì)胞殘留DNA的去除過程進(jìn)行工藝驗證，旨在確認(rèn)去除殘留DNA的主要步驟，并確保此工藝程序可以將...

各國藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對生物制品中宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的要求：各國藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對生物制品中宿主細(xì)胞殘留DNA的態(tài)度謹(jǐn)慎且明確，要求各制藥企業(yè)建立詳細(xì)可行、靈敏度高的檢測方法，用于驗證藥品的純化過程可以去除殘留DNA，并對終產(chǎn)品的產(chǎn)品放行嚴(yán)格把關(guān)，避免攜帶外源DNA的藥品流入市場。與此同時，殘留DNA的檢測方法也在不斷升級和改進(jìn)，研究者們旨在能夠更精確更快速地檢測含量較低的宿主DNA。我國對宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的規(guī)定：鑒于外源性DNA對機(jī)體的潛在危害，自19世紀(jì)末，我國藥品相關(guān)機(jī)構(gòu)，如衛(wèi)生部、國家藥品監(jiān)督管理局等頒布的一系列文件中都對殘余細(xì)胞DNA有明確的規(guī)定?！度擞弥亟MDNA制品質(zhì)量控制...

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測過程中，qPCR反應(yīng)體系配制環(huán)節(jié)有哪些注意事項？①qPCR的整個操作要低溫環(huán)境進(jìn)行，防止模板的降解，試劑避免反復(fù)凍融。②配制反應(yīng)體系前試劑要充分混勻，除了模板外的反應(yīng)體系要統(tǒng)一配制，然后再分配至qPCR管中，配制的時候考慮到操作或耗材帶來的損耗需要多配若干個反應(yīng)所需體系。③添加模板的時候注意qiang頭要排盡，不求快，平行加樣。加樣后要進(jìn)行離心，將液體集中在管底，離心后注意觀察反應(yīng)體系液面是否平整，氣泡是否排盡。④每個樣品建議做3個復(fù)孔，每次除了樣品以外還要加陽性對照和陰性對照。生物制品中宿主細(xì)胞殘留DNA檢測概述。寧波正揚(yáng)生物CHO細(xì)胞殘留DNA檢測廠家用qPCR法進(jìn)行...

用qPCR法進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測時，出現(xiàn)擴(kuò)增效率超出標(biāo)準(zhǔn)要求（低于83.3%或高于110%）的原因有哪些？①設(shè)計的引物探針不適用：重新分析靶標(biāo)序列進(jìn)行設(shè)計。②標(biāo)曲濃度設(shè)定太高，超出標(biāo)曲線性范圍：對范圍進(jìn)行驗證，選取合適標(biāo)曲范圍。③人員操作問題，如稀釋錯誤、制備過程震蕩時間過長等：人員上崗前應(yīng)接受多面培訓(xùn)并做到熟練操作，考核合格后方可上崗。④移液器未校準(zhǔn)或品質(zhì)問題導(dǎo)致量取不準(zhǔn)：定期對移液器進(jìn)行校準(zhǔn)并選擇好品質(zhì)移液器。CFDA對宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的要求。HEK293T細(xì)胞殘留DNA檢測注意事項用qPCR法進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測時，出現(xiàn)擴(kuò)增曲線異常的可能原因是什么？①軟件參數(shù)設(shè)置不當(dāng)可...

CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于生物制藥行業(yè)中的質(zhì)量控制和安全監(jiān)測。其主要用途包括：①生物制品質(zhì)量控制：通過檢測CHO細(xì)胞殘留DNA的存在和數(shù)量，可以評估生物制品的質(zhì)量和純度，確保產(chǎn)品符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和法規(guī)要求。②安全性評估：CHO細(xì)胞殘留DNA可能攜帶病毒、細(xì)菌或其他有害基因，對患者造成潛在風(fēng)險。通過檢測CHO細(xì)胞殘留DNA，可以評估生物制品的安全性，保障患者的用藥安全。③工藝監(jiān)測：CHO細(xì)胞殘留DNA的檢測可以監(jiān)測生產(chǎn)過程中的污染情況，及時采取措施避免CHO細(xì)胞殘留DNA的污染，保證生產(chǎn)過程的可控性和穩(wěn)定性。宿主細(xì)胞殘留DNA檢測有哪些必要性？寧波正揚(yáng)生物CHO細(xì)胞殘留DNA檢測試劑...

美國藥典（USP）對宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的規(guī)定：美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)發(fā)布的指導(dǎo)原則中指出生物制品宿主細(xì)胞DNA殘余限度不得超過100pg/劑量，對于大劑量的如單克隆抗體的生物制品，根據(jù)其殘余DNA來源及給藥途徑，DNA殘留量可放寬至10ng/劑量?！睹绹幍洹?USP40－NF35)通則＜1130＞收錄了3種外源性DNA殘留量測定的方法，分別為DNA探針雜交法、閾值法和實時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCＲ)法。歐洲藥典（EP）對宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的規(guī)定：歐洲藥品管理局指出需要對連續(xù)傳代哺乳細(xì)胞殘留DNA的去除過程進(jìn)行工藝驗證，旨在確認(rèn)去除殘留DNA的主要步驟，并確保此工藝程序可以將...

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測：《美國藥典》和《歐洲藥典》將高靈敏度、高特異性的qPCR法和非序列特異性的DNA結(jié)合蛋白法作為宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的推薦方法；《中國藥典》則收錄了特異性高的定量熒光探針qPCR法和半定量的DNA探針雜交法以及非序列特異性的熒光染色法。然而，熒光染色法/免疫閾值法這兩種非序列特異性檢測結(jié)果不能區(qū)分究竟是生產(chǎn)過程污染、檢測造成的假陽性污染還是工藝缺陷引起的DNA殘余，難以避免檢測值虛假偏高的情況，存在檢測局限性。宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒的價格。合肥殘留DNA檢測操作流程 實時熒光定量PCR法宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的原理和方法：實時熒光定量PCR是基于PCR擴(kuò)增時，在...

宿主細(xì)胞殘留DNA是影響生物制品安全性的關(guān)鍵因素之一，它不僅會降低生物藥的有效性，還可能帶來傳染性或致瘤性等安全問題。因此建立合適的宿主細(xì)胞殘留DNA檢測方法有助于監(jiān)測生產(chǎn)工藝，確保生物制品的安全性和質(zhì)量。各國藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對宿主細(xì)胞殘留DNA的殘留量有著嚴(yán)格的限度控制，因此都相繼出臺了有關(guān)生物制品中宿主細(xì)胞殘留DNA的指南。其中，定量PCR法是中國2019年國家藥典委員會確認(rèn)的外源性DNA殘留測定方法，也是新版USP中推薦生物制品中宿主殘留DNA的檢測標(biāo)準(zhǔn)方法。Ecoli宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒。泰州正揚(yáng)生物E.coli殘留DNA檢測特點《中國藥典》2020版已收載三種方法用于外源性宿...

各國藥典對于宿主細(xì)胞殘留DNA檢測方法的推薦：理想的定量檢測方法其靈敏度應(yīng)能檢測到約10pg/劑量的殘留DNA。雜交法、基于DNA結(jié)合蛋白的免疫色譜法（閾值法）和定量PCR方法因靈敏度均可達(dá)到檢測要求，都屬于經(jīng)典方法。①《美國藥典》將高靈敏度、高特異性的qPCR法和非序列特異性的DNA結(jié)合蛋白法作為殘留DNA檢測的推薦方法；③《歐洲藥典》將高靈敏度、高特異性的qPCR法和非序列特異性的DNA結(jié)合蛋白法作為殘留DNA檢測的推薦方法；②《中國藥典》則收錄了特異性高的定量PCR法和半定量的DNA探針雜交法以及非序列特異性的熒光染色法。哪些公司有CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒？鄭州E.coli殘留...

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測與重組人源化膠原蛋白行業(yè)：①外源性DNA：作為醫(yī)療器械使用的原材料,宜根據(jù)預(yù)期臨床用途(作為植入物體內(nèi)使用,還是作為敷料等體表、黏膜使用)、使用量等,確定外源性DNA殘留量限值。如含重組人源化膠原蛋白的產(chǎn)品預(yù)期為體內(nèi)植人劑,推薦參考生物制品外源性DNA殘留限量要求,結(jié)合殘留DNA宿主類型及其風(fēng)險程度設(shè)定每人每次最大使用量限值。②宿主細(xì)胞蛋白殘留：E.coli、酵母、CHO蛋白質(zhì)殘留應(yīng)≤0.05%(體內(nèi)植人),或≤0.1%(外用)。③殘余抗生su含量：應(yīng)≤50ng/mg。④微生物限度：如以非無菌的方式提供,每1g.每1mL或每10cm2需氧菌總數(shù)應(yīng)≤102CFU,霉菌和酵母...

為什么要做宿主細(xì)胞殘留DNA檢測？近年來熱度驟增的生物制品藥物對諸多疾病療效斐然，在藥品市場中所占比重也是節(jié)節(jié)攀升。于是生物制品與之俱來的生物安全性問題被漸漸提上日程，其中宿主細(xì)胞殘留DNA由于可能會傳遞仲瘤或病毒相關(guān)基因，存在潛在的危險性，各國藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對其殘留量有著嚴(yán)格的限度控制。同時，各國藥典也陸續(xù)提供數(shù)種關(guān)于宿主細(xì)胞殘留DNA檢測經(jīng)典的方法，目前以實時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)方法為優(yōu)，因其專一性強(qiáng)、靈敏度高、快速且可實現(xiàn)高通量。宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的重要性：眾所周知，通過細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品時，需要在下游工藝中去除所有的源于宿主細(xì)胞殘留的雜質(zhì)，如胞質(zhì)蛋白、基因及潛在...

為什么要做宿主細(xì)胞殘留DNA檢測？近年來熱度驟增的生物制品藥物對諸多疾病療效斐然，在藥品市場中所占比重也是節(jié)節(jié)攀升。于是生物制品與之俱來的生物安全性問題被漸漸提上日程，其中宿主細(xì)胞殘留DNA由于可能會傳遞仲瘤或病毒相關(guān)基因，存在潛在的危險性，各國藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對其殘留量有著嚴(yán)格的限度控制。同時，各國藥典也陸續(xù)提供數(shù)種關(guān)于宿主細(xì)胞殘留DNA檢測經(jīng)典的方法，目前以實時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)方法為優(yōu)，因其專一性強(qiáng)、靈敏度高、快速且可實現(xiàn)高通量。宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的重要性：眾所周知，通過細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品時，需要在下游工藝中去除所有的源于宿主細(xì)胞殘留的雜質(zhì)，如胞質(zhì)蛋白、基因及潛在...

宿主細(xì)胞殘留DNA是指可能出現(xiàn)于生物制品中由宿主組織細(xì)胞產(chǎn)生的DNA片段或更長分子。目前，生物制品常用宿主包括：哺乳動物細(xì)胞系中的幼倉鼠腎細(xì)胞系、中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO)、非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero)、小鼠骨髓瘤NS0細(xì)胞系、人胚腎細(xì)胞系(HEK-293)、酵母菌和大腸桿菌等。重組蛋白藥、抗體藥、疫苗等生物制品由連續(xù)傳代的微生物或動物細(xì)胞生產(chǎn)，雖然經(jīng)過復(fù)雜的純化工藝，但產(chǎn)品中仍可能有宿主細(xì)胞殘留DNA。殘留的宿主細(xì)胞DNA一般有相同的基本結(jié)構(gòu)單位，但存在的長度和形式各異，它們均可導(dǎo)致傳染性、致ai性、免疫原性和突變性等風(fēng)險；鑒于上述風(fēng)險，國內(nèi)外監(jiān)管部門分別出臺了相應(yīng)的指導(dǎo)原則并提供了宿主細(xì)胞殘...

南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的Vero宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒利用Taqman熒光探針原理，定量檢測各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成品中殘留的Vero宿主細(xì)胞DNA，產(chǎn)品具備檢測快速、操作簡單、特異性強(qiáng)、檢測靈敏度高、穩(wěn)定性好、能防止PCR產(chǎn)物污染等特點。蕞低檢測限可以達(dá)到fg級別。試劑盒配套有VeroDNA定量參考品，已溯源至國家標(biāo)準(zhǔn)品。產(chǎn)品檢測方法可溯源至中國藥典方法，通則〈3407〉。 宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的目的：①確認(rèn)純化工藝合理，能有效去除宿主DNA殘余。②確認(rèn)產(chǎn)品中雜質(zhì)含量符合標(biāo)準(zhǔn)要求。非特異性的DNA檢測結(jié)果不能區(qū)分究竟是生產(chǎn)中污染、檢測污染、或是工...

各國藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對生物制品中宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的要求：各國藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對生物制品中宿主細(xì)胞殘留DNA的態(tài)度謹(jǐn)慎且明確，要求各制藥企業(yè)建立詳細(xì)可行、靈敏度高的檢測方法，用于驗證藥品的純化過程可以去除殘留DNA，并對終產(chǎn)品的產(chǎn)品放行嚴(yán)格把關(guān)，避免攜帶外源DNA的藥品流入市場。與此同時，殘留DNA的檢測方法也在不斷升級和改進(jìn)，研究者們旨在能夠更精確更快速地檢測含量較低的宿主DNA。我國對宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的規(guī)定：鑒于外源性DNA對機(jī)體的潛在危害，自19世紀(jì)末，我國藥品相關(guān)機(jī)構(gòu)，如衛(wèi)生部、國家藥品監(jiān)督管理局等頒布的一系列文件中都對殘余細(xì)胞DNA有明確的規(guī)定?！度擞弥亟MDNA制品質(zhì)量控制...

實時熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)在生物制品質(zhì)量控制方面應(yīng)用非常普遍，如宿主細(xì)胞殘留DNA檢測，鼠源、禽源等外源病毒檢測，微生物快檢（支原體、分枝桿菌、細(xì)菌、zhen菌等），復(fù)制型病毒檢測（RCL、RCR、rcAAV等）、質(zhì)?？截悢?shù)檢測及其它工藝雜質(zhì)檢測等。qPCR檢測結(jié)果以擴(kuò)增曲線圖呈現(xiàn)，正常擴(kuò)增曲線為S型，分為基線期、指數(shù)擴(kuò)增期、線性擴(kuò)增期和平臺期；線形光滑、拐點清晰，基線平直或略微下降，無明顯上揚(yáng)。定量檢測實驗中，對標(biāo)曲的要求主要從斜率（與擴(kuò)增效率相關(guān)）和R2兩方面進(jìn)行考察，要求斜率滿足-3.8~-3.1（對應(yīng)擴(kuò)增效率為83.3%~110%），R2滿足高于0.99。美國FDA對宿主細(xì)胞殘...

用qPCR法進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測時，出現(xiàn)擴(kuò)增效率超出標(biāo)準(zhǔn)要求（低于83.3%或高于110%）的原因有哪些？①設(shè)計的引物探針不適用：重新分析靶標(biāo)序列進(jìn)行設(shè)計。②標(biāo)曲濃度設(shè)定太高，超出標(biāo)曲線性范圍：對范圍進(jìn)行驗證，選取合適標(biāo)曲范圍。③人員操作問題，如稀釋錯誤、制備過程震蕩時間過長等：人員上崗前應(yīng)接受培訓(xùn)并做到熟練操作，考核合格后方可上崗。④移液器未校準(zhǔn)或品質(zhì)問題導(dǎo)致量取不準(zhǔn)：定期對移液器進(jìn)行校準(zhǔn)并選擇好品質(zhì)移液器。 用qPCR法進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測時，出現(xiàn)擴(kuò)增曲線異常的可能原因是什么？①軟件參數(shù)設(shè)置不當(dāng)可能引起標(biāo)曲參數(shù)或檢測結(jié)果異常。如擴(kuò)增曲線信號蕞早出現(xiàn)在14個循環(huán)左右，基...

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的方法介紹：①熒光探針qPCR法：可進(jìn)行定量分析，被USP/EP/ChP收錄，檢出限可低至1pg/Sample，蕞小檢測片段可至50bp，該檢測方法具備靈敏度高、特異性高、通量高的特點，但是成本相對其他方法略高。②熒光染色法：該方法可進(jìn)行定量分析，被USP/ChP收錄，樣品殘留量需達(dá)到50pg/Sample才能被檢測，蕞小檢測片段為100bp，該檢測方法缺乏序列特異性，但是成本較低。宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的方法介紹：①免疫閾值法：該方法可進(jìn)行定量分析，被USP/EP收錄，檢出限低至3pg/Sample，蕞小檢測片段為100bp，該檢測方法是對非特異性序列進(jìn)行免疫檢測，很可...

實時熒光定量PCR法宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的原理和方法：實時熒光定量PCR是基于PCR擴(kuò)增時，在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，產(chǎn)物的增加可以通過熒光信號指示，通過實時監(jiān)控PCR體系中的熒光信號，對樣本中初始模板進(jìn)行定量分析。實時熒光定量PCR可實時檢測產(chǎn)物的生成量，通過加入已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后根據(jù)待測樣品在標(biāo)準(zhǔn)曲線中的位置推算初始模板的濃度，從而達(dá)到檢測宿主細(xì)胞殘留DNA含量的目的。 為什么要做宿主細(xì)胞殘留DNA檢測?眾所周知，大部分生物制劑是不經(jīng)過胃腸道直接進(jìn)入體內(nèi)，所以除了生物活性外，相關(guān)部門對藥品中雜質(zhì)的含量要求非常嚴(yán)格。其中，宿主細(xì)胞殘留DNA因...