胎牛血清：胎牛血清初次解凍后，應(yīng)按單次習(xí)慣用量分裝，分裝后的血清仍-20°C凍存。若置于4°C的血清，應(yīng)在一周內(nèi)用完。為保證細(xì)胞培養(yǎng)的較佳效果，血清和培養(yǎng)基的配置，應(yīng)遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配”原則。配好的培養(yǎng)液，應(yīng)于一周內(nèi)用完。血清避免反復(fù)凍融，避免在4°C或更高溫度儲(chǔ)...

用于體外細(xì)胞培養(yǎng)的胎牛血清及其制備方法：包括以下步驟：采集懷孕母牛的胎牛血液獲得血漿，具體步驟如下：采用含有體積含量4-6%葡萄糖的注射液、含有質(zhì)量含量0.2-0.6%檸檬酸鈉的水溶液進(jìn)行混合，將上述兩者混合后的混合液A置入取血容器內(nèi)充分滋潤容器內(nèi)壁；將胎牛血...

胎牛血清：胎牛血清初次解凍后，應(yīng)按單次習(xí)慣用量分裝，分裝后的血清仍-20°C凍存。若置于4°C的血清，應(yīng)在一周內(nèi)用完。為保證細(xì)胞培養(yǎng)的較佳效果，血清和培養(yǎng)基的配置，應(yīng)遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配”原則。配好的培養(yǎng)液，應(yīng)于一周內(nèi)用完。血清避免反復(fù)凍融，避免在4°C或更高溫度儲(chǔ)...

胎牛血清有必要做熱滅活嗎?實(shí)驗(yàn)證明，經(jīng)過正確處理的熱滅活胎牛血清，對(duì)于大多數(shù)的細(xì)胞而言都是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對(duì)細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或完全沒有任何作用，甚至可能因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，從而造成細(xì)胞生長速率的降低。經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成...

如果胎牛血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，應(yīng)該如何去除？胎牛血清中的沉淀物出現(xiàn)有很多種原因，但較普遍的原因是由于胎牛血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白在胎牛血清解凍后，也會(huì)存在于胎牛血清中，這也是造成沉淀物的主要原因之一。但少量絮狀沉淀物，并不影響胎牛血清本...

選購胎牛血清：為了保證胎牛血清產(chǎn)品的均一性和穩(wěn)定性，胎牛血清生產(chǎn)需遵循相關(guān)規(guī)定進(jìn)行操作。一般來說，胎牛血清制備需經(jīng)過以下幾個(gè)步驟：采集，離心，分離，無菌過濾，用來制作血清的牛血，是通過采集多頭牛的血液混合而成的，因此，想要在同一批次得到大批量品質(zhì)穩(wěn)定的血清，獲...

如何挑選好的胎牛血清：好的胎牛血清是實(shí)驗(yàn)的成功的前提是所有實(shí)驗(yàn)人做細(xì)胞培養(yǎng)的共識(shí)，如何挑選好的胎牛血清，可以從以下幾個(gè)方面著手。1.外觀，好的血清應(yīng)是透明清亮，土黃色或棕黃色，無沉淀或極少沉淀，比較粘稠。如發(fā)現(xiàn)血清渾濁，不透明，含許多沉淀物，說明血清污染或血清...

膜片鉗實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)，記錄和分析數(shù)據(jù)準(zhǔn)備工作就緒后即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，數(shù)據(jù)記錄和分析。對(duì)電極持續(xù)施加一個(gè)1mV、10～50ms的階躍脈沖刺激，電極入水后電阻約4～6MΩ，此時(shí)在計(jì)算機(jī)屏幕顯示框中可看到測試脈沖產(chǎn)生的電流波形。開始時(shí)增益不宜設(shè)得太高，一般可在1～5mV/...

活性炭處理胎牛血清的應(yīng)用：活性炭處理胎牛血清主要用于受體研究和雌Hormone相關(guān)的細(xì)胞研究實(shí)驗(yàn)。同時(shí)活性炭處理胎牛血清極大的降低了多種Hormone和生長因子，減少了影響細(xì)胞生化分析的干擾因子。性炭處理胎牛血清減少了血清中的類固醇類化合物，3x100nm無菌...

如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?未拆封的血清，一般情況下應(yīng)存放于-10℃至-20℃，在產(chǎn)品規(guī)定的效期內(nèi)均可使用，若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至合適大小的無菌離心管內(nèi)，再放回冷凍。將血清從冷凍冰箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使...

如何區(qū)別真假胎牛血清：免疫球蛋白，國產(chǎn)血清的只是定性檢測，結(jié)果也很不準(zhǔn)確，進(jìn)口胎牛血清大多定量檢測。免疫球蛋白的數(shù)值能完全體現(xiàn)出時(shí)的牛齡情況，國產(chǎn)血清，基本都是新生牛的，血清中容易產(chǎn)生IgM，IgG的含量也偏高，進(jìn)口胎牛血清，不含IgM，IgG的含量也較低。其...

胎牛血清的生產(chǎn)工藝：胎牛血清適合脈沖示蹤實(shí)驗(yàn)（同位素標(biāo)記研究細(xì)胞代謝）適合轉(zhuǎn)染CHO后的篩選，避免外源小分子對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生干擾。透析胎牛血清是在胎牛血清的基礎(chǔ)上進(jìn)行加工的。胎牛血清在無菌條件下要經(jīng)過0.1微米膜三重過濾，要進(jìn)行一系列的檢測，包括理化性質(zhì)檢查（如滲透...

膜片鉗系統(tǒng)有如下應(yīng)用局限性(1)光能應(yīng)用于懸浮細(xì)胞的紀(jì)錄，因此大部分的紀(jì)錄對(duì)象為化細(xì)胞，而對(duì)于需要貼壁生長的大多數(shù)正常細(xì)胞，現(xiàn)有的自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)就無法紀(jì)錄；(2)在紀(jì)錄對(duì)象上，目前的膜片鉗系統(tǒng)只能紀(jì)錄胞膜形狀平整飽滿的細(xì)胞，大部分是工具細(xì)胞如化細(xì)胞，此類細(xì)胞有...

選購FBS應(yīng)考慮哪些標(biāo)準(zhǔn)？產(chǎn)品檢測，每款FBS在生產(chǎn)上市之前，必須經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)控檢測。質(zhì)控環(huán)節(jié)必不可少，以確保上市的血清符合規(guī)定合乎規(guī)格，而血清產(chǎn)品分析證書（COA）就是FBS質(zhì)控的重要體現(xiàn)。在COA中，常規(guī)的檢測指標(biāo)包括內(nèi)的毒性、總蛋白、細(xì)菌、病毒等，另外總...

冷凍電子顯微技術(shù)主要包括單顆粒冷凍電鏡技術(shù)和冷凍電子斷層掃描技術(shù)。單顆粒冷凍電鏡技術(shù)首先捕獲大量隨機(jī)分布的同一種生物樣品的二維圖像，然后通過圖像處理算法解析其三維結(jié)構(gòu)。近年來，隨著冷凍電鏡設(shè)備和計(jì)算機(jī)軟硬件的快速發(fā)展，特別是隨著直接電子探測器在冷凍電鏡中的應(yīng)用...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)準(zhǔn)備：PCR引物設(shè)計(jì)，PCR反應(yīng)中有兩條引物，即5′端引物和3′引物。設(shè)計(jì)引物時(shí)以一條DNA單鏈為基準(zhǔn)（常以信息鏈為基準(zhǔn)），5′端引物與位于待擴(kuò)增片段5′端上的一小段DNA序列相同；3′端引物與位于待擴(kuò)增片段3′端的一小段DNA序列互補(bǔ)。引物設(shè)計(jì)...

Real-time PCR鏈反應(yīng)的常見問題分析與解決方法：反應(yīng)緩沖液未完全融化或未充分混勻。確保反應(yīng)緩沖液融化完全并徹底混勻。引物特異性差。利用BLAST檢查引物特異性或重新設(shè)計(jì)引物。引物量過多。減少反應(yīng)體系中引物的用量。模板量過多。質(zhì)粒DNA的用量應(yīng)

胎牛血清：胎牛血清是由胎牛血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、無機(jī)物等，其組成成份大部分已知，但還有一部分尚不清楚，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長或抑制生長活性是達(dá)到生理平衡的。其中不含細(xì)胞、纖維蛋白和凝血因...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)生物學(xué)研究的歷史中占據(jù)了重要的地位。以此為基礎(chǔ)發(fā)展出包括Real-time PCR在內(nèi)的多項(xiàng)應(yīng)用技術(shù)。自誕生后Real-time PCR技術(shù)持續(xù)發(fā)展，從簡單的增擴(kuò)到整個(gè)PCR過程，Real-time PCR表現(xiàn)出比PCR更敏感、更明確的定量分析特...

胎牛血清有必要做熱滅活嗎?實(shí)驗(yàn)證明，經(jīng)過正確處理的熱滅活胎牛血清，對(duì)于大多數(shù)的細(xì)胞而言都是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對(duì)細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或完全沒有任何作用，甚至可能因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，從而造成細(xì)胞生長速率的降低。經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成...

Real-time PCR-傳統(tǒng)定量PCR：1）內(nèi)參照法：在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí)，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電...

Real-time PCR鏈?zhǔn)椒磻?yīng)：每次循環(huán)都得加入新的DNA聚合酶，不但操作煩瑣，而且價(jià)格昂貴，制約了PCR技術(shù)的應(yīng)用和發(fā)展。耐熱DNA聚合酶-Taq酶的發(fā)現(xiàn)對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技...

挑選胎牛血清：Antibiotic含量，Antibiotic的使用情況，也需考慮在內(nèi)。國內(nèi)外的血清，都不對(duì)Antibiotic進(jìn)行測試（無四環(huán)素胎牛血清之外）。但相較于國內(nèi)Antibiotic的濫用，在其他國家，Antibiotic使用大多較為嚴(yán)格，用量有限，...

Real-time PCR相對(duì)定量中的標(biāo)準(zhǔn)曲線法如何進(jìn)行：主要是相對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)品的制作，一般有三種方法：1、比較復(fù)雜的方法：質(zhì)粒，采用Biotnt提供內(nèi)參基因的特異性Real-time PCRmRNA引物，對(duì)目的基因進(jìn)行Real-time PCR實(shí)驗(yàn)，得到PCR...

Real-time PCR實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)-防止RNA酶污染的措施：1.所有的玻璃器皿均應(yīng)在使用前于180℃的高溫下干烤6hr或更長時(shí)間。2.塑料器皿可用0.1%DEPC水浸泡或用氯仿沖洗（注意：有機(jī)玻璃器具因可被氯仿腐蝕，故不能使用）。3.有機(jī)玻璃的電泳槽等，可...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種用于放大擴(kuò)增特定的DN段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的很大特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加。因此，無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸，還是幾十年前兇殺案中兇手所遺留的毛發(fā)、皮膚或血液，只要能分離出一...

聚合酶鏈反應(yīng)同時(shí)擴(kuò)增單個(gè)精子中幾個(gè)基因座的能力增強(qiáng)了極大地增強(qiáng)了通過研究減數(shù)分裂后染色體交叉來進(jìn)行基因定位的傳統(tǒng)任務(wù)。通過分析數(shù)千個(gè)單個(gè)精子，已經(jīng)直接觀察到非常緊密基因座之間罕見的交叉事件。類似地，可以分析異常的缺失、插入、易位或倒位，所有這些都無需等待(或支...

Real-time PCR原理：所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。DNA結(jié)合染料法，應(yīng)用一種帶有熒光的、非特異的DNA結(jié)合染料檢測PCR過程中積累的...

Real-time PCR式反應(yīng)準(zhǔn)備：10×擴(kuò)增緩沖液、4種dNTP混合物（終濃度）、引物（終濃度）、模板DNA、TaqDNA聚合酶、Mg2+（終濃度）、補(bǔ)加雙蒸水等。其中dNTP、引物、模板DNA、TaqDNA聚合酶以及Mg2+的加量（或濃度）可根據(jù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整...

Real-time PCR：使用Real-time PCR進(jìn)行基因檢測,被普遍應(yīng)用于病毒和病原菌檢測、轉(zhuǎn)基因食品檢測、遺傳病基因檢測等領(lǐng)域。一般首先需要利用專業(yè)使用的試劑盒從待檢樣品中提取其核酸（DNAorRNA），并經(jīng)過精制等復(fù)雜的操作（通常稱為前處理操作）...