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在一切由細(xì)胞身份開始說起一文中,小E已經(jīng)為大家羅列出目前已經(jīng)確定被Hela細(xì)胞污染的細(xì)胞系名稱。做細(xì)胞實驗的伙伴們可以翻閱一下,以防自己的細(xì)胞也在其中!還不僅只如此,這些常見的細(xì)胞系除了發(fā)現(xiàn)種屬內(nèi)的交叉污染/錯誤鑒定,還有部分細(xì)胞系被發(fā)現(xiàn)連種屬都被錯誤鑒定了!被鑒定的278株細(xì)胞系中,有20株(20/278=7.2%)細(xì)胞系PCR擴(kuò)增失敗,證明其并非人源細(xì)胞。作者繼續(xù)追蹤實驗,通過種屬鑒定來確認(rèn)其真實來源,結(jié)果其中2株細(xì)胞系被證實分別來源于大鼠。翼和資質(zhì):上海市遺傳學(xué)會理事單位、國際細(xì)胞系認(rèn)證委員會成員。小鼠鑒定ATCC
什么是細(xì)胞系鑒定?所謂細(xì)胞系鑒定即通過STR(短串聯(lián)重復(fù))圖譜所建立細(xì)胞系的遺傳特征。一株細(xì)胞系的遺傳特征確立后,細(xì)胞系可以通過定期的檢測,以防止出現(xiàn)細(xì)胞系被誤認(rèn)或交叉污染的情況。為什么要進(jìn)行細(xì)胞系鑒定?由于細(xì)胞系發(fā)生交叉污染或身份誤認(rèn),將導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)的無效或數(shù)據(jù)誤導(dǎo)。NIH已發(fā)出公告,討論細(xì)胞系鑒定的必要性與重要性,并且越來越多的的期刊要求文章發(fā)表前、需提供細(xì)胞鑒定數(shù)據(jù)。細(xì)胞系用錯的概率有多大?據(jù)ATCC估計,1977年錯誤使用細(xì)胞的概率是16%,1999年是18%。根據(jù)我們的經(jīng)驗,國內(nèi)細(xì)胞系用錯的概率不低于20%。即如果一個研究所有二十個課題組,按概率估計,有4個課題組用的細(xì)胞是錯的。蘇州小鼠STR鑒定本文購自ATCC等機(jī)構(gòu)的細(xì)胞(如SW480,HCT116, FET細(xì)胞系等),均全部由上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司鑒定。
STR基因位點(diǎn)由長度為3~7個堿基對的短串連重復(fù)序列組成,這些重復(fù)序列普遍存在于人類基因組中,可作為高度多態(tài)性標(biāo)記,被稱為細(xì)胞的DNA指紋,其可通過PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))來檢測。STR基因座位上的等位基因可通過擴(kuò)增區(qū)域內(nèi)重復(fù)序列的拷貝數(shù)的不同來區(qū)分,在毛細(xì)管電泳分離之后可通過熒光檢測來識別。隨后通過一定的計算方法,即可根據(jù)所得的STR分型結(jié)果與專業(yè)的細(xì)胞STR數(shù)據(jù)庫比對從而推算出樣品所屬的細(xì)胞系或可能的交叉污染的細(xì)胞系名稱。
值得注意的是,當(dāng)發(fā)生兩個或以上細(xì)胞混合的時候,檢測結(jié)果看起來非常像細(xì)胞系的“遺傳不穩(wěn)定”——當(dāng)一個細(xì)胞系存在亞群時,尤其是一些*細(xì)胞系,由于遺傳不穩(wěn)定的存在,在一些位點(diǎn)的STR特性會不同。因此經(jīng)驗豐富的分子**是非常重要的,他能夠幫助分析復(fù)雜的電泳圖譜(STR峰圖),從而判斷是否由于發(fā)生細(xì)胞系交叉污染而導(dǎo)致多等位基因情況。上海翼和應(yīng)用生物,作為老牌的遺傳技術(shù)服務(wù)公司,十年以上基因分型經(jīng)驗,可以幫你解決你的疑惑。本文所使用的Hela細(xì)胞,由上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司鑒定。
短串聯(lián)重復(fù)序列(short tandem repeat,STR),又稱為微衛(wèi)星標(biāo)記(microsalite)。它普遍并均勻地存在于真核生物基因組中,一般由一個長2~6bp的中心序列經(jīng)多次串聯(lián)重復(fù)排列而成,重復(fù)次數(shù)大多在10~60次之間。個體間中心序列的重復(fù)次數(shù)呈高度變異性,構(gòu)成了STR的遺傳多態(tài)性。由于其序列簡短,通過PCR很容易從基因組DNA中特異性地擴(kuò)增出來,極大簡化了微衛(wèi)星多態(tài)性分析的操作。研究者只需在目標(biāo)基因座設(shè)計一對或多對引物,通過PCR反應(yīng)從模板DNA中將該基因擴(kuò)增出來,然后使用測序儀進(jìn)行電泳分離分析即可。它具有分布普遍,易于檢測,信息量大,有高度多態(tài)性并遵循孟德爾共顯性遺傳等優(yōu)點(diǎn),被認(rèn)為是繼限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)之后的第二代遺傳標(biāo)記,已普遍應(yīng)用于遺傳圖譜繪制、基因定位、法醫(yī)鑒定、遺傳病診斷等諸多領(lǐng)域。討論細(xì)胞系鑒定的必要性與重要性,并且越來越多的的期刊要求文章發(fā)表前、需提供細(xì)胞鑒定數(shù)據(jù)。天津鑒定數(shù)據(jù)庫比對
如何進(jìn)行細(xì)胞系鑒定?小鼠鑒定ATCC
STR是以中心序列 (core repeat units) 首尾相連多次重復(fù)形成。每個STR的中心序列結(jié)構(gòu)相同,長度為2-6bp,但其重復(fù)單位數(shù)目和重復(fù)區(qū)域的長度不同,因此STR在不同種族、不同人群之間的分布具有差異性,構(gòu)成了STR遺傳多態(tài)性。不同個體之間在一個同源STR位點(diǎn)的重復(fù)次數(shù)也不同,因而同指紋識別一樣,STR位點(diǎn)分析也可對個體進(jìn)行身份識別。通過識別個體基因組在特定位點(diǎn)的特定序列重復(fù),即可創(chuàng)建其基因檔案?;诖耍琒TR分析法已經(jīng)成為一種重要的鑒定分析方法,應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)、親子鑒定及細(xì)胞鑒定等領(lǐng)域。小鼠鑒定ATCC
上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司總部位于龍騰路1015弄中星創(chuàng)意園2號502,是一家第三方檢測服務(wù);生物專業(yè)領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)服務(wù);健康衰老評估;大健康檢測;遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù);生物醫(yī)藥行業(yè)質(zhì)控檢測技術(shù)技術(shù)服務(wù);小鼠遺傳品系鑒定;轉(zhuǎn)基因小鼠基因型鑒定;細(xì)胞點(diǎn)突變檢測;細(xì)胞端粒長度和端粒酶活性檢測。的公司。翼和生物擁有一支經(jīng)驗豐富、技術(shù)創(chuàng)新的專業(yè)研發(fā)團(tuán)隊,以高度的專注和執(zhí)著為客戶提供細(xì)胞組織小鼠質(zhì)控,大健康檢測,生物技術(shù)服務(wù)。翼和生物致力于把技術(shù)上的創(chuàng)新展現(xiàn)成對用戶產(chǎn)品上的貼心,為用戶帶來良好體驗。翼和生物始終關(guān)注醫(yī)藥健康市場,以敏銳的市場洞察力,實現(xiàn)與客戶的成長共贏。