病毒宏基因組學(xué)的研究過程包括以下幾個步驟:樣品的處理、病毒宏基因組學(xué)文庫構(gòu)建和數(shù)據(jù)分析與處理。樣品的制備較關(guān)鍵的是樣品的處理、遺傳物質(zhì)的分離和富集。樣品的制備關(guān)鍵應(yīng)做到提取能夠表示該環(huán)境的高純度樣本,并除去非病毒核酸細(xì)胞和遺傳物質(zhì)的干擾。富集微生物及去除非目的性的細(xì)胞和遺傳物質(zhì)是分離高質(zhì)量的遺傳物質(zhì)的前提,提取高純度的表示特定環(huán)境中的遺傳物質(zhì)是宏基因組學(xué)研究過程中的難題。正切流過濾系統(tǒng)、差異過濾、梯度離心、空心纖維過濾、DNA酶和RNA酶處理、序列非依賴的單引物擴(kuò)增(Sequence-independentsingleprimeramplification,SISPA)等技術(shù)可用于樣品的制備,而SYBR金染色法可用于實(shí)時監(jiān)測處理樣品中病毒顆粒的數(shù)量。隨著數(shù)據(jù)庫日趨完善,對樣本進(jìn)行宏病毒組測序以后,我們將獲得越來越豐富的信。宏基因?qū)W測序服務(wù)公司
病毒宏基因組測序的研究案例:噬菌體是糞便病毒組的主要成員,糞便病毒組移植(FVT)或能有效的調(diào)節(jié)腸道菌群。在該項(xiàng)概念驗(yàn)證試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),接受瘦小鼠的糞便病毒組移植后,飼喂高脂食物的小鼠體重增長變慢,同時還能保持正常的血糖指標(biāo),F(xiàn)VT引起的腸道菌群變化介導(dǎo)了這些保護(hù)性功能代謝作用。這項(xiàng)研究表明,F(xiàn)VT療法或能用來改善肥胖和糖尿病等腸道菌群相關(guān)代謝類疾病。對噬菌體不造成損傷,大程度保證了病毒活性,適用于下游FVT研究。宏病毒組學(xué)(ViralMetagenomics)是宏基因組學(xué)的一個分支,但與傳統(tǒng)的宏基因組學(xué)概念不同,它是在宏基因組學(xué)概念的基礎(chǔ)上,結(jié)合病毒自身的特點(diǎn),將宏基因組學(xué)方法應(yīng)用到病毒學(xué)領(lǐng)域而形成的。宏基因?qū)W測序服務(wù)公司探普生物的病毒測序結(jié)果質(zhì)量有保障外。
病毒宏基因組測序可直接對樣本中的核酸進(jìn)行高通量測序,鑒定樣本中可能存在的病原菌,輔助臨床決策。覆蓋細(xì)菌、病毒、寄生蟲、衣原體、立克次氏體、螺旋體等13396種微生物;同時進(jìn)行耐藥基因檢測,涵蓋266種耐藥菌,2984種抗性基因。宏基因組測序在新發(fā)腹瀉病毒鑒定中的應(yīng)用:發(fā)現(xiàn)和鑒定新病毒以及確定新病毒與疾病的關(guān)系是預(yù)防、診斷和新發(fā)病毒性傳染病的首要任務(wù)。高通量測序技術(shù)突破了傳統(tǒng)技術(shù)方法的局限,可以直接以標(biāo)本中所有的遺傳物質(zhì)為研究對象,從而能夠快速地鑒定出標(biāo)本中存在的病毒,形成了一門研究特定環(huán)境中病毒群落的新興學(xué)科:病毒宏基因組學(xué)(宏病毒組)。
病毒宏基因組測序:宏基因組測序?qū)Νh(huán)境樣本所有微生物基因組DNA進(jìn)行提取和高通量測序,分析樣本環(huán)境中所有微生物基因組信息。宏基因組測序解讀微生物群體的多樣性與豐度信息,分析微生物群體基因組及功能,也探求微生物與環(huán)境、微生物與宿主之間的關(guān)系,發(fā)掘和研究新的功能基因。生物信息分析內(nèi)容1.測序質(zhì)量分析與統(tǒng)計、評估;2.數(shù)據(jù)庫比對;3.物種豐度分析;4.功能基因注釋;5.基因功能豐度差異分析;6.Pathway富集分析;7.豐度差異基因/物種聚類分析;8.PCA分析。所謂宏基因組學(xué)就是一種以環(huán)境樣品中的微生物群體基因組為研究對象。
病毒宏基因組測序的流程:在探普生物進(jìn)行病毒宏基因組測序的流程非常簡單,簡而言之,客戶只需要說清楚樣品情況,準(zhǔn)備樣品即可,其他事宜都由探普來進(jìn)行安排。大致流程如下:1)與銷售人員溝通項(xiàng)目需求和樣本情況;2)探普生物工作人員擬定項(xiàng)目合同,雙方協(xié)商合同內(nèi)容后簽字蓋章;3)按樣本準(zhǔn)備指南準(zhǔn)備好樣本,填寫信息單后通知銷售人員預(yù)訂干冰,安排樣本寄運(yùn)輸;4)客戶支付項(xiàng)目啟動款,探普生物啟動項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)和分析并提供測序報告;5)客戶支付項(xiàng)目尾款,探普生物提交測序數(shù)據(jù)和分析結(jié)果;6)售后問題處理,項(xiàng)目結(jié)題。宏基因組測序以特定環(huán)境中的整個微生物群落作為研究的對象,不需對微生物進(jìn)行分離培養(yǎng)。成都微生物多樣性測序分析原理
高通量測序技術(shù)能夠提供準(zhǔn)確而科學(xué)的基因測序分析結(jié)果,為**防控提供有力技術(shù)保障。宏基因?qū)W測序服務(wù)公司
探普生物對樣本進(jìn)行宏病毒組測序?qū)嶒?yàn)基于二代測序技術(shù)。經(jīng)過核酸純化-文庫構(gòu)建-生物信息學(xué)分析這3大基本流程后,樣本轉(zhuǎn)換成了序列數(shù)據(jù)。首先,在核酸純化環(huán)節(jié),探普提供專門針對病毒的核酸純化樣本指南,以提高純度和得率,與此同時探普生物也提供核酸純化服務(wù)。第二,文庫構(gòu)建環(huán)節(jié)。樣本的核酸具備濃度低,總量少的特點(diǎn)。探普生物專門針對這一點(diǎn)開發(fā)了超微量核酸文庫構(gòu)建,可以將0.01ng/μl甚至更低濃度的核酸構(gòu)建成測序文庫。第三,生物信息學(xué)分析環(huán)節(jié)。寄生性質(zhì)的生物下機(jī)數(shù)據(jù)一般都伴隨大量的宿主和其他微生物的數(shù)據(jù)。探普生物基于該特點(diǎn),優(yōu)化了自有數(shù)據(jù)庫,搭載了專門用的的生物信息學(xué)分析流程,可處理復(fù)雜背景下的目標(biāo)物種序列。宏基因?qū)W測序服務(wù)公司