一種發(fā)光雜環(huán)化合物,存在于生物發(fā)光的生物體中,如螢火蟲。在含有三磷酸腺苷的情況下,通過熒光素酶氧化脫羧產(chǎn)生光。可用于熒光素酶生物發(fā)光成像和細(xì)胞高通量篩選應(yīng)用。D-熒光素(D-Luciferin)是螢火熒光素酶底物,其量子效率為0.88,是Luminol的20倍。反應(yīng)原理:首先,在鎂離子存在下熒光素酶使熒光素與ATP反應(yīng),接著它被氧化形成二氧雜環(huán)丁烷結(jié)構(gòu)并發(fā)出黃綠色的光。Luciferin-luciferase發(fā)光用于ATP監(jiān)控以測(cè)定細(xì)胞活力以及細(xì)菌計(jì)數(shù)。它還用于報(bào)告基因檢測(cè)。可與小動(dòng)物***成像系統(tǒng)配套使用,用于標(biāo)記LUC基因后的體內(nèi)***熒光檢測(cè)。D-熒光素游離酸(D-Luciferin,freeacid)、D-熒光素鉀鹽(D-Luciferin,potassiumsalt)和D-熒光素鈉鹽(D-Luciferin,sodiumsalt),鉀鹽、鈉鹽的形式是**通用的,因?yàn)樗鼈兌家兹苡谒?。鉀鹽也是***動(dòng)物檢測(cè)使用的主要形式。它們的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為328nm和533nm。動(dòng)物體內(nèi)光學(xué)成像主要采用生物發(fā)光與熒光發(fā)光兩種技術(shù)。上海天津熒光染料
5(6)-FITC(Fluorescein5(6)-isothiocyanate)是一種胺活性衍生物的熒光染料,具有廣泛的應(yīng)用,作為抗體和其他探針標(biāo)記,用熒光顯微鏡,流式細(xì)胞儀、免疫熒光方法如ELISA和Western印跡實(shí)驗(yàn)。熒光素衍生物具有高吸收率、優(yōu)異的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性,是流式細(xì)胞儀和免疫熒光中生物檢測(cè)**常用的熒光標(biāo)記之一。**常用的熒光素包括用于標(biāo)記蛋白質(zhì)(特別是抗體)的異硫氰酸熒光素[5(6)-FITC)],5-FITC和用于標(biāo)記肽和寡核苷酸的羧基熒光素(5-FAM和5(6)-FAM)。BIOFOUNT提供***的基于熒光素的染料、底物和偶聯(lián)物,以及一系列具有針對(duì)細(xì)胞標(biāo)記和檢測(cè)優(yōu)化的特性的質(zhì)量iFluor?熒光標(biāo)記染料。上海天津熒光染料花青類熒光染料屬于共振染料,其特征在于具有離域電荷的氮原子(兩個(gè)氮原子)之間的聚甲炔染料。
熒光染料***用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中,如流式細(xì)胞術(shù)、熒光顯微鏡和免疫組化等,其中熒光淬滅是一個(gè)關(guān)鍵的考量因素,因?yàn)樗苯佑绊懙綄?shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。FITC(異硫氰酸熒光素)是一種常用的綠色熒光染料,具有較高的熒光量子產(chǎn)率和激發(fā)效率。然而,F(xiàn)ITC的一個(gè)主要缺點(diǎn)是容易受到環(huán)境因素的影響,如pH值、溫度、溶劑和離子強(qiáng)度等,從而導(dǎo)致熒光淬滅。此外,F(xiàn)ITC的光穩(wěn)定性相對(duì)較低,長(zhǎng)時(shí)間的光照會(huì)導(dǎo)致其熒光強(qiáng)度降低。CY5.5是一種遠(yuǎn)紅外熒光染料,具有較長(zhǎng)的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng),因此適用于多色熒光標(biāo)記和深組織成像。CY5.5相對(duì)于FITC來(lái)說(shuō),具有更好的光穩(wěn)定性,不易受到環(huán)境因素的影響。此外,CY5.5的熒光量子產(chǎn)率也較高,使其在熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出色。AlexaFluor647是另一種常用的紅色熒光染料,具有與CY5.5相似的長(zhǎng)波長(zhǎng)激發(fā)和發(fā)射特性。AlexaFluor647的優(yōu)點(diǎn)是光穩(wěn)定性較好,可以承受長(zhǎng)時(shí)間的光照而不易淬滅。此外,它在多種溶劑和pH值范圍內(nèi)都能保持穩(wěn)定的熒光性能,因此在復(fù)雜的生物樣本中表現(xiàn)出色。
南京星葉生物科技有限公司Super Fluor系列(效果同Alexa Fluor 系列),質(zhì)優(yōu)價(jià)廉。
1.DiD,DiO,DiI,DiR和DiS細(xì)胞膜染色液制備(1)配置DMSO或EtOH儲(chǔ)存液:儲(chǔ)存液用DMSO或EtOH配置濃度1~5mM。注意:未使用的儲(chǔ)存液保存在-20°C,避免反復(fù)凍融。(2)工作液制備:用合適的緩沖液(如:無(wú)血清培養(yǎng)基,HBSS或PBS)稀釋儲(chǔ)存液,配制濃度為1~5μM的工作液。注意:工作液的**終濃度是根據(jù)不同細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)來(lái)配制??梢詮耐扑]濃度的十倍以上尋找比較好條件。
2.懸浮細(xì)胞染色(1)懸浮細(xì)胞密度為1×106/mL加入到工作液中。(2)在37℃培養(yǎng)細(xì)胞2~20分鐘,不同的細(xì)胞比較好培養(yǎng)時(shí)間不同。(3)染色細(xì)胞試管在1000~1500轉(zhuǎn)離心5分鐘。(4)傾倒上清液,再次緩慢加入預(yù)溫37℃的培養(yǎng)液。(5)重復(fù)(3),(4)步驟兩次以上。 小動(dòng)物成像熒光染料能夠選擇性地與目標(biāo)細(xì)胞或組織結(jié)合。
小動(dòng)物***熒光成像技術(shù)是現(xiàn)***物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的一項(xiàng)重要技術(shù),因其具有操作簡(jiǎn)單、實(shí)時(shí)直觀、靈敏度高、實(shí)驗(yàn)成本低等特點(diǎn),已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)研究及藥物開發(fā)等方面。納米材料在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用,旨在解決傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)面臨的各種醫(yī)學(xué)挑戰(zhàn),包括生物利用度差,靶向特異性受損,全身和***毒性等。納米材料具有很多與眾不同的優(yōu)點(diǎn),比如多功能性、大的負(fù)載量、靶向性、血液循環(huán)時(shí)間長(zhǎng)等。納米材料在生物醫(yī)學(xué)中起著關(guān)鍵作用,可以有效攜帶成像探針、***劑或生物材料并傳遞至靶點(diǎn),如特定的***、組織甚至細(xì)胞。光學(xué)成像主要包括生物發(fā)光(bioluminescenceimaging,BLI)和焚光成像(fluorescenceimaging,F1)兩種技術(shù)。前者利用焚光素酶基因(如FLUC,RLUC,GLUC)標(biāo)記細(xì)胞或DNA,其表達(dá)產(chǎn)物與莖火蟲素類底物反應(yīng)產(chǎn)生熒光。后者包括多種熒光蛋白基因(如GFP,RFP,YFP等)、有機(jī)熒光染料、熒光上轉(zhuǎn)換納米粒子、量子點(diǎn)等的應(yīng)用。 小動(dòng)物成像熒光染料是一種先進(jìn)的技術(shù)可以在小動(dòng)物體內(nèi)實(shí)時(shí)觀察和研究細(xì)胞、組織的功能和代謝過程。上海天津熒光染料
異硫氰酸熒光素含有一個(gè)異硫氰酸酯反應(yīng)基團(tuán)這有助于其對(duì)通常存在于生物分子中的動(dòng)漫和巰基基團(tuán)具有反應(yīng)性。上海天津熒光染料
Cy7DiC18(DiR)是一個(gè)親脂性、近紅外熒光花青染料。這個(gè)染料常用于標(biāo)記細(xì)胞質(zhì)膜。Cy7DiC18(DiR)的兩個(gè)18-碳鏈插入到細(xì)胞膜,從而進(jìn)行特定的、穩(wěn)定的細(xì)胞染色,幾乎不會(huì)發(fā)生細(xì)胞間的染料轉(zhuǎn)移。Cy7DiC18(DiR)(近紅外熒光)和其他細(xì)胞膜熒光染料如DiI(橙色熒光),DiO(綠色熒光),DiD(紅色熒光)配合使用,為多色成像和流式細(xì)胞分析提供了有效的工具。Cy7DiC18(DiR)染色后可進(jìn)行多聚甲醛(不可使用甲醇等其他試劑)的固定,但不建議在染色后進(jìn)行透化的過程。此外,在固定透化(室溫下用0.1%TritonX-100透化)后,也可以很好地進(jìn)行質(zhì)膜染色。
1、Cy7DiC18(DiR)染色固定的細(xì)胞或組織樣品時(shí),通常使用配制在PBS中的4%多聚甲醛進(jìn)行固定,使用其它不適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ簳?huì)導(dǎo)致熒光背景較高。
2、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 上海天津熒光染料