遼寧轉染試劑企業(yè)

小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉染可用于評估轉染效率。這可以通過引入含有熒光素酶報告基因的質(zhì)粒來實現(xiàn)，其中的3'UTR可以被特定的小RNA(如miRNA)識別，然后允許小RNA結合以抑制熒光素酶的表達。另一方面，在RNA干擾(RNAi)研究中，小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉染也是必不可少的，以確定siRNA等特定小RNA對宿主細胞中特定基因表達的調(diào)節(jié)作用。小的非編碼RNA，如siRNA，以其表觀遺傳調(diào)控能力而聞名，更具體地說，是轉錄后對特定基因表達的調(diào)控。siRNA模擬物和攜帶與熒光素酶報告系統(tǒng)相關的特定基因的質(zhì)粒DNA可以同時共轉染到靶細胞中。siRNA模擬物成功敲低特定基因表達將導致熒光素酶活性***降低。共轉染還可能涉及不同的小分子如miRNAs，這有助于研究小RNA對靶宿主細胞的影響。例如，如果引入miRNA模擬物可以影響特定細胞類型中特定下游基因的表達，那么預計將其抑制劑序列同時轉染到同一細胞中會降低單獨miRNA模擬物序列發(fā)揮的轉錄后調(diào)節(jié)作用。與單一核酸類型的轉染相比，涉及將多個核酸轉移到同一細胞中的共轉染通常更多挑戰(zhàn)性更大，因為并非所有核酸類型都能有效轉移，這可能取決于轉染方法和所涉及的細胞類型。不同種類的納米顆粒轉染細胞系后，產(chǎn)生不同的效率、毒性和組織特異性。遼寧轉染試劑企業(yè)

攜帶要轉染的特定核酸的載體構建可以進一步分為病毒載體或質(zhì)粒載體。病毒和質(zhì)粒通過存在合適的真核啟動子促進外源轉基因的表達。病毒載體可能在宿主細胞中觸發(fā)免疫原性反應，而非病毒載體的免疫原性相對較低。需要一種傳遞機制來促進靶向核酸或載體結構轉移到宿主細胞中。其中一些需要物理方法，而另一些涉及使用遞送載體，可能是脂質(zhì)載體或非脂質(zhì)載體，以幫助增強載體載體復合物與宿主細胞膜之間的接觸，從而促進復合物進入細胞。設計和啟動轉染試驗可能具有挑戰(zhàn)性，特別是可供選擇的轉染方法或策略種類繁多的情況下。長沙轉染試劑毒性低納米顆粒，由于其在DNA轉運到細胞中的保護能力，在不久的將來可以用作轉基因的非病毒載體。

deae-葡聚糖是一種化學修飾的葡聚糖類似物。通過用二乙基氨基乙基修飾，右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質(zhì)子化，這使得它可以自組裝成帶負電荷核酸的納米顆粒。deae -葡聚糖是***個用于核酸轉染的陽離子聚合物。早在20世紀50年代，它就極大地增強了脊髓灰質(zhì)炎病毒和SV40病毒DNA在哺乳動物細胞中的轉染。隨后，deae -葡聚糖被廣泛應用于RNA或DNA的轉染。然而，由于以下原因，deae -葡聚糖并沒有作為比較好候選物:轉染效率遠低于脂質(zhì)體等其他試劑;deae -葡聚糖的細胞毒性和免疫原性不容忽視。

質(zhì)子泵抑制劑可以通過基于從一個供體蛋白到受體蛋白的能量轉移的物理測量來評估，也可以通過化學測量來評估，在化學測量中，表達的蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的相互作用活性可以在刺激時通過適當?shù)膱蟾嫦到y(tǒng)來檢測。后一種基于熒光素酶的方法被稱為生物發(fā)光共振能量轉移(BRET)，它是熒光共振能量轉移研究質(zhì)子泵抑制劑的替代方法。多個質(zhì)粒的共轉染也可以應用于轉染，其中包括將編碼Cas9蛋白和引導RNA的質(zhì)粒遞送到宿主細胞，使用CRISPR/Cas9基因組工程系統(tǒng)進行基因組編輯。除了使用多個質(zhì)粒外，雙鏈載體是另一種將不同基因傳遞到宿主細胞的方法。雙鏈載體是一種能夠表達兩種不同基因的載體，通過一個內(nèi)部核糖體進入位點連接，只有一個啟動子?；瘜W轉染可分為基于脂質(zhì)體或非基于脂質(zhì)體。

人類原代干細胞是另一種公認的難以轉染的細胞類型，轉染這種細胞類型的比較大挑戰(zhàn)仍然是效率低和細胞活力低。2015年，王等報道了Lipofectamine 2000和XtremeGENE HP等轉染試劑在人牙周韌帶干細胞中的轉染效率非常低(<6%)，而陽性對照慢病毒載體的轉染效率約為95%。與同一研究中采用的磁輔助轉染技術相比，后者表現(xiàn)出更高的轉染效率(～11%)和更低的毒性。在另一項涉及人骨髓間充質(zhì)干細胞(hBM-MSC)的研究中，Lipofectamine LTX被證明比TransIT-2020、Lipofectamine 3000和聚乙烯亞胺(PEI)等其他試劑產(chǎn)生比較好的轉染效率(至少高出三倍)，但細胞存活率較低(<50%)。相比之下，使用TransIT-2020試劑可能會獲得更好的結果，該試劑的效率約為30%，細胞回收率高達90%，細胞干性約為95%。另一個難以轉染干細胞的例子是誘導多能干細胞(iPSCs)。在一項比較轉染人類ipsc衍生心肌細胞(hiPSC-CMSs)的不同非病毒方法的研究中，與其他試劑(Lipofectamine 3000、Lipofectamine 2000和基于pei的非脂質(zhì)體試劑TransporterTM5和PEI25)相比，Lipofectamine STEM顯示出更高的轉染效率(高達32%)，其效率低于20%。隨著寡核苷酸生物合成產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，不同類型的修飾寡核苷酸也被引入市場，以提高小RNA寡核苷酸轉染的效率。湖北干細胞轉染試劑

脂質(zhì)復合物又稱陽離子脂質(zhì)-核酸復合物(CLNACs)。遼寧轉染試劑企業(yè)

基于病毒的轉染，或者更具體地稱為轉導，涉及使用病毒載體將特定的核酸序列帶入宿主細胞。逆轉錄病毒，如慢病毒，通常用于穩(wěn)定轉染。相比之下，腺病毒、腺相關病毒(AAV)和皰疹病毒是不能保證穩(wěn)定轉染的病毒載體。與非病毒轉染相比，病毒轉導被***認為是一種轉染難以轉染的細胞(如原代細胞)的高效方法。一般來說，逆轉錄病毒只能用于轉染分裂細胞，而腺病毒、AAV和皰疹病毒可用于轉染分裂細胞和非分裂細胞。然而，病毒轉導與較高的細胞毒性相關，并可能造成病毒***的風險。病毒載體通常包含一個病毒包膜，它包圍并保護病毒。表面蛋白可能存在于某些類型的病毒(如腺病毒)的表面，以促進與宿主細胞的接觸和通信。病毒遺傳物質(zhì)被包裹在衣殼中，進入宿主細胞后，衣殼將被打開。與腺病毒、aav和皰疹病毒的基因組不同，這些病毒的基因組是單獨維持的，逆轉錄病毒基因組被整合到宿主基因組中。通常，腺病毒和皰疹病毒攜帶雙鏈DNA, AAV攜帶單鏈DNA，而逆轉錄病毒攜帶RNA。遼寧轉染試劑企業(yè)