陜西熒光染料Cy5.5

來源: 發(fā)布時間:2024-11-10

注:建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學曲線,從而確定比較高信號檢測時間和信號平臺期。保存和操作的過程中都要避光。另外水溶性儲存液過濾除菌后,可以-20℃或-80℃分裝凍存,避免反復凍融。如果有條件,對儲存液充氮氣或氬氣(防止氧化),穩(wěn)定性和保存時間更長。 注射方式,動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射,因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學曲線,確定比較好信號平臺期和比較好的檢測時間。熒光素鉀鹽和熒光素鈉鹽應用上沒有差別,兩者的差別在于物理性狀上如外形和溶解性。鈉鹽的水溶性高于鉀鹽。從目前發(fā)表的文獻來看,鉀鹽的使用率遠高于鈉鹽,尤其是體內(nèi)實驗。兩者功效相同。 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。小動物成像熒光染料是一種先進的技術(shù)可以在小動物體內(nèi)實時觀察和研究細胞、組織的功能和代謝過程。陜西熒光染料Cy5.5

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SuperFluor活化酯(與Invitrogen的AlexaFluor活化酯完全相同)SuperFlour系列熒光探針,具有更強的熒光強度,更廣的pH應用范圍(pH4~10),更好的抗淬滅性。在生物熒光領(lǐng)域已逐漸替代FITC,Cy3,Cy5,Cy5.5,Cy7等熒光染料。1.標記效率低——計算結(jié)果顯示每摩爾145,000MW的蛋白標記的熒光團少于4mol有以下原因:1)緩沖液中含有痕量伯銨成分,與染料反應降低了標記效率。如果蛋白已經(jīng)溶于含氨基的緩沖液(如Tris或氨基乙酸),標記前用PBS透析。2)蛋白含量較低(≤1mg/mL)會影響標記效率。3)標記步驟中加入碳酸氫鈉的作用是將反應混合物的pH升高至~8,因為在弱堿性環(huán)境中標記反應的效率比較高。如果蛋白溶液的緩沖范圍在低pH,加入重碳酸鹽也無法將pH調(diào)節(jié)至**適水平。要么加大重碳酸鹽的量,要么將緩沖液換成PBS,或用0.1M碳酸氫鈉透析等。4)研究顯示pH升至9.0~9.4,標記效率和標記速度(只需10min)明顯改善。5)不同抗體與熒光團的反應速率不同,染料標記后保留的生物活性程度也不同,因此標準步驟也不是總有比較好的標記結(jié)果。為增加標記率,可以對同一樣品進行再標記,或減少蛋白的量加大染料的量重新標記。有研究者在室溫孵育1小時后再4℃孵育過夜,情況有所改善。組織熒光染料Fluor 750熒光染料可以單獨使用,也可以組合成復合熒光染料使用。

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蛋白熒光標記技術(shù)是目前**為常見的蛋白體外標記技術(shù),利用級聯(lián)放大反應原理,將極度敏感性且易于檢測的熒光素通過某個基團吸附或共價結(jié)合后,標記到特異性抗原或抗體分子上,應用熒光顯微鏡觀察熒光標記物因增強放大效應而產(chǎn)生顏色、光譜等變化,以分析示蹤相應抗體或抗原性質(zhì)與含量的方法。該技術(shù)在具有高度精確性的熒光顯微鏡下,借助高度靈敏性的熒光檢測,在各種生物過程中對目的蛋白進行可視化,從而通過抗原抗體高度特異性免疫定量表達或在細胞研究中定位。蛋白熒光標記已成為研究蛋白質(zhì)互作、酶活性、***示蹤以及細胞分選重要工具。蛋白標記常用熒光染料隨著蛋白熒光標記技術(shù)不斷發(fā)展,各類熒光素廣泛應用于生物實驗中,目前常用標記蛋白/抗體的熒光素主要有BODIPY類、香豆素類、羅丹明類、近紅外類、NBD胺類以及菁染料等。南京星葉生物科技有限公司提供多種性價比高的各類活化熒光素,其熒光染料覆蓋波長范圍從350nm到790nm,例如Cy系列、SuperFluor系列(效果同AlexaFluor系列)等,用于標記抗體、多肽以及蛋白功能基團,繼而生成分子探針,通過熒光成像進行相應檢測。

三、細胞實驗D-熒光素鉀鹽體外生物發(fā)光試驗:D-熒光素鉀鹽,無菌純水,完全培養(yǎng)基(自行配制)1、貼壁細胞:將細胞接種于培養(yǎng)板中孵育數(shù)小時或過夜,使細胞貼壁。懸浮細胞:可以將細胞接種于培養(yǎng)板后直接進行后續(xù)操作,無需孵育。如果倍增時間相對較短,則應考慮倍增時間進行細胞計數(shù)。2、將15mg熒光素鉀鹽溶解于1ml無菌水中,制備成100X熒光素儲備液(15mg/ml),輕輕顛倒搖動至熒光素鉀鹽完全溶解?;靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。3、用預熱好的細胞培養(yǎng)基1∶100稀釋100X熒光素儲備液(15mg/ml),配制成熒光素工作液(終濃度150μg/ml),即配即用。4、去除培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基。5、在成像前,將適量熒光素工作液加入細胞中,然后進行圖像分析。注意:成像前在37℃下對細胞進行短時間孵育可增強信號。孵育時間取決于特定的細胞類型。一般來說孵育10分鐘就足夠了,根據(jù)需要進行測試和調(diào)整。6、每隔10分鐘,**多40分鐘,使用VILBERFUSIONFX成像系統(tǒng)檢查體外生物發(fā)光,確定動力學曲線并找出細胞的峰值成像時間點DiD,DiO,DiI,DiR和DiS 染色的細胞可以分別用經(jīng)典的FL1,F(xiàn)L2,F(xiàn)L3和FL4流式細胞儀檢測。

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熒光染料,由于靈敏度高,操作方便,逐漸取代了放射性同位素作為檢測標記,其廣泛應用于熒光免疫,熒光探針,細胞染色等。包括特異性的DNA染色,用于染色體分析、細胞周期、細胞凋亡等相關(guān)研究。另有很多核酸染料在多色染色系統(tǒng)中是非常有用的復染劑,可作為背景對照,標記細胞核使細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)的空間關(guān)系一目了然。熒光標記的單克隆抗體技術(shù)為流式細胞儀在研究細胞膜和細胞內(nèi)各種功能性抗原、**基因蛋白等領(lǐng)域擴展了無限的應用空間。熒光探針可以通過蛋白質(zhì)交聯(lián)劑共價結(jié)合在單克隆抗體上。免疫熒光標記**常用的染料有異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC)、藻紅蛋白(PE)以及AlexaFluor系列染料等。核酸熒光染料對細胞核染色后定量測量細胞所發(fā)出的熒光強度,就可以確定細胞核中DNA、RNA的含量,并可以對細胞周期和細胞的增殖狀況進行分析。有多種熒光染料可以對細胞中的DNA或RNA染色,常用的DNA染料包括碘化丙啶(PI)、DAPI、Hoechst33342等,RNA染料有噻唑橙、吖啶橙等。熒光素衍生物具有高吸收率優(yōu)異的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性是流式細胞儀和免疫熒光中常用的熒光標記之一。組織熒光染料Fluor 750

吲哚菁綠的主要作用之一是在醫(yī)學影像學中作為造影劑。陜西熒光染料Cy5.5

3.粘壁細胞的染色(1)使粘壁的細胞在無菌實驗室培養(yǎng)。(2)從培養(yǎng)基中移走蓋玻片,吸走過量培養(yǎng)液,將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。(3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液,輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。(4)在37℃培養(yǎng)細胞2~20分鐘,不同的細胞比較好培養(yǎng)時間不同。(5)吸干染料工作液,用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次,每次用預溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞,培養(yǎng)5~10分鐘,然后吸干培養(yǎng)基。

4.顯微鏡檢測(1)DiD,DiO,DiI,DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。(2)多色染料的同時檢測,濾光器按照以下設定:a)DiI和DiO=OmegaXF52,Chroma51004;b)DiI和DiD=OmegaXF92,Chroma51007;c)DiI,DiO和DiD=OmegaXF93,Chroma61005

5.流式細胞儀的檢測DiD,DiO,DiI,DiR和DiS染色的細胞可以分別用經(jīng)典的FL1,F(xiàn)L2,F(xiàn)L3和FL4流式細胞儀檢測。 陜西熒光染料Cy5.5