細胞核熒光染料高分子

來源: 發(fā)布時間:2024-10-09

管可用于實驗室的熒光團數(shù)量眾多,但這些染料通常屬于以下三組之一:熒光染料:這些是用于在體外標記生物相關(guān)分子的小型有機天然或合成熒光分子。該組中的一些熒光染料包括熒光素、溴化乙錠和花青。熒光蛋白:這些是較大的、生物制造的蛋白質(zhì),由于它們的大分子結(jié)構(gòu)而發(fā)出熒光。GFP、RFP和YFP是屬于該組的一些染料。量子點:這些高熒光合成納米晶體由半導體材料制成。隨著熒光基本特性的廣泛應用和該領域的顯著進步,已經(jīng)針對特定應用和儀器開發(fā)和優(yōu)化了數(shù)百種活性熒光染料。同樣,多年來,大量復雜的熒光技術(shù)(例如,F(xiàn)RET、TRF、FP、FRAP、FACS、FCS)也在不斷發(fā)展。5(6)-FITC (Fluorescein 5(6)-isothiocyanate) 是一種胺活性衍生物的熒光染料.細胞核熒光染料高分子

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為什么要使用熒光染料?雖然不同的染色技術(shù)(即考馬斯染色、銀染色、熒光染色)可用于可視化凝膠電泳分離的蛋白質(zhì),但使用熒光染料具有其獨特的優(yōu)勢。他們提供:高靈敏度:對于大多數(shù)分析物,熒光測量的靈敏度比吸光度測量高1000倍,即使在使用小樣本時也可以令人滿意地達到ppt(萬億分之一)的檢測限。寬線性動態(tài)范圍。輸出與樣品濃度成正比。低干擾:由于吸收光的材料數(shù)量眾多,分光光度測量通常會遇到干擾問題。在進行熒光測量時不會遇到這個問題,因為只有少數(shù)材料具有熒光能力。高通量:熒光測量具有簡單而強大的協(xié)議,并且可以自動化用于高通量應用。遼寧熒光染料Fluor 488D-熒光素鉀鹽南京星葉生物科技有限公司。

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熒光染料標記蛋白或肽技術(shù)是一種常見的蛋白質(zhì)體外標記技術(shù)。除了GFP等熒光蛋白的融合表達外,目標蛋白還可以通過熒光染料標記直接進行下游實驗操作,如***跟蹤、細胞分選等。

FITC熒光標記的原理是什么?

熒光標記所依賴的化合物稱為熒光材料。熒光材料是指具有共軛雙鍵系統(tǒng)化學結(jié)構(gòu)的化合物。當受到紫外線或藍紫光的照射時,它可以被刺激為刺激狀態(tài)。當激發(fā)狀態(tài)恢復到基本狀態(tài)時,它會發(fā)出熒光。蛋白質(zhì)熒光標記技術(shù)利用熒光材料的共價結(jié)合在目標分子的基團上,利用其熒光特性提供研究對象的信息。

蛋白熒光標記技術(shù)是目前**為常見的蛋白體外標記技術(shù),利用級聯(lián)放大反應原理,將極度敏感性且易于檢測的熒光素通過某個基團吸附或共價結(jié)合后,標記到特異性抗原或抗體分子上,應用熒光顯微鏡觀察熒光標記物因增強放大效應而產(chǎn)生顏色、光譜等變化,以分析示蹤相應抗體或抗原性質(zhì)與含量的方法。該技術(shù)在具有高度精確性的熒光顯微鏡下,借助高度靈敏性的熒光檢測,在各種生物過程中對目的蛋白進行可視化,從而通過抗原抗體高度特異性免疫定量表達或在細胞研究中定位。蛋白熒光標記已成為研究蛋白質(zhì)互作、酶活性、***示蹤以及細胞分選重要工具。蛋白標記常用熒光染料隨著蛋白熒光標記技術(shù)不斷發(fā)展,各類熒光素廣泛應用于生物實驗中,目前常用標記蛋白/抗體的熒光素主要有BODIPY類、香豆素類、羅丹明類、近紅外類、NBD胺類以及菁染料等。南京星葉生物科技有限公司提供多種性價比高的各類活化熒光素,其熒光染料覆蓋波長范圍從350nm到790nm,例如Cy系列、SuperFluor系列(效果同AlexaFluor系列)等,用于標記抗體、多肽以及蛋白功能基團,繼而生成分子探針,通過熒光成像進行相應檢測。DAPI染色液(DAPI Staining Solution)常用于細胞核染色,可將細胞核染成藍色。

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一、體外生物發(fā)光試驗熒光素試劑的制備:D-熒光素,鉀鹽,無菌純水,完全培養(yǎng)基(自行配置)1、用無菌水制備100X熒光素原液(15mg/ml),輕輕顛倒搖動至熒光素完全溶解?;靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。2、將D-luciferin,potassiumsalt溶解于預熱好的組織培養(yǎng)基中制備成濃度為150μg/ml的工作液。用組織培養(yǎng)基1∶100稀釋儲存液,配置工作液(終濃度150μg/mL)3、去除培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基圖像分析前,向細胞培養(yǎng)板中添加1×熒光素工作液,然后進行圖像分析-注射器濾膜過濾除菌,0.2μm注:成像前在37℃下對細胞進行短時間孵育可增強信號。Super Fluor活化酯(與Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同)。細胞核熒光染料高分子

動物體內(nèi)光學成像主要采用生物發(fā)光與熒光發(fā)光兩種技術(shù)。細胞核熒光染料高分子

所需的CY3-NHS酯的量取決于待標記蛋白的量,以及CY3-NHS的比較好摩爾比為10。示例:假設所需的標記蛋白為500μL2mg/mLIgG(MW=150,000),用100μLDMSO溶解1mgCY3-NHS酯,得到所需的CY3-NHS酯體積為5.05μL,詳細計算過程如下:1)mmol(IgG)=mg/mL(IgG)×mL(IgG)/MW(IgG)=2mg/mL×0.5mL/150,000mg/mmol=6.7×10-6mmol2)mmol(CY3-NHS酯)=mmol(IgG)×10=6.7×10-6mmol×10=6.7×10-5mmol3)uL(CY3-NHS酯)=mmol(CY3-NHS酯)×MW(CY3-NHS酯)/mg/μL(CY3-NHS酯)=6.7×10-5mmol×753.88mg/mmol/0.01mg/μL=5.05μL(CY3-NHS酯)4.運行偶聯(lián)反應1)將室溫新鮮制備的10mg/mLCY3-NHS酯緩慢加入到0.5mL蛋白質(zhì)樣品中于溶液中,輕輕搖動混勻,然后短暫離心,將樣品收集于反應管底部。請勿混勻,否則2)將反應管安置避光處,在接下來的間隔輕輕蛋白水解60分鐘。10-15分鐘,輕輕翻轉(zhuǎn)幾次以充分混合5.偶聯(lián)偶聯(lián)物以下方案是使用SepHadexG-25柱封閉染料-偶聯(lián)偶聯(lián)物的范例。1)根據(jù)制造說明準備SepHadexG-25柱。2)將反應混合物(來自“Runconjugationreaction”)加載到SepHadexG-25柱的頂部。3)一旦樣品在頂部樹脂表面下方運行,立即添加PBS(pH7.2-7.4)。4)向所需樣品添加更多PBS(pH7.2-7.4)即可完成柱密封。細胞核熒光染料高分子