湖南外泌體熒光染料

在1990年代***使用的綠色熒光蛋白（從水母維多利亞水母克?。┘捌溲苌铮ɡ缭寮t藍(lán)蛋白、藻膽蛋白和藻紅蛋白等）是當(dāng)今生物學(xué)研究中**常用的一些生物熒光團(tuán)。雖然熒光團(tuán)可用于在細(xì)胞、細(xì)菌和各種***中表達(dá)質(zhì)粒，但它們的使用有一些缺點(diǎn)，即它可能很耗時(shí)，并且在融合時(shí)還能夠改變某些細(xì)胞蛋白的正常生物學(xué)功能。此外，與許多其他熒光團(tuán)相比，生物熒光團(tuán)的光穩(wěn)定性和靈敏度較低。綠色熒光蛋白(GFP)綠色熒光蛋白是當(dāng)下流行的生物熒光團(tuán)之一，由238個(gè)氨基酸組成，其中三個(gè)負(fù)責(zé)發(fā)出可見綠色熒光的結(jié)構(gòu)。在水母本身中，熒光團(tuán)與水母發(fā)光蛋白（一種蛋白質(zhì)）相互作用，當(dāng)添加鈣時(shí)會(huì)發(fā)出藍(lán)光。通過DNA重組，研究人員可以使用負(fù)責(zé)產(chǎn)生蛋白質(zhì)的基因來研究給定的基因和蛋白質(zhì)。在這里，在將復(fù)合物插入細(xì)胞之前，該基因與另一個(gè)基因（負(fù)責(zé)產(chǎn)生所需蛋白質(zhì)的第二個(gè)基因）結(jié)合。如果細(xì)胞產(chǎn)生綠色熒光，研究人員就可以明顯看出該細(xì)胞能夠表達(dá)目標(biāo)基因。GFP由488nm激光線激發(fā)，可在510nm處檢測(cè)。來自熒光團(tuán)的微弱信號(hào)可以使用抗GFP抗體放大。作為生物標(biāo)記物，綠色熒光蛋白用于以下功能：監(jiān)測(cè)各種生理過程*識(shí)別蛋白質(zhì)定位*檢測(cè)轉(zhuǎn)基因表達(dá)Cy5.5含有一個(gè)游離胺基,可與多種官能團(tuán)共軛,包括NHS酯和環(huán)氧化合物。湖南外泌體熒光染料

Hoechst33258是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，對(duì)細(xì)胞的毒性較低。用于細(xì)胞核染色時(shí)，推薦的Hoechst33258工作濃度為0.5-10μg/ml。儲(chǔ)存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。注意事項(xiàng)：Hoechst33258對(duì)人體有害，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液?？篃晒獯銣绶馄?P0126)可以向碧云天訂購。為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作注意事項(xiàng)：Hoechst33342對(duì)人體有一定刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。湖南外泌體熒光染料熒光素的衍生物包括異硫氰酸熒光素、俄勒岡綠和羧基萘并熒光素等。

三：貼壁細(xì)胞染色1、將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。2、從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，但要使表面保持濕潤(rùn)。3、在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。4、37℃孵育細(xì)胞2~20min，不同的細(xì)胞比較好培養(yǎng)時(shí)間不同。可以20min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記效果。5、吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育5~10min，然后吸干培養(yǎng)基。但要使表面保持濕潤(rùn)。四：結(jié)果檢測(cè)樣品可在培養(yǎng)基中進(jìn)行檢測(cè)，可通過熒光顯微鏡成像或流式細(xì)胞儀分析。

CY7是一種CY染料。CY為花菁(Cyanine)的縮寫，是由奇數(shù)個(gè)甲基單元連接的兩個(gè)氮原子組成的化合物。菁類化合物具有波長(zhǎng)長(zhǎng)、吸收和發(fā)射可調(diào)、消光系數(shù)高的特點(diǎn)CY系染料常被用于蛋白、抗體以及小分子化合物的標(biāo)記，對(duì)于蛋白抗體的標(biāo)記，可以通過簡(jiǎn)單的混合反應(yīng)來完成結(jié)合，下面我們介紹了蛋白抗體標(biāo)記的標(biāo)記方法，具有一定的參考意義。一、比較好蛋白制備1)為獲得標(biāo)記效果，請(qǐng)制備蛋白(抗體)濃度為2mg/mL。2)蛋白溶液的pH值為8.5±0.5。如果pH值低于8.0，應(yīng)使用1M3)如果蛋白濃度低于2mg/mL，標(biāo)記效率會(huì)**降低。為獲得比較好標(biāo)記效率，建議**終蛋白濃度范圍為2-10mg/mL。4)蛋白必須在不含伯胺(如Tris或甘氨酸)的緩沖液中，和銨離子，否則會(huì)影響標(biāo)記效率。2.染色制備(以CY3-NHS酯為例)將無水DMSO加入CY3-NHS酯小瓶中，制備成10mM儲(chǔ)備液。通過移液器或渦旋混合均勻計(jì)算。使用前需先使用縮合液(500μg/mL)(HY-D0178)活化另一個(gè)可進(jìn)行后續(xù)標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。Cy3 (Cyanine 3) 是一種發(fā)橘黃色熒光的花青素?zé)晒馊玖稀?/p>

為什么要使用熒光染料？雖然不同的染色技術(shù)（即考馬斯染色、銀染色、熒光染色）可用于可視化凝膠電泳分離的蛋白質(zhì)，但使用熒光染料具有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。他們提供：高靈敏度：對(duì)于大多數(shù)分析物，熒光測(cè)量的靈敏度比吸光度測(cè)量高1000倍，即使在使用小樣本時(shí)也可以令人滿意地達(dá)到ppt（萬億分之一）的檢測(cè)限。寬線性動(dòng)態(tài)范圍。輸出與樣品濃度成正比。低干擾：由于吸收光的材料數(shù)量眾多，分光光度測(cè)量通常會(huì)遇到干擾問題。在進(jìn)行熒光測(cè)量時(shí)不會(huì)遇到這個(gè)問題，因?yàn)橹挥猩贁?shù)材料具有熒光能力。高通量：熒光測(cè)量具有簡(jiǎn)單而強(qiáng)大的協(xié)議，并且可以自動(dòng)化用于高通量應(yīng)用。PI常用于細(xì)胞凋亡(apoptosis)或細(xì)胞壞死(necrosis)的檢測(cè)，常用于流式細(xì)胞儀分析。湖南外泌體熒光染料

生物發(fā)光是利用熒光素酶報(bào)告基因在體內(nèi)表達(dá)產(chǎn)生的熒光蛋白與體外注射的熒光素底物發(fā)生化學(xué)反映產(chǎn)生熒光。湖南外泌體熒光染料

D-熒光素是熒光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化螢火蟲產(chǎn)生典型的黃綠色光。該反應(yīng)的 560 nm 化學(xué)發(fā)光在幾秒鐘內(nèi)達(dá)到峰值，當(dāng)?shù)孜餆晒馑剡^量時(shí)，光輸出與熒光素酶濃度成正比。熒光素酶 (luc) 基因是用于研究和藥物篩選的流行報(bào)告基因?；瘜W(xué)發(fā)光技術(shù)幾乎沒有背景，使得 luc 報(bào)告基因成為檢測(cè)低水平基因表達(dá)的理想選擇。標(biāo)準(zhǔn)閃爍計(jì)數(shù)器可以可靠地測(cè)量低至 0.02 pg 的熒光素酶。除了作為基因表達(dá)報(bào)告者的作用外，熒光素酶還常用于極其靈敏的 ATP 檢測(cè)中[1]。我們提供螢火蟲熒光素酶 (HY-P1004)、熒光素游離酸 (HY-12591A) 及其水溶性鈉鹽 (HY-12591) 和鉀鹽 (HY-12591B)。湖南外泌體熒光染料