廈門轉(zhuǎn)染試劑便宜

在轉(zhuǎn)染實驗中使用對照對于確定所使用的轉(zhuǎn)染試劑和核酸的效果和效率至關重要。通常，質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和寡核苷酸轉(zhuǎn)染實驗都需要陽性對照、陰性對照、未轉(zhuǎn)染對照和模擬轉(zhuǎn)染對照。陽性對照是先前已被證明對轉(zhuǎn)染實驗產(chǎn)生已知影響的DNA或RNA，例如影響特定下游遺傳靶點的表達。在轉(zhuǎn)染工作的初始階段，需要一個陽性對照來建立一個優(yōu)化的轉(zhuǎn)染方案，之后，陽性對照可以作為參考，與實驗組進行比較。另一方面，陰性對照用于確認宿主細胞中預期的基因表達變化是否歸因于轉(zhuǎn)染而不是其他原因。在質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染中，陰性對照可以是缺乏DNA和轉(zhuǎn)染載體的反應，或者兩者都沒有，只有宿主細胞。在小RNA轉(zhuǎn)染中，陰性對照包含一個非同源序列，該序列通常是一個與靶序列具有相同核苷酸長度和組成但與任何已知哺乳動物基因不同源的打亂序列。未轉(zhuǎn)染的對照包括不含轉(zhuǎn)染試劑和核酸的細胞培養(yǎng)，作為宿主細胞基本信息的對照，包括活力、表型，更重要的是，不受轉(zhuǎn)染影響的靶基因的基線表達水平。模擬轉(zhuǎn)染是指不含遺傳靶標或核酸的轉(zhuǎn)染，可以評估轉(zhuǎn)染試劑(如背景自熒光噪聲)產(chǎn)生的影響。在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染實驗中，推薦使用空質(zhì)粒對照作為模擬轉(zhuǎn)染對照。利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質(zhì)體核酸重新包裝到外泌體中。廈門轉(zhuǎn)染試劑便宜

基于病毒的轉(zhuǎn)染，或者更具體地稱為轉(zhuǎn)導，涉及使用病毒載體將特定的核酸序列帶入宿主細胞。逆轉(zhuǎn)錄病毒，如慢病毒，通常用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。相比之下，腺病毒、腺相關病毒(AAV)和皰疹病毒是不能保證穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的病毒載體。與非病毒轉(zhuǎn)染相比，病毒轉(zhuǎn)導被***認為是一種轉(zhuǎn)染難以轉(zhuǎn)染的細胞(如原代細胞)的高效方法。一般來說，逆轉(zhuǎn)錄病毒只能用于轉(zhuǎn)染分裂細胞，而腺病毒、AAV和皰疹病毒可用于轉(zhuǎn)染分裂細胞和非分裂細胞。然而，病毒轉(zhuǎn)導與較高的細胞毒性相關，并可能造成病毒***的風險。病毒載體通常包含一個病毒包膜，它包圍并保護病毒。表面蛋白可能存在于某些類型的病毒(如腺病毒)的表面，以促進與宿主細胞的接觸和通信。病毒遺傳物質(zhì)被包裹在衣殼中，進入宿主細胞后，衣殼將被打開。與腺病毒、aav和皰疹病毒的基因組不同，這些病毒的基因組是單獨維持的，逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組被整合到宿主基因組中。通常，腺病毒和皰疹病毒攜帶雙鏈DNA, AAV攜帶單鏈DNA，而逆轉(zhuǎn)錄病毒攜帶RNA。內(nèi)蒙古DOTAP 轉(zhuǎn)染試劑影響物理轉(zhuǎn)染或機械轉(zhuǎn)染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。

作為一般指導原則，建議使用早期傳代的細胞以獲得良好的轉(zhuǎn)染效率，特別是涉及原代或干細胞的轉(zhuǎn)染。另一個有趣的觀察結果是，37℃是可以幫助原代細胞達到更高轉(zhuǎn)染效率的比較好培養(yǎng)溫度。這種現(xiàn)象可能是因為37攝氏度是哺乳動物細胞的比較好培養(yǎng)溫度。同時，在轉(zhuǎn)染原代細胞時，化學轉(zhuǎn)染似乎不如病毒和物理轉(zhuǎn)染有吸引力，尤其是在人類原代干細胞中。當在相似條件下使用相同的轉(zhuǎn)染試劑進行轉(zhuǎn)染時，細胞系的來源(如人類與動物細胞系)也可能有助于不同程度的效率。在一項涉及轉(zhuǎn)染人類和大鼠平滑肌細胞的研究中，大多數(shù)轉(zhuǎn)染試劑在轉(zhuǎn)染大鼠平滑肌細胞(α-10SMCs)方面的效率高于轉(zhuǎn)染人主動脈平滑肌細胞(HASMCs)。

deae-葡聚糖是一種化學修飾的葡聚糖類似物。通過用二乙基氨基乙基修飾，右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質(zhì)子化，這使得它可以自組裝成帶負電荷核酸的納米顆粒。deae -葡聚糖是***個用于核酸轉(zhuǎn)染的陽離子聚合物。早在20世紀50年代，它就極大地增強了脊髓灰質(zhì)炎病毒和SV40病毒DNA在哺乳動物細胞中的轉(zhuǎn)染。隨后，deae -葡聚糖被廣泛應用于RNA或DNA的轉(zhuǎn)染。然而，由于以下原因，deae -葡聚糖并沒有作為比較好候選物:轉(zhuǎn)染效率遠低于脂質(zhì)體等其他試劑;deae -葡聚糖的細胞毒性和免疫原性不容忽視。小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染可用于評估轉(zhuǎn)染效率。

**近一項與抗血管生成基因傳遞高度相關的發(fā)現(xiàn)是，陽離子脂質(zhì)體（CLs）選擇性地靶向**的血管系統(tǒng)。陰離子或電中性脂質(zhì)體沒有發(fā)現(xiàn)這種作用。Campbell和他的同事[95]發(fā)現(xiàn)，與電中性脂質(zhì)體相比，使用CLs在**血管內(nèi)皮細胞(VECs)中積累更多，CLs通過添加5mol%聚乙二醇來穩(wěn)定。在兩種人類**類型(LS174T和MCAIV)和兩個位置(顱窗和背側(cè)皮膚褶腔)中發(fā)現(xiàn)了**VECs的選擇性遞送。**血管中囊泡的分布是不均勻的，這可能與該技術是否足以根除足夠數(shù)量的**VECs以實現(xiàn)**消退反應有關。有趣的是，注射后24小時，脂質(zhì)體上50%的摩爾電荷***增加了小鼠肺部的積聚。納米顆粒可以參與內(nèi)體途徑，并可以通過細胞質(zhì)將DNA運輸?shù)郊毎?。四川肺轉(zhuǎn)染試劑

納米顆粒，由于其在DNA轉(zhuǎn)運到細胞中的保護能力，在不久的將來可以用作轉(zhuǎn)基因的非病毒載體。廈門轉(zhuǎn)染試劑便宜

RNA和信使RNA與DNA轉(zhuǎn)染類似，RNA可以通過基于RNA的病毒或非病毒載體導入真核細胞。與涉及DNA的轉(zhuǎn)染相比，RNA轉(zhuǎn)染可能產(chǎn)生更高的轉(zhuǎn)染效率，因為后者不需要穿越核膜。在不需要基因組整合、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后處理的情況下，RNA轉(zhuǎn)染也可能加速所需蛋白質(zhì)的產(chǎn)生。使用基于信使RNA(mRNA)的載體也可以防止因整合到宿主基因組而引起的并發(fā)癥，從而允許表達特定的，所需的蛋白質(zhì)。然而，RNA轉(zhuǎn)染后，蛋白質(zhì)表達是短暫的，與DNA相比，RNA的穩(wěn)定性相對較差，因此在細胞內(nèi)運輸時更容易降解。小RNA是長度為18-200個堿基對(bp)的RNA分子，具有調(diào)控轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控和RNA修飾的能力。小RNA包括microRNAs(miRNAs)、小干擾RNA(siRNA)、短發(fā)夾RNA（shRNA）等。microRNAs和piRNAs都是內(nèi)源性單鏈小RNA。miRNAs(18-25bp)通過抑制目標mRNA或干擾其翻譯起始，參與下游mRNA的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。與miRNAs和piRNAs類似，siRNA也在調(diào)控轉(zhuǎn)錄后基因表達中發(fā)揮作用。siRNA的長度通常為20-24bp，可表達為內(nèi)源性或外源性雙鏈小RNA。shRNA是一種具有發(fā)夾環(huán)的內(nèi)源性雙鏈小RNA。shRNA可以結合mRNA上的互補序列來降解它。廈門轉(zhuǎn)染試劑便宜