重慶siRNA轉(zhuǎn)染試劑

Severinoetal.進(jìn)行的研究也指出了陽離子脂質(zhì)作為基因遞送納米載體的潛在毒性。他們成功實(shí)現(xiàn)了人動力蛋白的表達(dá)，但也證明了較高濃度的SLN仍然具有細(xì)胞毒性，并導(dǎo)致活細(xì)胞數(shù)量減少。另一組比較了DNA/DOTAP復(fù)合物和由魚精蛋白、DNA和脂質(zhì)層組成的納米顆粒在不同細(xì)胞系上的轉(zhuǎn)染效率:CHO(中國倉鼠卵巢細(xì)胞)、HEK293(人胚胎腎細(xì)胞)、NIH3T3(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)和A17(小鼠*細(xì)胞)。魚精蛋白/DNA/脂質(zhì)納米顆粒在每種細(xì)胞系中更有效地實(shí)現(xiàn)綠色和紅色熒光蛋白的表達(dá)，即使不同細(xì)胞系對轉(zhuǎn)染的敏感性不同。陽離子脂質(zhì)的毒性作用使我們必須尋找另一種能夠取代它們的化合物。不同的β-氨基酯聚合物作為納米載體，成功地將hESC(人類胚胎干細(xì)胞)的轉(zhuǎn)染效率提高了四倍，同時(shí)保持較低的細(xì)胞毒性。這給我們帶來了希望，納米顆粒能夠與具有所需官能團(tuán)的其他化合物的必要添加一起形成***有效的核酸遞送平臺。影響物理轉(zhuǎn)染或機(jī)械轉(zhuǎn)染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。重慶siRNA轉(zhuǎn)染試劑

在一項(xiàng)將質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染到HUVEC中的研究中，使用包括Effectene和FuGENE 6在內(nèi)的非脂質(zhì)體試劑比脂質(zhì)體試劑DOTAP(18%)產(chǎn)生了更好的轉(zhuǎn)染效率(34%和33%)。在另一項(xiàng)用質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染HUVEC的研究中，與Effectene和FuGENE 6或HD等非脂質(zhì)體試劑(48小時(shí)時(shí)均<20%)相比，脂質(zhì)體試劑顯示出更高的轉(zhuǎn)染效率(Lipofectamine LTX在48小時(shí)時(shí)約為38%，Lipofectamine 2000在48小時(shí)時(shí)約為23%)。在這些研究中，基于脂質(zhì)體和非脂質(zhì)體的試劑轉(zhuǎn)染HUVECs的效率無法得出結(jié)論，主要是由于所用試劑的范圍存在差異。然而，一致的觀察結(jié)果表明轉(zhuǎn)染效率仍然存在無論使用何種試劑，低于40%無疑暗示原代細(xì)胞是一種難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型。河北小動物轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染試劑的凍融被認(rèn)為是另一個(gè)可能影響轉(zhuǎn)染效率的潛在因素。

納米顆粒的主要特性使它們能夠用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染，但似乎找到一種既能改善基因表達(dá)又不影響細(xì)胞、不對細(xì)胞造成損害的比較好技術(shù)也至關(guān)重要。納米顆粒參與內(nèi)皮運(yùn)輸?shù)哪芰κ蛊淠軌蚓脑O(shè)計(jì)**精確的方法，將基因結(jié)構(gòu)靶向到特定的作用位置。來自不同化合物和元素的納米顆粒的作用方式與轉(zhuǎn)染的非病毒載體相同，這使它們能夠通過內(nèi)吞作用將DNA運(yùn)輸過細(xì)胞膜。DNA被包裹起來，很容易從核內(nèi)體中釋放出來，也被核酸酶保護(hù)著不被消化。由于有許多不同種類的納米顆粒，找到**適合轉(zhuǎn)染哺乳動物細(xì)胞的納米顆粒是至關(guān)重要的。將納米顆粒與其他化合物連接成多功能、復(fù)雜的運(yùn)輸單元，可以提高穿越細(xì)胞膜和細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸?shù)男?。將蛋白質(zhì)或多肽結(jié)合到納米顆粒上，根據(jù)細(xì)胞類型的不同，轉(zhuǎn)染效率提高了5到10倍。

在腺病毒載體或脂質(zhì)體的全身遞送后，轉(zhuǎn)基因表達(dá)相對短暫。靜脈注射脂叢的肺表達(dá)比給藥后第1天和第2天觀察到的比較大表達(dá)量每周減少約1log。造成這種現(xiàn)象的機(jī)制可能有以下幾種:(a)產(chǎn)生針對外源基因產(chǎn)物的新***抗體，(b)細(xì)胞因子介導(dǎo)的啟動子關(guān)閉，(c)通過凋亡、先天或適應(yīng)性免疫反應(yīng)根除表達(dá)細(xì)胞以及（d）表達(dá)基因的細(xì)胞因細(xì)胞凋亡而減少是導(dǎo)致表達(dá)減少。這些機(jī)制具有重要意義，因?yàn)椴豢赡苤貜?fù)給藥，而且轉(zhuǎn)基因凈表達(dá)會隨著時(shí)間的推移而減少。盡管通過中和或消除細(xì)胞因子的產(chǎn)生可以提高肺中的基因表達(dá)水平。靜脈給藥引起的毒性可能是由于小鼠轉(zhuǎn)氨酶水平的增加，在相同劑量下，小鼠肝臟出現(xiàn)組織病理學(xué)病變，但肺部沒有不良反應(yīng)。這種增加可以通過使用較少的細(xì)胞毒性陽離子脂質(zhì)體（CLs）來控制。轉(zhuǎn)氨酶的釋放歸因于未甲基化的堿基，如pDNA序列中的胞嘧啶和鳥嘌呤。用二乙基氨基乙基修飾，右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質(zhì)子化，這使得它可以自組裝成帶負(fù)電荷核酸的納米顆粒。

陽離子脂質(zhì)體合成中常用的分子是中性脂質(zhì)二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。DOPE的作用是促進(jìn)膜融合，并有助于質(zhì)膜或核內(nèi)體的不穩(wěn)定。此外，由于陽離子脂質(zhì)相互排斥，因此需要DOPE等輔助脂質(zhì)來穩(wěn)定陽離子脂質(zhì)體（CLs）懸浮液，并抵消其他載體如聚乙烯亞胺(PEI)和樹狀大分子中存在的陰離子糖胺聚糖的抗轉(zhuǎn)染作用。沒有中性脂質(zhì)的脂質(zhì)體具有較低的轉(zhuǎn)染率，盡管情況并非總是如此。不同的轉(zhuǎn)染率可能是由用于配制脂質(zhì)體的陽離子:中性脂質(zhì)的不同比例引起的。如上所述，CLs介導(dǎo)的核酸轉(zhuǎn)移的成功取決于許多因素，這些因素可能解釋了脂質(zhì)體(脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染)的內(nèi)在變異性，特別是在體內(nèi)。隨著寡核苷酸生物合成產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，不同類型的修飾寡核苷酸也被引入市場，以提高小RNA寡核苷酸轉(zhuǎn)染的效率。siRNA轉(zhuǎn)染試劑便宜

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轉(zhuǎn)染是將外來核酸傳遞到真核細(xì)胞中以修飾宿主細(xì)胞的遺傳組成的過程。在過去的30年里，轉(zhuǎn)染因其廣泛應(yīng)用于研究疾病的細(xì)胞過程和分子機(jī)制而越來越受歡迎。了解疾病的分子途徑，可以發(fā)現(xiàn)可能用于疾病診斷和預(yù)后的特定生物標(biāo)志物。此外，轉(zhuǎn)染可以作為基因***中的策略之一，用于***無法***的遺傳性遺傳病。***，生命科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步允許將不同類型的核酸轉(zhuǎn)染到哺乳動物細(xì)胞中，這些核酸包括脫氧核糖核酸(DNA)，核糖核酸(RNA)以及小的非編碼RNA，如siRNA,shRNA和miRNA。通常轉(zhuǎn)染可分為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染兩種類型。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指通過將外源DNA整合到宿主核基因組中，或在宿主核中作為染色體外元件維持一個(gè)外源載體來維持轉(zhuǎn)基因的長期表達(dá)。該轉(zhuǎn)基因可然后通過細(xì)胞的復(fù)制進(jìn)行本構(gòu)性表達(dá)。相比之下，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染不需要將核酸整合到宿主細(xì)胞基因組中。核酸可以以質(zhì)粒的形式或寡核苷酸的形式轉(zhuǎn)染。因此，隨著宿主細(xì)胞的復(fù)制，轉(zhuǎn)基因表達(dá)**終會丟失。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染通常用于短期研究，以研究特定基因敲入/敲入的影響。相比之下，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染在需要大規(guī)模蛋白質(zhì)生產(chǎn)的長期遺傳和藥理學(xué)研究中很有用。重慶siRNA轉(zhuǎn)染試劑