CCK8檢測細胞增殖和毒性實驗佰歐晶生物專注于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)及藥學(xué)科研咨詢和技術(shù)服務(wù)，致力于疾病關(guān)鍵基因功能研究，中藥功能及機理研究，納米靶向***研究，**研究整體方案服務(wù)。CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。該方法已被***用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗*****篩選以及藥敏試驗等。天津cck8孵育時間
培養(yǎng)基對CCK8測定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會與CCK8發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生實驗誤差，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會增加空白吸收，但不影響測定，扣除空白吸收即可，可見空白孔非常重要，所以每次實驗均要設(shè)定空白對照。另外，血清不影響測定，所以我用CCK-8來測定病毒對細胞活性的影響或者某個***對病毒復(fù)制的影響時，我都小心翼翼的測很多個時間點，說實話，效果不是很好。所以我比較喜歡中性紅。湖北dojindo cck8說明書在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5% CO2）.
。一般情況下，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測定孔用。在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗時，還應(yīng)考慮***的吸收，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度作為空白對照。金屬對CCK-8顯色有影響：當終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會***5%、15%、90%的顯色反應(yīng)，使靈敏度降級。如果終濃度是10 mM的話，將會*****。懸浮細胞由于染色比較困難，一般需要增加細胞數(shù)量和延長培養(yǎng)時間。
7、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。注意：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉***影響。當然***影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可?；盍τ嬎悖罕４鏃l件：4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存兩年有效。cck8試劑盒原理是什么a?
實驗材料及試劑96孔板、CO2培養(yǎng)箱、酒精燈、移液***、酶標儀等；細胞、CCK8等。實驗內(nèi)容取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期細胞，每孔按4×103個接種至96孔板中，每組設(shè)置8個復(fù)孔，置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細胞貼壁后轉(zhuǎn)染相應(yīng)質(zhì)粒后。繼續(xù)培養(yǎng)48h后，棄含藥培養(yǎng)基，每孔加入新鮮配制的含10ｕL的毒性檢測液CCK8，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h后，用酶標儀測波長為450nm的OD值。實驗重復(fù)3次，取實驗結(jié)果的平均值作為**終實驗結(jié)果。按公式計算生長***率＝[(對照組OD－實驗組OD)/對照組OD]×**，以分組為橫坐標，生長***率為縱坐標，繪制細胞生長科研狗**值錢的就是時間,不能再被CCK8“拖累”了.江蘇cck8換液
水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細胞.天津cck8孵育時間
酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾，可以通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
· CCK8可以檢測大腸桿菌，但不能檢測酵母細胞。在細胞增殖實驗每次測定的過程中需要避免細菌污染，以免影響結(jié)果。
· CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個月，在-20℃下避光可以保存1年。
· 當在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時，培養(yǎng)板**外一圈的孔**容易干燥揮發(fā)，由于體積不準確而增加誤差。一般情況下，**外一圈的孔加培養(yǎng)基或者PBS，不作為測定孔用。
· 在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗時，還應(yīng)考慮***的吸收，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度作為空白對照。 天津cck8孵育時間