羅氏轉染試劑推薦

來源: 發(fā)布時間:2023-04-26

.在多種不同類型細胞中基因敲除效率超過90%。高靈活應用,同一試劑可用于siRNA和質粒共轉染的基因沉默實驗。細胞毒性低,結果相關性好,確保所觀察到的細胞效應是由轉染的siRNA而非轉染過程本身介導。兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基,轉染前后均無需換液(如無血清培養(yǎng)基)。X-tremeGENEsiRNATransfectionReagent用于4種細胞系的HPRT基因沉默實驗。根據(jù)各試劑說明書建議的操作流程,或標準實驗方法,將100nMHPRT特異性siRNA轉染至4種細胞,通過LightCycler®h-HPRTHousekeepingGeneSet的熒光定量法評估基因沉默效率。結果顯示用羅氏這款試劑在四種細胞中轉染后基因沉默表現(xiàn)均表現(xiàn)優(yōu)異。隨后分離血清并檢測FVII蛋白的水平(Biophen 顯色檢測)。羅氏轉染試劑推薦

胞因素用低代數(shù)的細胞293T細胞非常重要??!當然也要保證細胞狀態(tài)特別好,沒有細微污染,鋪板均勻。飽滿狀態(tài)好的細胞才可以產生較高滴度的***哦!載體系統(tǒng)在實驗中**常見的慢***載體系統(tǒng)有三質粒系統(tǒng)、四質粒系統(tǒng),當然使用三質粒系統(tǒng)的小伙伴居多,一定要選擇成熟商業(yè)化的載體系統(tǒng)!載體構建和質粒抽提純化我們要注意是否構建時導致質粒載體重組或某個部件缺失,或污染別的質粒、雜物?中抽純化是否污染?要養(yǎng)成同時做陰性對照的習慣:建議目的基因載體和陰性對照GFP載體是同一批,且建議每次包裝都如此操作,要保證目的基因的表達載體構建純化良好,質粒間比例得當,并且對質粒進行酶切驗證。羅氏轉染試劑推薦正確的了解您希望輸送的運載物是選擇可靠轉染產品的第一步。

對HepG2細胞轉染效率的比較右圖:使用以上轉染試劑將GFP的cDNA(pEGFP-N3)按照生產商的提供的轉染步驟轉染到HepG2細胞(在膠原預處理的培養(yǎng)皿中培養(yǎng))。在轉染48小時之后,用流式細胞儀檢測GFP陽性細胞(%)和熒光強度。左圖:血清和***存在的條件下能提高LipoD293試劑(升級版)對在HepG2細胞的轉染效率。通過三種不同的條件下轉染HepG2細胞(生長在膠原處理的培養(yǎng)皿上)---無血清和***,10%血清和***的存在,轉染5小時后換液和不換液。

用LipoFectMax?轉染Hela細胞,左圖轉染GFPcDNA,右圖共轉染GFPCDNA和GFP靶向siRNA。轉染siRNA后可以從右圖明顯看到基因沉默。4適用于神經細胞的轉染圖4.用LipoFectMax?和LipoFectamine®2000分別對小鼠神經元細胞進行轉染綠色熒光白蛋白(GFP),轉染24小時后觀察轉染效果,LipoFectMax?轉染效率(左圖)比LipoFectamine®2000(右圖)高5倍。LipoFectMax?轉染試劑轉染試劑操作流程細胞毒性低圖2.LipoFectMax?,LipoFectamine®2000及LipoFectamine®3000分別對A549細胞進行轉染操作,通過計算轉染后的細胞存活率比較細胞毒性.細胞轉染必備——高效低毒轉染試劑.

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確定希望輸送的運載物(如DNA、RNA或蛋白質)根據(jù)不同實驗類型,我們可能需要將不同的運載物輸送到細胞內部,包括**常見的DNA,用于基因編輯的siRNA,能夠更快表達蛋白的mRNA,CRISPR-Cas9甚至是體內轉染。正確的了解您希望輸送的運載物是選擇可靠轉染產品的第一步。2希望轉染的細胞類型轉染的細胞類型可簡單分為兩大類,連續(xù)細胞系和原代細胞。連續(xù)細胞系具有無限增殖的潛能,通常要比原代或有限細胞更易處理。但由于此類細胞經歷過基因改變而變得具有無限增殖能力,它們在培養(yǎng)過程中的表現(xiàn)可能無法必然地反映體內狀態(tài)。羅氏轉染試劑推薦

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