昆蟲細胞轉染試劑配方

來源: 發(fā)布時間:2023-04-06

簡介:X-tremeGENEHPDNA轉染試劑是一種高效的無動物源成分的低毒轉染試劑,兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基,可用于轉染各類真核細胞(包括昆蟲細胞)以及多種難轉染細胞系。優(yōu)勢:1.簡單易用的多組分混合試劑,無動物源性成分,室溫穩(wěn)定。2.高轉染效率,對于原代細胞和使用其它試劑難轉染的**細胞系有高轉染效率。3.使用細胞毒性低的試劑,結果相關性好。圖2.X-tremeGENEHP高效低毒的轉染性能。通過X-tremeGENEHP和脂質體轉染方法將GFP表達質粒轉染至CHO-K1。A和C圖的熒光視野顯示了實驗后兩種方法均獲得了成功轉染的細胞。但B和D圖的明亮視野表明脂質體轉染方法的細胞毒性遠高于X-tremeGENEHP,導致存活細胞量減少(圖片來源于網(wǎng)絡)。轉染的細胞類型可簡單分為兩大類,連續(xù)細胞系和原代細胞.昆蟲細胞轉染試劑配方

用LipoD293?體外DNA轉染試劑(Ver.II)(上圖)和受歡迎的品牌產品Invitrogen公司的293fectin?(下圖)轉染pEGFP-C1質粒到HEK293細胞中。轉染24小時后,細胞的尼康Eclipse熒光顯微鏡DIC成像圖(左側)和熒光成像圖(右側)。對懸浮HEK293F產生蛋白質效率的比較/30毫升的293F細胞分別使用LipoD293?試劑、293fectin、Xfect和Fugene6等轉染試劑按照生產商的標準轉染步驟將pEGFP-6xHis質粒導入細胞表達,用量為LipoD293?試劑,20微克,所有其他三種轉染試劑均使用30微克質粒DNA。上海非脂質體轉染試劑配制siRNA脫靶效應會導致細胞死亡,并引起分析問題。

.在多種不同類型細胞中基因敲除效率超過90%。高靈活應用,同一試劑可用于siRNA和質粒共轉染的基因沉默實驗。細胞毒性低,結果相關性好,確保所觀察到的細胞效應是由轉染的siRNA而非轉染過程本身介導。兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基,轉染前后均無需換液(如無血清培養(yǎng)基)。X-tremeGENEsiRNATransfectionReagent用于4種細胞系的HPRT基因沉默實驗。根據(jù)各試劑說明書建議的操作流程,或標準實驗方法,將100nMHPRT特異性siRNA轉染至4種細胞,通過LightCycler®h-HPRTHousekeepingGeneSet的熒光定量法評估基因沉默效率。結果顯示用羅氏這款試劑在四種細胞中轉染后基因沉默表現(xiàn)均表現(xiàn)優(yōu)異。

原代細胞直接分離自組織并在適當條件下增殖,因此,它們的形態(tài)學和生理特征和體內狀態(tài)更為相似。但相對于連續(xù)細胞系,它們通常更難培養(yǎng)和轉染。在經過***次傳代培養(yǎng)之后,原代培養(yǎng)物變成了一種細胞系。源自于原代培養(yǎng)物的細胞系具有有限的壽命(即它們是有限細胞系),且隨著傳代的進行,具有比較高的生長能力的細胞逐漸占據(jù)支配地位,從而造成了細胞群內的基因型和表型接近一致的情形。相對來說,這一類細胞要比原代細胞使用起來更為方便,尤其是穩(wěn)定轉染的克隆傳代。給你選擇CycloFect轉染試劑的五大理由!

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質粒細胞轉染步驟是什么?昆蟲細胞轉染試劑配方

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