（一）細胞凍存配制含10%DMSO或甘油的細胞凍存液，4℃預冷（新鮮配制的凍存液會產生大量的熱）；取對數(shù)生長期的細胞，用細胞消化酶將單層生長的細胞消化下來；懸浮細胞則直接將細胞收集到離心管中；離心1200rpm，6min；去除上清液，逐漸加入適量預冷的細胞凍存液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數(shù)，調節(jié)凍存液中的細胞終濃度為510e6/ml~110e7/ml；將細胞分裝入凍存管中，每管1~1.5ml；在凍存管上標明細胞的名稱、凍存時間及操作人員姓名；凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/min；到達-80℃時，則可迅速放入液氮中。細胞凍存為什么要慢凍?上海無血清細胞凍存液配方
細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以比較大限度的保存細胞活力。如今細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。理論上儲存時間是無限的。上海無血清細胞凍存液配方無血清快速細胞凍存液，是一種新型開發(fā)的快速凍存細胞的保護液.
凍存/解凍標準流程TBD598、TBD698可以按照下列步驟操作，TBD798需要先使用自體血漿配制然后凍存。建議凍存細胞密度為1106-107個/ml一.凍存1.在室溫以300xg離心5分鐘。2.輕輕吸走上清液，注意不要擾動細胞團。3.用血清學吸管以1mL的細胞凍存液重懸細胞，打散細胞團時。4.用2mL的血清學吸管將1mL的細胞轉移到標記好的凍存管中。5.用以下方法凍存細胞:推薦使用緩速降溫方法，每分鐘降低1度，隨后可以在-196C液氮長期保存。不推薦在-80C長期保存。逐步降溫法：-20C保存2個小時，然后-80C中保存2個小時，隨后可以在-196C液氮中長期保存。
細胞冷存液***頭輕柔吹打混勻,Z成細胞懸液。4.將離心管中的細胞懸液分裝與細胞凍存管中，每管1mL或1.5mL。5.將分裝好的細胞直接凍存于-80℃冰箱中，可穩(wěn)定凍存數(shù)年。6.如若長期保存，可在次日轉移至液氮中。操作步驟:細胞復蘇：1.從-80℃冰箱或液氮中取出凍存細胞，立即放入37℃水浴槽中快速解凍。2.待凍存管中細胞懸液完全融化后，立即1000rmp離心5分鐘，完全除去上清。3.加入1mL細胞培養(yǎng)基于凍存管中，***頭輕柔吹打懸浮細胞，并轉移細胞于細胞培養(yǎng)皿或者培養(yǎng)瓶中。減少細胞內冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。
3、步驟：（1）冷凍前24-48小時更換半量或全量培養(yǎng)基，使細胞處于指數(shù)生長期。（2）配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養(yǎng)基、血清，逐滴加入二甲基亞砜（DMSO）至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。（3）離心收集培養(yǎng)之細胞，用加血清的培養(yǎng)基重懸起細胞，取少量細胞懸浮液(約0.1ml)計數(shù)細胞濃度及凍前存活率。（4）取與細胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細胞懸液，并晃動試管，制成細胞凍存懸液（DMSO***濃度為5～10％），使細胞濃度為1～5×106cells/ml，混合均勻，分裝于已標示完全之冷凍保存管中，1～2ml/vial，并取少量細胞懸浮液作污染檢測。嚴密封口后，注明細胞名稱、代數(shù)、日期。然后進行凍存。通用型細胞凍存液配方是多少？無血清細胞凍存液怎么樣
細胞凍存液品牌有哪些?上海無血清細胞凍存液配方
紅細胞裂解液產品說明：紅細胞裂解液，為10X紅細胞裂解液，經過優(yōu)化配方，用于從人或鼠等的血液或標本中裂解并去除無細胞核紅細胞的溶液。此溶液中主要有效成分為氯化銨。使在裂解紅細胞的同時幾乎不損傷淋巴細胞或其它有細胞核的細胞。本裂解液經過無菌過濾，處理過的血液或細胞樣品可以用于后續(xù)的原代培養(yǎng)、細胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測。注意事項：對于微量或少量的血液樣品，可以在一步中不進行離心棄上清的操作，直接在第二步中加入10倍血液體積的紅細胞裂解液，并在冰上裂解4-5分鐘。對于鼠的血液，裂解4-5分鐘已經足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至10分鐘，但通常不宜超過15分鐘，并且裂解過程中宜適當偶爾搖動以促進紅細胞裂解。后續(xù)步驟相同。上海無血清細胞凍存液配方
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