用LipoD293?體外DNA轉(zhuǎn)染試劑(Ver.II)(上圖)和受歡迎的品牌產(chǎn)品Invitrogen公司的293fectin?(下圖)轉(zhuǎn)染pEGFP-C1質(zhì)粒到HEK293細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后,細(xì)胞的尼康Eclipse熒光顯微鏡DIC成像圖(左側(cè))和熒光成像圖(右側(cè))。對(duì)懸浮HEK293F產(chǎn)生蛋白質(zhì)效率的比較/30毫升的293F細(xì)胞分別使用LipoD293?試劑、293fectin、Xfect和Fugene6等轉(zhuǎn)染試劑按照生產(chǎn)商的標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)染步驟將pEGFP-6xHis質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞表達(dá),用量為LipoD293?試劑,20微克,所有其他三種轉(zhuǎn)染試劑均使用30微克質(zhì)粒DNA。正確的了解您希望輸送的運(yùn)載物是選擇可靠轉(zhuǎn)染產(chǎn)品的第一步。上海電轉(zhuǎn)染試劑配制
轉(zhuǎn)染48小時(shí)后,使用尼康熒光顯微鏡GFP熒光進(jìn)行成像(左側(cè)四幅圖),A:LipoD293;B:293fectin;C:Xfect和D:Fugene6.帶有6xHis標(biāo)記的GFP熒光蛋白使用Ni-NTA親和柱技術(shù)實(shí)現(xiàn)分離。5微升洗脫液載入SDS-PAGE凝膠電泳分離并進(jìn)行Coomassie亮藍(lán)染色(右上圖E),道1為LipoD293293、道2為標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子、道3為Xfect、道4為293fectin和道5為Fugene6。這四種轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)生蛋白質(zhì)的效率被進(jìn)一步定量(見右下圖F)。產(chǎn)生慢***的比較通過LipoD293?試劑(升級(jí)版)和LipofectamineLTX(LTX)試劑將三個(gè)cDNAs共轉(zhuǎn)染進(jìn)293T細(xì)胞。一個(gè)GFP載體,pHR-SIN-cppt-CMVEWP被用來測(cè)定慢***的滴度。在24孔板中每孔加入1x10^5293T細(xì)胞,其次是分別添加不同量的慢定都上清液,1微升(上圖)和10微升(下圖)。懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑分裝轉(zhuǎn)染試劑--總有一款你想要的.
原代細(xì)胞直接分離自組織并在適當(dāng)條件下增殖。因此,它們的形態(tài)學(xué)和生理特征和體內(nèi)狀態(tài)更為相似。但相對(duì)于連續(xù)細(xì)胞系,它們通常更難培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染。在經(jīng)過***次傳代培養(yǎng)之后,原代培養(yǎng)物變成了一種細(xì)胞系。源自于原代培養(yǎng)物的細(xì)胞系具有有限的壽命(即它們是有限細(xì)胞系),且隨著傳代的進(jìn)行,具有比較高的生長能力的細(xì)胞逐漸占據(jù)支配地位,從而造成了細(xì)胞群內(nèi)的基因型和表型接近一致的情形。相對(duì)來說,這一類細(xì)胞要比原代細(xì)胞使用起來更為方便,尤其是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的克隆傳代。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程:X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑簡介:X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑是脂質(zhì)和其它成分混合而得的一類多組份試劑,溶于80%乙醇中,經(jīng)0.2μm濾膜過濾,然后封裝于玻璃小瓶中,適用于細(xì)胞分析的多種實(shí)驗(yàn)。優(yōu)勢(shì):1.具有細(xì)胞毒性極低、轉(zhuǎn)染后細(xì)胞存活率高,生成可信任的生理學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù)。2.操作簡便、節(jié)省時(shí)間,只需對(duì)X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行簡單稀釋,再與質(zhì)粒DNA共同孵育,即可直接向細(xì)胞添加反應(yīng)混合物(有無血清均可)。3.對(duì)于常用細(xì)胞無需進(jìn)行費(fèi)時(shí)費(fèi)力的優(yōu)化工作。采用siRNA轉(zhuǎn)染試劑可以將siRNA輕松導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)。
簡介:X-tremeGENEHPDNA轉(zhuǎn)染試劑是一種高效的無動(dòng)物源成分的低毒轉(zhuǎn)染試劑,兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基,可用于轉(zhuǎn)染各類真核細(xì)胞(包括昆蟲細(xì)胞)以及多種難轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。優(yōu)勢(shì):1.簡單易用的多組分混合試劑,無動(dòng)物源性成分,室溫穩(wěn)定。2.高轉(zhuǎn)染效率,對(duì)于原代細(xì)胞和使用其它試劑難轉(zhuǎn)染的**細(xì)胞系有高轉(zhuǎn)染效率。3.使用細(xì)胞毒性低的試劑,結(jié)果相關(guān)性好.圖2.X-tremeGENEHP高效低毒的轉(zhuǎn)染性能。通過X-tremeGENEHP和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將GFP表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至CHO-K1。A和C圖的熒光視野顯示了實(shí)驗(yàn)后兩種方法均獲得了成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。但B和D圖的明亮視野表明脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法的細(xì)胞毒性遠(yuǎn)高于X-tremeGENEHP,導(dǎo)致存活細(xì)胞量減少(圖片來源于網(wǎng)絡(luò)).將20μL轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入孔中的細(xì)胞懸液中,前后移動(dòng)培養(yǎng)皿,混合均勻;動(dòng)物轉(zhuǎn)染試劑供應(yīng)商
3.0試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染的每個(gè)個(gè)體間所檢測(cè)的生物標(biāo)志物的水平與未注射該試劑的個(gè)體相比并沒有***差異。上海電轉(zhuǎn)染試劑配制
在多種不同類型細(xì)胞中基因敲除效率超過90%。2.高靈活應(yīng)用,同一試劑可用于siRNA和質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的基因沉默實(shí)驗(yàn)。3.細(xì)胞毒性低,結(jié)果相關(guān)性好,確保所觀察到的細(xì)胞效應(yīng)是由轉(zhuǎn)染的siRNA而非轉(zhuǎn)染過程本身介導(dǎo)。4.兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基,轉(zhuǎn)染前后均無需換液(如無血清培養(yǎng)基)。圖4.X-tremeGENEsiRNATransfectionReagent用于4種細(xì)胞系的HPRT基因沉默實(shí)驗(yàn)。根據(jù)各試劑說明書建議的操作流程,或標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方法,將100nMHPRT特異性siRNA轉(zhuǎn)染至4種細(xì)胞。通過LightCycler®h-HPRTHousekeepingGeneSet的熒光定量法評(píng)估基因沉默效率。結(jié)果顯示用羅氏這款試劑在四種細(xì)胞中轉(zhuǎn)染后基因沉默表現(xiàn)均表現(xiàn)優(yōu)異。上海電轉(zhuǎn)染試劑配制
上海儒安生物科技有限公司依托可靠的品質(zhì),旗下品牌上海儒安生物以高質(zhì)量的服務(wù)獲得廣大受眾的青睞。是具有一定實(shí)力的醫(yī)藥健康企業(yè)之一,主要提供細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑,ecl發(fā)光液,cck8細(xì)胞增殖,內(nèi)參抗體等領(lǐng)域內(nèi)的產(chǎn)品或服務(wù)。我們?cè)诎l(fā)展業(yè)務(wù)的同時(shí),進(jìn)一步推動(dòng)了品牌價(jià)值完善。隨著業(yè)務(wù)能力的增長,以及品牌價(jià)值的提升,也逐漸形成醫(yī)藥健康綜合一體化能力。上海儒安生物科技有限公司業(yè)務(wù)范圍涉及從事生物技術(shù)、物聯(lián)網(wǎng)技術(shù)、網(wǎng)絡(luò)技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)轉(zhuǎn)讓、技術(shù)服務(wù),軟件開發(fā),電子商務(wù)(不得從事增值電信、金融業(yè)務(wù)),化工產(chǎn)品及原料(除危險(xiǎn)化學(xué)品、監(jiān)控化學(xué)品、民用物品、易制毒化學(xué)品)、實(shí)驗(yàn)窒設(shè)備的銷售。等多個(gè)環(huán)節(jié),在國內(nèi)醫(yī)藥健康行業(yè)擁有綜合優(yōu)勢(shì)。在細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑,ecl發(fā)光液,cck8細(xì)胞增殖,內(nèi)參抗體等領(lǐng)域完成了眾多可靠項(xiàng)目。