冷凍保護(hù)劑甘油或二甲基亞砜（DMSO）分子量小、溶解度大、細(xì)胞膜通透性好，可以使冰點(diǎn)下降，提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，且對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性。DMSO能夠快速穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，降低冰點(diǎn)、延緩凍存過(guò)程，同時(shí)提高細(xì)胞膜通透性，提高細(xì)胞內(nèi)離子濃度，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少細(xì)胞損傷達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。諾為生物所提供的STEMCELLTechnologiescGMP級(jí)別、無(wú)血清的細(xì)胞凍存液可使長(zhǎng)期儲(chǔ)存的細(xì)胞保持高存活率，可應(yīng)用于臨床細(xì)胞和特殊珍貴細(xì)胞的凍存。無(wú)血清細(xì)胞凍存液說(shuō)明書.即用型細(xì)胞凍存液比例
（一）細(xì)胞凍存配制含10%DMSO或甘油的細(xì)胞凍存液，4℃預(yù)冷（新鮮配制的凍存液會(huì)產(chǎn)生大量的熱）；取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，用細(xì)胞消化酶將單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來(lái)；懸浮細(xì)胞則直接將細(xì)胞收集到離心管中；離心1200rpm，6min；去除上清液，逐漸加入適量預(yù)冷的細(xì)胞凍存液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中的細(xì)胞終濃度為510e6/ml~110e7/ml；將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1~1.5ml；在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱、凍存時(shí)間及操作人員姓名；凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/min；到達(dá)-80℃時(shí)，則可迅速放入液氮中。江蘇足細(xì)胞凍存液配制無(wú)血清快速細(xì)胞凍存液，不含動(dòng)物來(lái)源的血清成分，能夠有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力.
細(xì)胞凍存的操作步驟是什么配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來(lái)；離心1000rpm，5min；去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的**終密度為5×106/ml～1×107/ml；將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1～1.5ml；在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時(shí)間及操作者；凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2℃/min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí)，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時(shí)，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過(guò)夜
凍存細(xì)胞類型：臍血及臍帶組織、外周血、間充質(zhì)干細(xì)胞、多能干細(xì)胞、組織樣本等① 用于減輕冷凍和解凍復(fù)蘇期間由溫度引起的分子應(yīng)激反應(yīng)② 分別以2%、5%或10%USP級(jí)的二甲基亞砜（DMSO）預(yù)先配制即用型細(xì)胞凍存液凍存細(xì)胞類型：臍血及臍帶組織、外周血和骨髓① BloodStor®55-5以55%（重量/體積）的DMSO（USP）級(jí)、5%（重量/體積）的葡萄糖-40（USP）級(jí)和注射液（WFI）級(jí)別的水預(yù)先配制② BloodStor®100含有**（重量/體積）的DMSO（USP級(jí)）既適用于一般培養(yǎng)細(xì)胞的凍存，也適用于無(wú)血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞的凍存。
細(xì)胞冷存液***頭輕柔吹打混勻,Z成細(xì)胞懸液。4.將離心管中的細(xì)胞懸液分裝與細(xì)胞凍存管中，每管1mL或1.5mL。5.將分裝好的細(xì)胞直接凍存于-80℃冰箱中，可穩(wěn)定凍存數(shù)年。6.如若長(zhǎng)期保存，可在次日轉(zhuǎn)移至液氮中。操作步驟:細(xì)胞復(fù)蘇：1.從-80℃冰箱或液氮中取出凍存細(xì)胞，立即放入37℃水浴槽中快速解凍。2.待凍存管中細(xì)胞懸液完全融化后，立即1000rmp離心5分鐘，完全除去上清。3.加入1mL細(xì)胞培養(yǎng)基于凍存管中，***頭輕柔吹打懸浮細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移細(xì)胞于細(xì)胞培養(yǎng)皿或者培養(yǎng)瓶中。細(xì)胞凍存液一般有兩種配置方法是什么?bi細(xì)胞凍存液怎么樣
細(xì)胞凍存為什么要慢凍?即用型細(xì)胞凍存液比例
凍存的溫度將細(xì)胞存儲(chǔ)在一個(gè)非常低的溫度下，按理論上推斷是能讓細(xì)胞獲得極長(zhǎng)（接近無(wú)限）的壽命，然而實(shí)際上細(xì)胞這樣的凍存有效壽命很難去證實(shí)，研究者們利用干制的種子進(jìn)行相關(guān)的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)樣品被放置在不同的溫度下的時(shí)候（甚至是溫的時(shí)候），這些樣品會(huì)發(fā)生明顯的變化性的惡化。當(dāng)溫度低于多元醇水溶液的玻璃轉(zhuǎn)化點(diǎn)（Tg）的時(shí)候，大約在-136°C左右，這被認(rèn)為是能夠**降低生物活性的溫度范圍；而當(dāng)溫度達(dá)到了-196°C（液氮的沸點(diǎn)即用型細(xì)胞凍存液比例
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