CCK8檢測細(xì)胞增殖和毒性實(shí)驗(yàn)佰歐晶生物專注于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)及藥學(xué)科研咨詢和技術(shù)服務(wù)，致力于疾病關(guān)鍵基因功能研究，中藥功能及機(jī)理研究，納米靶向***研究，**研究整體方案服務(wù)。CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑用于簡便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。接種時注意細(xì)胞懸液一定要混勻，以避免細(xì)胞沉淀下來，導(dǎo)致每孔中的細(xì)胞數(shù)量不一致。浙江cck8視頻
CKK-8原理
CellCountingKit，CCK-8試劑含有WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽），是近年新開發(fā)的一種更新的水溶性四唑鹽檢測，原理與WST-1類似：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan）。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比，用酶聯(lián)免疫分析儀測定其光吸收值可間接反映活細(xì)胞數(shù)量，在一定細(xì)胞數(shù)量范圍內(nèi)甲臜形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。
天津cck8標(biāo)準(zhǔn)曲線CCK8細(xì)胞增值檢測實(shí)驗(yàn)簡介.
CCK8的優(yōu)點(diǎn)：方法方便，不用洗滌細(xì)胞，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑；CCK-8快速檢測；CCK-8檢測靈敏度高，細(xì)胞密度低也可以檢測；CCK-8的重復(fù)性優(yōu)于MTT法；CCK-8對細(xì)胞的毒性很?。籆CK-8細(xì)胞活性檢測試劑中是1瓶溶液，不需要現(xiàn)用現(xiàn)配，即開即用。CCK8的缺點(diǎn)：相比于與MTT法，CCK8的價格比較昂貴生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。用途：***篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、**藥敏試驗(yàn)。
五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：·若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。·如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉***影響。當(dāng)然***影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可。·當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時，貼壁細(xì)胞的**小接種量至少為1,000個/孔(100μl培養(yǎng)基)。檢測白細(xì)胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500個/孔(100μl培養(yǎng)基)。**藥敏試驗(yàn)：這個是用的比較廣的，我見過做**的團(tuán)隊(duì)，買CCK-8都是一整箱，一整箱的買。
CCK8實(shí)驗(yàn)操作CCK8的優(yōu)勢在于對細(xì)胞沒有毒性，可以直接加入細(xì)胞中長時間孵育，而不用考慮試劑本身對細(xì)胞帶來的影響。1、向96孔板中每孔加入細(xì)胞100ul，置于培養(yǎng)箱中孵育24小時，96孔板的排版情況和上述MTT相同，在這里不重復(fù)介紹了。2、向各孔中加入10ul的CCK-8檢測溶液。如若檢測的細(xì)胞增殖或毒性試驗(yàn)，需在此之前加入作用***培養(yǎng)適當(dāng)時間，例如6h/12h/24h等，然后再加入CCK8檢測液。3、培養(yǎng)箱中孵育1～4小時，比較好反應(yīng)時間以細(xì)胞具體顯色程度為準(zhǔn)。CCK8試驗(yàn)的總體實(shí)驗(yàn)心得.北京cck8接種細(xì)胞密度
CCK8的實(shí)驗(yàn)步驟、實(shí)驗(yàn)分組及檢測方法.浙江cck8視頻
酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾；◆細(xì)胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后，可以在不同時間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到比較好測定時間。實(shí)驗(yàn)二：細(xì)胞增殖-毒性檢測1、在96孔板中配置100μL的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時（37℃，5%CO2）。2、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測物質(zhì)。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間（例如：6、12、24或48小時）。4、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。6、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。浙江cck8視頻