天津celltiter glo 與cck8

來源: 發(fā)布時間:2022-02-17

CCK-8盒子的選購還記得***次做CCK-8的實驗時研究生二年級的時候,當時用的***個盒子是Sigma的,當時的Sigma-Aldrich就是Sigma-Aldrich,還不是現(xiàn)在的Millipore-Sigma。那個盒子給了我莫大的鼓勵,因為在那之前做分子克隆一直都不是很順利。這個盒子是我的碩士老板從美國帶回來的,品質(zhì)有保證,***的結(jié)果也是很好的。后面在做CCK-8的實驗時,我們在有選擇的情況下都會買sigma,下圖2是sigma官網(wǎng)的截圖。其實也不貴,只是到貨時間太慢。細胞毒性測定:這個可以和各個處理因素對細胞活性和增殖的影響,比如低氧或者什么化學物品對細胞的影響上。天津celltiter glo 與cck8

制作標準曲線1.先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量,然后接種細胞。2.按比例(例如:1/2比例)依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,一般要做3-5個細胞濃度梯度,每組3-6個復孔。3.接種后培養(yǎng)2-4小時使細胞貼壁,然后加CCK-8試劑培養(yǎng)一定時間后測定O.D值,制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標(X軸),O.D值為縱坐標(Y軸)的標準曲線。根據(jù)此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量(使用此標準曲線的前提條件是實驗的條件要一致,便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時間)。江蘇cck8 od值CCK8的實驗步驟、實驗分組及檢測方法.

特點不同1、CellCountingKit-8:靈敏度高,數(shù)據(jù)可靠,重現(xiàn)性好;操作簡便,省時省力;水溶性,不需要換液,尤其適合于懸浮細胞;無需放射性同位素和有機溶劑,對細胞毒性低;適合于高通量***篩選。2、MTT法:特點是靈敏度高、經(jīng)濟。三、應用不同1、CellCountingKit-8:主要用途為***篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、**藥敏試驗。2、MTT法:***用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗*****篩選、細胞毒性試驗以及**放射敏感性測定等。

讀數(shù)前可在搖床上溫柔混勻,酶標儀在 450nm 波長處檢測每孔的吸光度。

***率(%)= [(對照孔吸光度-實驗孔吸光度)/(對照孔吸光度-空白孔吸光度)]×100=IC50

注意事項

CCK8法檢測細胞生長情況基于的原理是脫氫酶催化的反應,如果實驗處理條件中存在還原劑的影響,應事先去除。如果實驗條件中存在還原物質(zhì),需單獨測定還原物質(zhì)的空白吸光度。如果還原物質(zhì)的吸光度很小,可以忽略不計;但如果吸光度很大,則需要去除培養(yǎng)基,再用培養(yǎng)基洗滌細胞3次,然后再加入新的 100ul培養(yǎng)基和10ul CCK-8 溶液進行檢測。 化學名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基).

實驗材料及試劑96孔板、CO2培養(yǎng)箱、酒精燈、移液***、酶標儀等;細胞、CCK8等。實驗內(nèi)容取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期細胞,每孔按4×103個接種至96孔板中,每組設(shè)置8個復孔,置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),待細胞貼壁后轉(zhuǎn)染相應質(zhì)粒后。繼續(xù)培養(yǎng)48h后,棄含藥培養(yǎng)基,每孔加入新鮮配制的含10uL的毒性檢測液CCK8,置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h后,用酶標儀測波長為450nm的OD值。實驗重復3次,取實驗結(jié)果的平均值作為**終實驗結(jié)果。按公式計算生長***率=[(對照組OD-實驗組OD)/對照組OD]×**,以分組為橫坐標,生長***率為縱坐標,繪制細胞生長cck8試劑盒價格是多少?天津cck8檢測原理

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、***濃度的確定需要做一個時間梯度,鋪板和上述相同,只需把各個實驗組改成各個作用時間就可以了。至于說***濃度的確定,網(wǎng)上有很多確認方法,個人建議以IC50值作為***濃度即可。計算方法,某園子里都有,就不在這里介紹了。

MTT作用之后,一定要小心吸走培養(yǎng)液,以免將孔內(nèi)的紫色結(jié)晶吸走。有條件的實驗室,這一步可以采用離心機將沉淀充分離心到孔底,防止被吸出。如果沒有這種類型的離心機,可以在測量吸光度的時候,將酶聯(lián)免疫的機器震蕩時間調(diào)制5分鐘,**起碼可以保證沉淀充分溶解。 天津celltiter glo 與cck8