細胞增殖-毒性檢測1.在96孔板中配制100ml的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)24小時(在37℃，5%CO2的條件下)。2.向培養(yǎng)板加入10ml不同濃度的待測物質(zhì)。3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間(例如:6,12,24或48小時)。4.向每孔加入10mlCCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響O.D值的讀數(shù))。5.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。6.用酶標儀測定在450nm處的吸光度。7.如果暫時不測定O.D值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10ml0.1MHCl溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。注意：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基，去掉***的影響。當然***影響比較小的情況可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可。CCK8試驗的總體實驗心得.北京cck8試驗
CKK-8原理
CellCountingKit，CCK-8試劑含有WST-8（化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽），是近年新開發(fā)的一種更新的水溶性四唑鹽檢測，原理與WST-1類似：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan）。生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比，用酶聯(lián)免疫分析儀測定其光吸收值可間接反映活細胞數(shù)量，在一定細胞數(shù)量范圍內(nèi)甲臜形成的量與細胞數(shù)成正比。
上海cck8實驗目的代謝率低了以后，細胞呼吸減弱，NAD+產(chǎn)生減少，測出的Formazan也會減少。
酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾；◆細胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后，可以在不同時間反復用酶標儀讀數(shù)從而找到比較好測定時間。實驗二：細胞增殖-毒性檢測1、在96孔板中配置100μL的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)24小時（37℃，5%CO2）。2、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測物質(zhì)。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間（例如：6、12、24或48小時）。4、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。6、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。
7、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。注意：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉***影響。當然***影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可?；盍τ嬎悖罕４鏃l件：4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存兩年有效?？蒲泄?*值錢的就是時間,不能再被CCK8“拖累”了.
讀數(shù)前可在搖床上溫柔混勻，酶標儀在 450nm 波長處檢測每孔的吸光度。
***率（％）= [（對照孔吸光度-實驗孔吸光度）/（對照孔吸光度-空白孔吸光度）]×100=IC50
注意事項
CCK8法檢測細胞生長情況基于的原理是脫氫酶催化的反應，如果實驗處理條件中存在還原劑的影響，應事先去除。如果實驗條件中存在還原物質(zhì)，需單獨測定還原物質(zhì)的空白吸光度。如果還原物質(zhì)的吸光度很小，可以忽略不計；但如果吸光度很大，則需要去除培養(yǎng)基，再用培養(yǎng)基洗滌細胞3次，然后再加入新的 100ul培養(yǎng)基和10ul CCK-8 溶液進行檢測。 cck8試劑盒價格是多少?北京cck8試驗
CCK8的實驗步驟、實驗分組及檢測方法.北京cck8試驗
實驗材料及試劑
96 孔板、CO2培養(yǎng)箱、酒精燈、移液***、酶標儀等；細胞、CCK8等。
實驗內(nèi)容取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期細胞，每孔按 4×103個接種至 96 孔板中，每組設置8個復孔，置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細胞貼壁后轉(zhuǎn)染相應質(zhì)粒后。繼續(xù)培養(yǎng) 48h 后，棄含藥培養(yǎng)基，每孔加入新鮮配制的含 10ｕL的毒性檢測液CCK8，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 4h 后，用酶標儀測波長為450 nm的OD值。實驗重復 3 次， 取實驗結(jié)果的平均值作為**終實驗結(jié)果。按公式計算生長***率＝[(對照組 OD－實驗組 OD)/對照組 OD] ×**，以分組為橫坐標，生長***率為縱坐標，繪制細胞生長***率柱狀圖。 北京cck8試驗