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來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-01-24

酚紅和血清對(duì)CCK8法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾,可以通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去。

· CCK8可以檢測(cè)大腸桿菌,但不能檢測(cè)酵母細(xì)胞。在細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每次測(cè)定的過程中需要避免細(xì)菌污染,以免影響結(jié)果。

· CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個(gè)月,在-20℃下避光可以保存1年。

· 當(dāng)在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時(shí),培養(yǎng)板**外一圈的孔**容易干燥揮發(fā),由于體積不準(zhǔn)確而增加誤差。一般情況下,**外一圈的孔加培養(yǎng)基或者PBS,不作為測(cè)定孔用。

· 在培養(yǎng)基中加入CCK8,培養(yǎng)一定的時(shí)間,測(cè)定450 nm的吸光度即為空白對(duì)照。在做加藥實(shí)驗(yàn)時(shí),還應(yīng)考慮***的吸收,可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8,培養(yǎng)一定的時(shí)間,測(cè)定450 nm的吸光度作為空白對(duì)照。 那它的用途也就大致可以猜到,和細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性相關(guān)的實(shí)驗(yàn)都可以。湖北cck8 pw

CCK8檢測(cè)原理圖2操作步驟1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100μL/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)(37℃,5%CO2)。2、細(xì)胞處理(不同實(shí)驗(yàn)處理方式不同)。3、向每孔加入10μLCCK溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會(huì)影響OD值的讀數(shù))。4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。5、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。6、若暫時(shí)不測(cè)定OD值,可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定,吸光度不會(huì)發(fā)生變化。天津懸浮細(xì)胞 cck8cck8試劑盒原理是什么a?

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定,常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測(cè)。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),如果想證明一個(gè)***或者說是一個(gè)作用條件對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來證明作用效果。所以,***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng)。MTT實(shí)驗(yàn)操作1、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,設(shè)置對(duì)照組(細(xì)胞+無血清培養(yǎng)基)、實(shí)驗(yàn)組和空白組(無血清培養(yǎng)基),可以采用如下圖的排版方式:2、在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中,

細(xì)菌***對(duì)CCK8檢測(cè)的影響:我們做***的,經(jīng)常會(huì)做到細(xì)菌或***對(duì)細(xì)胞的影響。那這種情況下我們應(yīng)該怎么辦。其實(shí)細(xì)菌防御系統(tǒng)還是非常強(qiáng)大,單獨(dú)和CCK-8在一起孵育時(shí),不會(huì)發(fā)生還原反應(yīng),幾乎不會(huì)和細(xì)菌發(fā)生顯色反應(yīng)。而細(xì)菌不需要入胞繁殖,所以結(jié)果還是可信的。**討厭的就是***,我不知道有多少人是做***的。***是需要入胞繁殖的,而且需要借助細(xì)胞的東西來進(jìn)行繁殖。繁殖過程中就需要消耗宿主的能量,會(huì)產(chǎn)生氧化還原反應(yīng),所以我用CCK-8來測(cè)定***對(duì)細(xì)胞活性的影響或者某個(gè)***對(duì)***復(fù)制的影響時(shí),我都小心翼翼的測(cè)很多個(gè)時(shí)間點(diǎn),說實(shí)話,效果不是很好。所以我比較喜歡中性紅。在電子耦合試劑(也就是細(xì)胞是活的,有呼吸,有能量代謝).

在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育1-4小時(shí),對(duì)于大多數(shù)情況孵育2小時(shí)左右就可以了。6.用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度(使用酶標(biāo)儀之前要提前開啟10min預(yù)熱)測(cè)定完成后,保存數(shù)據(jù)。7.連續(xù)五天檢測(cè),每天保持一樣的時(shí)間點(diǎn)加入CCK-8溶液,在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育時(shí)間相同。注:若暫時(shí)不測(cè)定OD值,可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定,吸光度不會(huì)發(fā)生變化。如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話,可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的培養(yǎng)基),去掉***影響。當(dāng)然***影響比較小的情況下,可以不更換培養(yǎng)基,直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可。CCK-8試劑中含有WST–8.上海cck8淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)

MTT與CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)和注意事項(xiàng).湖北cck8 pw

氧化還原試劑對(duì)CCK8測(cè)定的影響:CCK8是一個(gè)氧化還原反應(yīng)實(shí)驗(yàn),在整個(gè)操作當(dāng)中,如果有氧化還原試劑都會(huì)影響**終的結(jié)果。當(dāng)有還原性物質(zhì)存在時(shí)會(huì)影響CCK8的測(cè)定,增加OD值。在有氧化性物質(zhì)存在時(shí)會(huì)***測(cè)定反應(yīng)的發(fā)生,減少OD值。在高中化學(xué)我們就知道金屬是氧化還原反應(yīng)中的重要參與者。各個(gè)公司都會(huì)告訴你:“終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會(huì)***5%、15%、90%的顯色反應(yīng),使靈敏度降低。如果終濃度是10mM的話,將會(huì)*****?!蔽?*開始看到這句話時(shí)很懵,因?yàn)椴恢涝诓僮髦性鯓訒?huì)遇到這種情況。下面就分享我能想到或者在操作中真實(shí)遇到的。湖北cck8 pw