北京組織芯片免疫組化原理

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2025-02-21

單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn):特異性高,只識(shí)別單一抗原表位,可減少非特異性結(jié)合;批間差異小,質(zhì)量穩(wěn)定;可大量生產(chǎn)。缺點(diǎn):可能會(huì)因?yàn)樽R(shí)別的表位被破壞而無(wú)法結(jié)合抗原;價(jià)格相對(duì)較高。多克隆抗體的優(yōu)點(diǎn):能識(shí)別多個(gè)抗原表位,對(duì)抗原微小變化不敏感;制備相對(duì)容易,成本較低;通常具有較高的親和力。缺點(diǎn):特異性相對(duì)較低,易出現(xiàn)非特異性結(jié)合;批間差異較大,質(zhì)量較難控制。在免疫組化實(shí)驗(yàn)中,需根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)要求選擇合適的抗體,若需要高特異性則單克隆抗體更合適,若對(duì)抗原識(shí)別要求不那么嚴(yán)格且考慮成本,多克隆抗體可能是一種選擇。皮膚疾病研究中,免疫組化可鑒別病變,如區(qū)分良性痣與惡性黑色素瘤,輔助診斷。北京組織芯片免疫組化原理

北京組織芯片免疫組化原理,免疫組化

免疫組織化學(xué)染色主要包括以下步驟。首先,準(zhǔn)備樣本,通常是將組織切片固定在載玻片上,以保持組織形態(tài)和抗原性。然后,進(jìn)行脫蠟和水化處理,使組織恢復(fù)到適合染色的狀態(tài)。接著,進(jìn)行抗原修復(fù),通過(guò)加熱或酶處理等方法,暴露被封閉的抗原決定簇。之后,加入一抗,一抗特異性地結(jié)合目標(biāo)抗原。經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)姆跤龝r(shí)間后,清洗掉未結(jié)合的一抗,再加入二抗,二抗能與一抗結(jié)合并帶有可檢測(cè)的標(biāo)記,如熒光素或酶。經(jīng)過(guò)再次孵育和清洗后,通過(guò)顯色反應(yīng)或熒光檢測(cè)來(lái)顯示抗原的位置。之后,對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行觀察和分析,評(píng)估抗原的表達(dá)情況。整個(gè)過(guò)程需要嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件,如溫度、時(shí)間和抗體濃度等,以確保染色結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。北京組織芯片免疫組化原理免疫組化可用于研究發(fā)育生物學(xué)中細(xì)胞分化和組織形成過(guò)程中相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。

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一、合適抗體的選擇:1.特異性:查看抗體說(shuō)明書(shū),確認(rèn)其針對(duì)的抗原表位是目標(biāo)抗原特有的,減少非特異性結(jié)合風(fēng)險(xiǎn)。參考已發(fā)表的相關(guān)研究,看該抗體在相似實(shí)驗(yàn)中的表現(xiàn)。2.親和力:高親和力的抗體能更牢固地結(jié)合抗原??刹殚啴a(chǎn)品評(píng)價(jià)或向供應(yīng)商詢問(wèn)相關(guān)信息。3.宿主種屬:要與檢測(cè)樣本的種屬相匹配,比如檢測(cè)人類樣本,就選擇針對(duì)人類抗原的抗體。二、濃度優(yōu)化:1.預(yù)實(shí)驗(yàn):先進(jìn)行小規(guī)模預(yù)實(shí)驗(yàn),設(shè)定幾個(gè)不同的抗體濃度,如推薦濃度的0.5倍、1倍和2倍等。2.結(jié)果觀察:觀察染色強(qiáng)度和背景染色的情況。如果染色強(qiáng)度較弱且無(wú)明顯背景,可提高濃度;若背景染色嚴(yán)重,降低濃度。3.再驗(yàn)證:確定優(yōu)化后的濃度后,再次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,確保結(jié)果的穩(wěn)定性和可重復(fù)性。

免疫組化7項(xiàng)檢查通常包含以下方面。一是檢測(cè)細(xì)胞角蛋白,它能區(qū)分上皮來(lái)源細(xì)胞與非上皮來(lái)源細(xì)胞。二是波形蛋白的檢查,對(duì)鑒別間葉組織來(lái)源的細(xì)胞有意義。三是檢測(cè)結(jié)蛋白,可用于判斷肌肉相關(guān)細(xì)胞的情況。四是S-100蛋白的檢測(cè),可用于神經(jīng)組織等方面的研究。五是檢查白細(xì)胞共同抗原,有助于對(duì)淋巴細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞的分析。六是檢測(cè)肌動(dòng)蛋白,可用于判斷細(xì)胞的收縮功能相關(guān)方面。七是檢查神經(jīng)絲蛋白,能對(duì)神經(jīng)細(xì)胞相關(guān)的情況進(jìn)行分析。這些項(xiàng)目從不同細(xì)胞成分、不同組織來(lái)源等角度進(jìn)行檢測(cè),通過(guò)對(duì)這些蛋白的標(biāo)記和分析,可以了解細(xì)胞的類型、來(lái)源、分化狀態(tài)等信息,為疾病的病理診斷等提供有價(jià)值的依據(jù)。免疫組化在神經(jīng)系統(tǒng)疾病診斷中,針對(duì)神經(jīng)遞質(zhì)受體、神經(jīng)纖維相關(guān)蛋白檢測(cè),需優(yōu)化樣本處理以保留抗原活性。

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一、主要步驟原理1.抗原-抗體特異性結(jié)合。一抗與組織中的目標(biāo)抗原結(jié)合,二抗與一抗特異性結(jié)合(通常二抗帶有可檢測(cè)標(biāo)記)。2.顯色反應(yīng)。標(biāo)記物與顯色底物反應(yīng)產(chǎn)生顏色變化,以顯示抗原位置和表達(dá)程度。二、操作流程1.樣本制備-石蠟切片脫蠟至水或冰凍切片固定。2.抗原修復(fù)-采用熱修復(fù)或酶修復(fù)方法,暴露抗原決定簇。3.阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶-用3%過(guò)氧化氫溶液處理切片,減少非特異性染色。4.一抗孵育-滴加適當(dāng)稀釋的一抗,濕盒中孵育,使一抗與抗原結(jié)合。5.二抗孵育-一抗孵育后清洗,滴加二抗,再次孵育,二抗識(shí)別一抗。6.顯色-根據(jù)標(biāo)記物不同選擇顯色底物,如DAB顯色,陽(yáng)性部位出現(xiàn)顏色變化。7.復(fù)染與封片-蘇木精復(fù)染細(xì)胞核后,脫水、透明、封片,便于觀察。免疫組化用于自身免疫病相關(guān)自身抗體檢測(cè),借助蛋白芯片技術(shù)高通量篩選,優(yōu)化抗體固定與信號(hào)放大體系。北京組織芯片免疫組化原理

免疫組化為疾病的有效診斷提供關(guān)鍵依據(jù)。北京組織芯片免疫組化原理

選擇抗體確保免疫組化的特異性和敏感性應(yīng)考慮以下因素:一是抗體的特異性。選擇只與目標(biāo)抗原結(jié)合而不與其他類似抗原發(fā)生交叉反應(yīng)的抗體,可減少非特異性染色。二是親和力。高親和力抗體能更牢固地與抗原結(jié)合,即使在較低濃度下也能獲得較好的染色效果。三是適用的組織類型。不同抗體對(duì)不同組織的適用性不同,要確保所選抗體適用于實(shí)驗(yàn)所用組織。四是抗體來(lái)源和質(zhì)量??煽康纳a(chǎn)廠家和良好的質(zhì)量控制可提高抗體的可靠性。五是稀釋度和效價(jià)。了解抗體的稀釋度和效價(jià),以在保證效果的同時(shí)降低成本。六是文獻(xiàn)參考。查閱相關(guān)文獻(xiàn),了解其他研究者在類似實(shí)驗(yàn)中使用的抗體及效果,可為選擇提供參考。北京組織芯片免疫組化原理