外泌體的制備

在血液和大多數(shù)體液（如尿液、腦脊液、唾液、胸腹腔積液、羊水和乳汁等）中均可檢測到外泌體。血液外泌體的檢測通常采用EDTA抗凝血分離的血漿，miRNA等一些微小RNA則采用血清樣本。泌尿系統(tǒng)中存在大量的RNA水解酶可降解尿液中的裸miRNAs，但外泌體外膜則可幫助RNA免于被降解，因此研究尿液外泌體miRNAs更具有應(yīng)用價(jià)值。相較于血清中相關(guān)miRNA的水平，腦脊液外泌體中的miR-21可作為膠質(zhì)瘤診斷和預(yù)后的指標(biāo)，特別對預(yù)測中流復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移具有價(jià)值。唾液樣本在安靜狀態(tài)下主要來源于舌下腺和頜下腺，刺激狀態(tài)下則主要來源于腮腺。近些年關(guān)于外泌體研究很普遍。外泌體的制備

外泌體是具有雙層脂膜的囊泡結(jié)構(gòu),其穩(wěn)定性較好,可保護(hù)內(nèi)部生物分子免受體液中各種酶的影響,從而保持其完整性和生物活性。外泌體被提取后一般懸浮于磷酸鹽緩沖液。目前,常用的儲(chǔ)存方法為冷凍保存,但是冷凍保存可能會(huì)導(dǎo)致外泌體形狀與物理性質(zhì)的改變,也可能導(dǎo)致多層囊泡的形成和聚集,反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致外泌體表面分子的生物特性、含量和標(biāo)志物組成發(fā)生變化。血清中包含外泌體在內(nèi)的細(xì)胞外囊泡DNA在不同儲(chǔ)存環(huán)境可保持穩(wěn)定,血漿存放于4°C時(shí)其RNA會(huì)明顯降解,在–20°C下長期保存也會(huì)導(dǎo)致血漿中外泌體總RNA降解,但miRNA卻十分穩(wěn)定,這也提示了外泌體miRNA作為生物標(biāo)志物的潛力。外泌體的制備活內(nèi)的外泌體動(dòng)態(tài)（哪個(gè)外泌體遷移至何處）也會(huì)成為今后需要努力研究的重要課題。

研究者利用電穿孔法對外泌體進(jìn)行DOX的負(fù)載，進(jìn)行體內(nèi)抗中流效果的研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，負(fù)載DOX的iRGD肽靶向性外泌體對中流的抑制效果遠(yuǎn)優(yōu)于單純的DOX。直接靜脈注射DOX，其不僅水溶性低，而且容易使DOX與血液中的蛋白結(jié)合，從而被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)識別捕獲，起不到理想的抗中流效果。而用iRGD肽靶向性的外泌體保護(hù)DOX，可以提高DOX水溶性，避免被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)捕捉，提高靶向性，從而降低由于用藥過量和非靶向性引起的毒性，起到更好的抗中流效果。

外泌體中存在著某些特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和多糖,基于抗原–抗體特異性識別和結(jié)合作用原理,可將外泌體從其他組分中分離出來。四次跨膜蛋白家族、脂膜、膜聯(lián)蛋白、上皮細(xì)胞黏附分子或肝素等都可以作為抗原,而捕獲外泌體的抗體可以附著在平板、磁珠、二氧化硅、樹脂、膜親和過濾器、纖維素濾膜、聚酰氨基胺樹狀聚合物表面和微流控器件上。常用方法有酶聯(lián)免疫吸附法和磁珠法等。酶聯(lián)免疫吸附法使用聚苯乙烯微孔板作為抗體附著介質(zhì),其結(jié)果用吸光度值表示,該方法可以快速分析已知表面生物標(biāo)志物的表達(dá),也可以瞬時(shí)讀出外泌體的產(chǎn)量和特異性。磁珠法多使用共價(jià)包覆鏈霉親和素的磁珠,與樣品一起孵育后可通過磁泳將被結(jié)合的外泌體從樣品組分中分離出來。鑒于微米級磁珠可賦予更大的接觸面積,該方法不jin具有高度特異性,還具有比超速離心更高的外泌體產(chǎn)率。干細(xì)胞外泌體可以有效活化提高細(xì)胞能量加速細(xì)胞排毒、淡化色斑。

外泌體（Exosome）是一種直徑為30-100nm的納米級脂質(zhì)包裹體結(jié)構(gòu)，內(nèi)部包裹了蛋白、mRNA和microRNA等物質(zhì)。外泌體由細(xì)胞分泌釋放出來，在血液等體液內(nèi)傳播，較后又可被其他細(xì)胞吞噬，是細(xì)胞間通訊的重要介質(zhì)。源自于間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)分泌的外泌體，富含一百多種胞外基質(zhì)蛋白，mRNA信使核糖核酸和多重生長因子。在臨床上，干細(xì)胞外泌體主要治理燒傷、燙傷、皮膚潰瘍，再生健康皮膚；在護(hù)膚方面，主要是對外傷受損、衰老中毒皮膚進(jìn)行修復(fù)，比較全的調(diào)理皮膚、改善膚質(zhì)，令肌膚恢復(fù)年輕、健康的狀態(tài)。在過去幾年中，有幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室報(bào)道了各種細(xì)胞類型的外泌體分泌，并討論了其潛在的生物學(xué)功能。外泌體是如何產(chǎn)生的

高濃度集聚誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的TNF-α，可使類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎惡化。外泌體的制備

外泌體作為細(xì)胞外囊泡的一個(gè)亞群,直徑集中于30~150nm。目前,基于粒徑大小分離外泌體的方法有超濾法、尺寸排除色譜法、靜水過濾透析法和非對稱場流分離法等。超濾法利用不同孔徑的濾膜,對樣品進(jìn)行選擇性分離以獲得外泌體,一般分為壓力超濾和離心超濾。其中離心超濾效果更好,不jin能減輕力對外泌體的破壞,而且可通過增大離心力和延長離心時(shí)間提高外泌體產(chǎn)物濃度。但離心力過大或離心時(shí)間過長均有可能導(dǎo)致超濾膜或外泌體破裂。此外,超濾法可以和切向流過濾法、微控流法、超速離心法或凝膠過濾色譜法等方法結(jié)合進(jìn)一步提高分離效率。外泌體的制備

上海宇玫博生物科技有限公司坐落在上海市閔行區(qū)滬青平公路277號5樓，是一家專業(yè)的一般項(xiàng)目：技術(shù)服務(wù)、技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)交流、技術(shù)轉(zhuǎn)讓、技術(shù)推廣；生物基材料技術(shù)研發(fā)；生物基材料銷售；五金產(chǎn)品批發(fā)；電子元器件批發(fā)；計(jì)算機(jī)軟硬件及輔助設(shè)備批發(fā)；工藝美術(shù)品及收藏品批發(fā)（象牙及其制品除外）；化工產(chǎn)品銷售（不含許可類化工產(chǎn)品）；實(shí)驗(yàn)分析儀器銷售；環(huán)境保護(hù)設(shè)備銷售；電力電子元器件銷售；電子產(chǎn)品銷售；機(jī)械設(shè)備銷售；儀器儀表銷售；辦公用品銷售；塑料制品銷售；橡膠制品銷售；勞動(dòng)保護(hù)用品銷售。（除依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目外，憑營業(yè)執(zhí)照依法自主開展經(jīng)營活動(dòng)）許可項(xiàng)目：貨物進(jìn)出口；技術(shù)進(jìn)出口。（依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目，經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活動(dòng)，具體經(jīng)營項(xiàng)目以相關(guān)部門批準(zhǔn)文件或許可證件為準(zhǔn)）公司。公司目前擁有專業(yè)的技術(shù)員工，為員工提供廣闊的發(fā)展平臺(tái)與成長空間，為客戶提供高質(zhì)的產(chǎn)品服務(wù)，深受員工與客戶好評。公司業(yè)務(wù)范圍主要包括：外泌體提取試劑盒，外泌體，外泌體檢測，外泌體提取等。公司奉行顧客至上、質(zhì)量為本的經(jīng)營宗旨，深受客戶好評。公司力求給客戶提供全數(shù)良好服務(wù)，我們相信誠實(shí)正直、開拓進(jìn)取地為公司發(fā)展做正確的事情，將為公司和個(gè)人帶來共同的利益和進(jìn)步。經(jīng)過幾年的發(fā)展，已成為外泌體提取試劑盒，外泌體，外泌體檢測，外泌體提取行業(yè)出名企業(yè)。