干細胞外泌體提取

卵巢ai患者與良性卵巢疾病患者血清外泌體中的miRNA表達譜有明顯差異，表明血清外泌體中的miRNA可以作為卵巢ai活檢的替代診斷標志物。多項研究表明外泌體中的miR-21在包括大多數(shù)ai癥的多種病理條件下過度表達。尿液外泌體來源于泌尿系統(tǒng)相關的各種細胞，包括腎小球足細胞、腎小管細胞和膀胱等，因此尿液外泌體數(shù)目、形態(tài)和生化性質(zhì)的改變往往反映泌尿系統(tǒng)疾病。通過對前列腺ai癥患者尿液中的外泌體進行轉(zhuǎn)錄組分析，鑒定到兩種已知的前列腺ai癥標志物PCA-3(prostatecanceranti[1]gen3，前列腺ai抗原3)和TMPRSS2:ERG(thefusiongeneoftransmembraneproteaseserinestoERG，跨膜蛋白酶絲氨酸與ERG的融合基因)，表明尿液外泌體具有診斷和監(jiān)測ai癥患者狀態(tài)的潛力。細胞分泌到細胞外環(huán)境中分別稱為外泌體和微泡的細胞外膜泡。干細胞外泌體提取

研究采用蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀，極大地降低了外泌體的提取成本，且獲得的外泌體不僅表達外泌體公認的標志蛋白分子，同時也表達胎盤特異性蛋白分子，證明通過這種方法獲得的外泌體是胎盤來源外泌體。通過蔗糖密度梯度離心后得到的外泌體沉淀經(jīng)蛋白質(zhì)SDS-PAGE膠電泳，銀染后可見各蛋白分子條帶清晰可見，動態(tài)光散射分析粒徑，結果顯示獲得的外泌體顆粒粒徑大部分分布于28-91nm之間，與文獻報道外泌體顆粒大小相一致。胎盤外泌體經(jīng)過PKH67熒光染料染色后，與細胞共孵育，熒光顯微鏡下觀察外泌體具備進入細胞的活性，進一步驗證了我們應用此種改良的分離方法可有效的獲得胎盤來源的外泌體。本研究通過蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀成功分離得到母體血清中胎盤來源外泌體，并從蛋白標志分子、電鏡、粒徑及分布、進入細胞活性四方面對其進行了鑒定，為研究妊娠期間胎盤外泌體在正常妊娠及胎盤源性并發(fā)癥中的作用奠定了基礎。鼻腔灌洗液外泌體PKH67隨著EV研究倍受世界矚目，各國啟動了大型研究項目。

流式細胞技術針對外泌體的表面抗原標記物進行檢測，能夠?qū)崿F(xiàn)外泌體的高通量、多通道分析。但是由于外泌體的粒徑小、折射率低，所以采用常規(guī)的流式細胞儀進行檢測時往往需要將外泌體與beads連接以增大表面積、增強反射，操作耗時又費力。Tian等搭建了一種高靈敏度的流式細胞儀(HSFCM)，將可檢測的外泌體粒徑降至40nm，能夠在不連接beads的情況下實現(xiàn)每分鐘10000個外泌體的檢測，并且能夠結合免疫熒光的方法進行外泌體標志蛋白質(zhì)的定量檢測，目前該儀器已商品化。

妊娠期間胎盤可釋放外泌體到全身循環(huán)系統(tǒng)，參與妊娠期間母胎界面的免疫調(diào)節(jié)、子宮螺旋動脈重塑和胎盤屏障的形成等重要事件調(diào)控，在正常妊娠過程維持中發(fā)揮重要作用。而很多妊娠并發(fā)癥，如子癇前期等胎盤功能紊亂相關疾病的發(fā)生，很可能與胎盤來源外泌體異常密切相關。目前外泌體分離方法主要包括：多步差速離心、蔗糖密度梯度離心、試劑盒沉淀、免疫磁珠分選、色譜法、過濾離心等方法。其中，多步差速離心是制備外泌體的經(jīng)典方法，該方法是根據(jù)外泌體的沉降系數(shù)差速離心將其分離出來，然而妊娠期母血清中除含有胎盤組織釋放的外泌體，還包括許多其他種類細胞釋放的外泌體，如樹突狀細胞、淋巴細胞等，且血清中可能還存在一些大小類似的物質(zhì)混雜其中，這些因素都會影響胎盤來源外泌體的分離純化。外泌體在心臟修復中起著關鍵作用。

外泌體可以調(diào)控星狀細胞（HSC）活化，并參與HSC細胞遷移的進程?；罨腍SC來源的外泌體中，CCN2表達升高，Twist1和miR-214表達被抑制，這些外泌體還能誘導靜止的HSC細胞表達CCN2。此外，Twist1可以誘導miR-214表達從而抑制CCN2的表達。CCL4處理的外泌體和外泌體SK1/S1P會誘導HSC遷移。MSC分泌的外泌體可以有效減緩肝纖維化過程，這可能成為肝纖維化治理的靶點。研究顯示，CP-MSC來源的外泌體miR-125b可以抑制Hedgehog信號通路的活化，抑制纖維化；而HUC-MSC分泌的外泌體可以逆轉(zhuǎn)細胞形態(tài)和TGF-β1誘導的EMT進程，減弱肝纖維化。外泌體可以作為藥物治理的遞送系統(tǒng)。腹水提取試劑盒公司

利用外泌體將siRNA和抗藥劑等運輸?shù)侥繕思毎?。干細胞外泌體提取

Pascucci等將包含有紫杉醇的間充質(zhì)細胞來源外泌體與胰腺ai細胞共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)裝載紫杉醇的間充質(zhì)細胞外泌體具有很強的抗中流增殖效果。Tian等為降低免疫原性與毒性，采用小鼠未成熟樹突狀細胞所產(chǎn)生外泌體作為藥物載體。同時為實現(xiàn)外泌體運輸?shù)陌邢蛐?，使細胞表達能夠識別乳腺ai細胞的外泌體膜蛋白Lamp2b(lysosomeasso[1]ciatedmembraneglycoprotein2b，溶酶體相關膜蛋白2)。并采用電穿孔的方法，在純化所得的小鼠未成熟樹突狀細胞外泌體中載入阿霉素。結果表明該外泌體能夠特異性的將阿霉素傳遞給中流組織，抑制中流生長且無明顯毒性。干細胞外泌體提取

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