HE染色原理:易于被堿性或酸性染料著色的性質(zhì)稱為嗜堿性(basophilia)和嗜酸性(acidophilia);而對堿性染料和酸性染料親和力都比較弱的現(xiàn)象稱為中性(neutrophilia)。構(gòu)成組織內(nèi)蛋白質(zhì)的氨基酸的種類很多,它們有不同的等電點。在普通染色法中,染色液的酸堿度為pH6左右,細胞內(nèi)的酸性物質(zhì)如細胞核的染色質(zhì)、腺細胞和神經(jīng)細胞內(nèi)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及透明軟骨基質(zhì)等均被堿性染料染色,這些物質(zhì)稱為嗜堿性。而細胞質(zhì)中的其它蛋白質(zhì)如紅細胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色,這些物質(zhì)稱為嗜酸型。如果改變?nèi)旧旱乃釅A度,pH值升高時,則原來被酸性染料染色的物質(zhì)可變?yōu)槭葔A性;pH值降低時,原來被堿性染料染色的物質(zhì)則可變?yōu)槭人嵝?。所以說染色液的pH值可以影響染色的反應(yīng)。脫氧核糖核酸(DNA)兩條鏈上的磷酸基向外,帶負電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍色,所以細胞核被染成藍色。腦組織HE染色如何觀察?上海推薦的HE染色公司
HE染色主要是為通細胞及胞核形態(tài)、大小來區(qū)別各種細胞的,并不是直接通過顏色來區(qū)分的,HE染色細胞壞死的三種改變:(1)細胞核的改變:這是細胞壞死的主要形態(tài)標志,表現(xiàn)為核濃縮,核碎裂,核溶解。(2)細胞質(zhì)的改變:由于胞質(zhì)發(fā)生凝固或溶解,HE染色呈深紅色顆粒狀,如肝細胞壞死出現(xiàn)的嗜酸性小體醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理。(3)間質(zhì)的改變:由于各種溶解酶的作用,基質(zhì)崩解、膠原纖維腫脹、斷裂或液化,與壞死的細胞融合成一片,呈紅染的顆粒狀無結(jié)構(gòu)物質(zhì)。南京英瀚斯生物河南靠譜的HE染色價格HE染色技術(shù)幾種常見的染色問題。
HE染色常見問題:Q3:細胞核染色過淺,顏色暗淡答:切片在蘇木素染液中停留過短,或蘇木素過度氧化失效,或分化時間太長。對策:重新染色。將組織切片放入0.01%氫氧化鈉、0.5%氨水、飽和的碳酸氫鈉溶液、乙醇溶液,每個3-5min即可,接著重新染色??梢赃m當(dāng)?shù)亟M織的嗜堿性以增強核染色,如Zenker液固定的切片可放入5%碳酸氫鈉溶液中3h,自來水沖洗5-10min染色,或Bouin液固定的切片可放入5%碳酸氫鈉溶液中1h,自來水沖洗10min染色。Q4:細胞核染色過深,胞漿著藍色答:切片在蘇木素染液中停留過長;或切片太厚;或分化時間太短。這種情況首先鏡下看看切片厚度(比較好厚度1-2層細胞核),要么重新染色,要么重新制片。南京英瀚斯,專業(yè)的病理染色實驗服務(wù)平臺。
HE染色法,。蘇木精染液為堿 ,主要使細胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍色 ;伊紅為酸染料 ,主要使細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著紅色。而線粒體用HE染色不可見,活細胞通常要求活細胞近似無色線粒體需要用健那綠來染色,再在高倍鏡下觀察。從人或動物新鮮尸體上取下塊(一般厚度不超過0.5厘米)投入預(yù)先配好的固定液中(10%福爾馬林,Bouin氏固定液等)使、細胞的蛋白質(zhì)變凝固,以防止細胞后的自溶或細菌的分解,從而保持細胞本來的形態(tài)結(jié)構(gòu)。一般用由低濃度到高濃度酒精作脫水劑,逐漸脫去塊中的水份。再將塊置于既溶于酒精,又溶于石蠟的透明劑二甲苯中透明,以二甲苯替換出塊的中酒精,才能浸蠟包埋。什么是HE染色,HE染色實驗的目的。
HE染色常見問題:切片染色不均勻,有片狀的弱著**存在答:(1)取材時組織太厚,固定過久,導(dǎo)致深部組織固定不佳,而表淺組織過度固定,而透明、脫水、浸蠟均是如此,這樣在后期染色時就會出現(xiàn)染色不均勻。應(yīng)該將厚的組織剖開固定。(2)制片過程有問題,切片厚薄不一,或者有刀痕,或組織與玻片間存在氣泡。同一張切片厚薄不一,一般都是在制片時,刀片固定不佳或刀片鈍或刀片與組織角度不佳(一般比較好角度為5°)(3)脫蠟前未烘烤,脫蠟時間過短或脫蠟液使用過久,導(dǎo)致脫蠟不徹底。(4)染色液過少,著色不均勻;或染色時部分組織干涸而另一部分濕潤,這樣會導(dǎo)致組織吸附染料的能力不一。(5)分化不當(dāng)。南京英瀚斯,專業(yè)的病理染色實驗服務(wù)平臺。HE染色,南京英瀚斯,專業(yè)的實驗外包公司。上海推薦的HE染色公司
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HE染色常見問題:成片的染色模糊不清,灰染答:(1)組織未及時固定,部分自溶;或固定不佳,深部組織未處理到。這種只能重新固定了。(2)盡管乙醇也是一種固定液,但盡量少用或不用,因為其會導(dǎo)致組織發(fā)硬變脆,染色效果不好。(3)包埋時蠟的溫度過高,或切片后烤片時間和溫度過久過高都不好,可能會導(dǎo)致無法染色。(4)脫蠟不徹底;染料有問題;分化過度導(dǎo)致的顏色變淡,鏡下組織界限不清;染完后的脫水和透明不佳,水霧殘留在組織上。(5)通風(fēng)窗中(防止空氣中的水霧),戴口罩操作封片(減少哈氣帶來的水霧)。上海推薦的HE染色公司