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二代測(cè)序——基因組測(cè)序該測(cè)幾個(gè)G?③
基因組測(cè)序所需的測(cè)序量通常用數(shù)據(jù)量來(lái)衡量,一般以 G 為單位,不同的測(cè)序目的和基因組類(lèi)型所需要的測(cè)序量有所不同。
微生物基因組測(cè)序細(xì)菌基因組:
細(xì)菌基因組
相對(duì)較小,一般在1M-10M之間,測(cè)序深度通常在50X-100X左右,數(shù)據(jù)量在0.05G-1G左右即可滿足基本的基因組組裝和變異檢測(cè)需求。
***基因組:***基因組大小差異較大,從幾M到上百M(fèi)都有。對(duì)于較小的***基因組,測(cè)序深度在30X-50X左右,數(shù)據(jù)量在0.1G-5G之間;而對(duì)于較大的***基因組,可能需要適當(dāng)降低測(cè)序深度至10X-20X,數(shù)據(jù)量在1G-20G左右。 二代測(cè)序結(jié)果怎么分析?甘肅二代測(cè)序檢測(cè)
二代測(cè)序技術(shù)的一些***研究進(jìn)展①
疾病診斷與***領(lǐng)域 :消化系統(tǒng)**標(biāo)志物檢測(cè):2024 年的**共識(shí)指出,二代測(cè)序(NGS)技術(shù)可同時(shí)檢測(cè)消化系統(tǒng)**中的多種標(biāo)志物,如錯(cuò)配修復(fù)基因變異、微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MSI)狀態(tài)、**突變負(fù)荷(TMB)等,為**的精細(xì)***提供了更***、準(zhǔn)確的信息。例如,MSI-H 的實(shí)體瘤患者可使用帕博利珠單抗進(jìn)行***,而 NGS 技術(shù)能更好地檢測(cè) MSI 狀態(tài)及相關(guān)耐藥機(jī)制。
**液體活檢:通過(guò)檢測(cè)血液中的循環(huán)** DNA(ctDNA)等標(biāo)志物,實(shí)現(xiàn)對(duì)**的早期篩查、診斷和***監(jiān)測(cè)。NGS 技術(shù)能夠更敏感地檢測(cè)到 ctDNA 中的基因突變和變異,為**的無(wú)創(chuàng)診斷提供了有力支持。
南京二代測(cè)序公司二代測(cè)序需要多久才能完成?
二代測(cè)序的建庫(kù)步驟②
二、片段化處理
物理方法:超聲破碎是常用的物理片段化方法。它通過(guò)超聲波的高頻振動(dòng)將核酸分子打斷成合適大小的片段。例如,在一些文庫(kù)構(gòu)建中,將DNA樣本置于超聲破碎儀中,通過(guò)調(diào)整超聲功率和時(shí)間,可以將DNA片段化到幾百堿基對(duì)(bp)的長(zhǎng)度范圍,一般在150-300bp左右,這符合二代測(cè)序的讀長(zhǎng)要求。超聲破碎的優(yōu)點(diǎn)是片段大小比較均勻,但操作需要優(yōu)化超聲參數(shù),否則可能會(huì)導(dǎo)致過(guò)度破碎或片段大小不一致。
酶切方法:利用限制性內(nèi)切酶進(jìn)行片段化。限制性內(nèi)切酶能夠識(shí)別特定的DNA序列,并在這些序列處切割DNA。例如,用EcoRⅠ酶可以識(shí)別GAATTC序列并進(jìn)行切割。通過(guò)選擇合適的限制性內(nèi)切酶組合,可以將DNA切割成期望大小的片段。不過(guò),這種方法的局限性在于酶切位點(diǎn)的限制,可能無(wú)法獲得理想的片段大小分布,而且可能會(huì)引入酶切偏好性。
①二代測(cè)序一般多久出結(jié)果?
二代測(cè)序(Next-GenerationSequencing,NGS)出結(jié)果的時(shí)間會(huì)受到多種因素的影響,一般在數(shù)天到數(shù)周不等。
1、樣本類(lèi)型和質(zhì)量
不同的樣本類(lèi)型處理時(shí)間不同。例如,血液樣本相對(duì)容易處理,提取DNA的過(guò)程比較常規(guī)。如果是組織樣本,可能需要先進(jìn)行樣本的解離等復(fù)雜操作。如果樣本質(zhì)量高,DNA提取和文庫(kù)構(gòu)建等前期工作會(huì)比較順利,能加快整體進(jìn)程。但如果樣本量少或者DNA有降解等質(zhì)量問(wèn)題,可能需要重新提取樣本或者進(jìn)行DNA修復(fù)等操作,這會(huì)**延長(zhǎng)時(shí)間。例如,對(duì)于新鮮血液樣本,DNA提取可能在1-2天內(nèi)完成;而對(duì)于一些福爾馬林固定石蠟包埋(FFPE)組織樣本,可能需要3-5天來(lái)完成高質(zhì)量DNA的提取和后續(xù)的優(yōu)化處理。
一代、二代、三代測(cè)序的區(qū)別是什么?
②二代測(cè)序一般多久出結(jié)果?
2、測(cè)序平臺(tái)和通量
不同的二代測(cè)序平臺(tái)有不同的通量(一次能測(cè)序的樣本數(shù)量和數(shù)據(jù)量)和測(cè)序速度。一些高通量的測(cè)序平臺(tái),如IlluminaNovaSeq系列,能夠在較短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生大量的數(shù)據(jù)。但如果使用的是通量較低的小型測(cè)序儀,或者測(cè)序儀的運(yùn)行時(shí)間被多個(gè)項(xiàng)目分配,都會(huì)影響結(jié)果產(chǎn)出的時(shí)間。例如,在高通量平臺(tái)上進(jìn)行全基因組測(cè)序,測(cè)序運(yùn)行時(shí)間可能在2-7天左右,具體取決于測(cè)序深度等因素。而對(duì)于一些小型臺(tái)式測(cè)序儀進(jìn)行靶向基因測(cè)序,運(yùn)行時(shí)間可能在1-3天。 一代和二代測(cè)序的區(qū)別?遼寧嘉安健達(dá)二代測(cè)序檢測(cè)
二代測(cè)序的工作原理是什么?甘肅二代測(cè)序檢測(cè)
③二代測(cè)序一般多久出結(jié)果?
3、測(cè)序深度和覆蓋度要求
測(cè)序深度是指每個(gè)堿基被測(cè)序的平均次數(shù),覆蓋度是指測(cè)序獲得的堿基占整個(gè)基因組(或目標(biāo)區(qū)域)的比例。如果要求高測(cè)序深度和高覆蓋度,比如進(jìn)行**全基因組的深度測(cè)序(測(cè)序深度可能達(dá)到100X甚至更高),需要更長(zhǎng)的測(cè)序時(shí)間來(lái)獲取足夠的數(shù)據(jù),并且后續(xù)的數(shù)據(jù)處理和分析也會(huì)更復(fù)雜。而對(duì)于一些簡(jiǎn)單的基因篩查項(xiàng)目,測(cè)序深度要求較低(如10X-20X),相應(yīng)的測(cè)序和分析時(shí)間會(huì)縮短。例如,低深度全外顯子測(cè)序用于篩查常見(jiàn)突變,測(cè)序可能在3-5天完成;而高深度的全外顯子測(cè)序用于檢測(cè)低頻體細(xì)胞突變,可能需要7-10天甚至更久。 甘肅二代測(cè)序檢測(cè)