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來源: 發(fā)布時間:2024-05-28

當用于貼壁細胞培養(yǎng)時,膜上需涂鋪胞外基質(zhì) MF-Millipore?膜(混合纖維素酯類)* 用于特殊解剖和功能極化不含Triton的混合纖維素酯膜能用于細胞表面受體、體外毒理學、微生物吸附和極化吸收分析。與塑料培養(yǎng)皿相比,細胞在此膜上生長密度可提高 2到3倍,而且具有良好的細胞形態(tài) Isopore?膜(聚碳酸酯廣用于貼壁細胞的生長,無需胞外基質(zhì) 經(jīng)組織培養(yǎng)處理的親水性聚碳酸酯膜允許貼壁細胞在無胞外基質(zhì)(ECM)的條件下生長。尤其推薦用于轉(zhuǎn)運/滲透性研究??商峁?種不同大小孔徑的插入式細胞培養(yǎng)小室上海益啟生物酶訂購方便。徐匯區(qū)培養(yǎng)基細胞培養(yǎng)訂購

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取上述200μL細胞液加入小室,下室(培養(yǎng)板)加入900L含有10% FBS的培養(yǎng)基。不同規(guī)格的小室和培養(yǎng)板所加的體積不同,具體參考Millicell?產(chǎn)品說明書。37°C孵育24至72小時,依據(jù)**細胞類型而定。孵育結(jié)束,小心取出細胞小室,吸掉小室上層培養(yǎng)液,PBS清洗一遍,70%酒精或者4%多聚甲醛固定5min,0.5%結(jié)晶紫(2%乙醇或PBS溶解)染色20min,然后進行第8步或者第9步。PBS清洗兩次以去除多余的染料,立即用棉簽擦去濾膜上層的細胞,自然靜置風干。顯微鏡下觀察濾膜下層的細胞,隨機選取不同的視野計數(shù)并算平均值。結(jié)晶紫溶解濾膜下層細胞,然后用33%醋酸脫色,將結(jié)晶紫完全洗脫下來,洗脫液可在酶標儀上570nm讀取OD值。這種方法可以避免視野下細胞穿透不均勻帶來的誤差。上海益啟生物的添加劑詢價公司電話。

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本實驗技術要點: **細胞比較好經(jīng)過饑餓處理,并且小室上下培養(yǎng)基的FBS有濃度差,以保證細胞可以穿透基質(zhì)膠。鋪細胞要均勻,濾膜底部不能產(chǎn)生氣泡,否則會導致細胞染色不均勻,或者局部細胞無法穿透。根據(jù)細胞類型選擇合適的膜孔徑和膜類型。PET膜兼容***,適合絕大多數(shù)種類的細胞。侵襲實驗的細胞密度比較大,一般在1 0 6cells/cm2左右,不同**細胞的接種密度、培養(yǎng)時間不同,需要參考文獻和實驗摸索。細胞太少,遷移不過去;細胞太多,可能導致正常組和實驗組無差異。徐匯區(qū)培養(yǎng)基細胞培養(yǎng)訂購